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T6 IBMC_2026_1c_Proteinas 3 Alejandra Guberman (virtual) — Transcript

by Alejandro Colman-Lerner · 26,818 words · 4,270 segments · language en · Watch on YouTube

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0:03Bueno, entonces compartimos pantalla,
0:05arrancamos y cualquier duda me van
0:08interrumpiendo.
0:17Bueno, ¿ven?
0:21Sí, profe.
0:22Perfecto.
0:24Genial. Entonces,
0:26arrancamos la última clase de proteínas.
0:30Eh,
0:32esperen que ahí está. ¿Qué vamos a ver
0:36hoy? lo que nos quedó sin ver de la
0:38clase pasada, que en realidad es tema
0:40que engancha todo con con el tema de
0:44cómo estudiamos a las proteínas, eh,
0:47pero no nos entró la clase pasada, así
0:48que lo terminamos hoy y vamos a ver
0:52enzimas y algunas cositas extra que
0:55están buenísimas, así que esperemos que
0:57lleguemos con pilas al final de la
0:58clase. Bueno, otra vez el aviso para que
1:02no crean que me que hice ninguno de los
1:04dibujitos yo, sacadas del Albert, del
1:05Watson. Hay algunas algunos dibujitos
1:08sacadas sacados de las ameva sisters que
1:12son dibujitos muy muy lindos y otros los
1:14hizo Lucas Cosa, que es mi hijo y
1:17biólogo y docente acá en la FA. Ya van
1:19ir viéndolos. Bueno, mini repasito.
1:22Habíamos visto la clase pasada que
1:25podíamos estudiar a las proteínas con
1:26una técnica que se llama electroforesis
1:28y teníamos electroforesis nativas y
1:31electroforesis
1:33que no eran nativas y les hacíamos algún
1:35tratamiento a las proteínas que afectaba
1:37la estructura. Esto lo vimos un poquito
1:39rápido al final, esto lo vimos en mayor
1:42detalle y es una técnica que se usa
1:44muchísimo y van a tener un montón de
1:45problemas en la guía de seminarios.
1:49Entonces, si queremos separar a las
1:51proteínas por su peso molecular, hay que
1:52darles a todas la misma forma y la misma
1:54relación carga masa, que fue algo que
1:56charlamos bastante la la clase pasada.
2:00Y cómo podíamos hacerlo? Hacíamos esto
2:03de tratar a las proteínas con este
2:06detergente que se llama SDS, que que es
2:09este que está acá, que las cubre todas,
2:12todas. eh
2:15la las desnaturaliza
2:18junto con el calor que rompe las uniones
2:20débiles, el detergente se une a las
2:22partes hidrofóbicas y tenemos que
2:24loquear toda la proteína rodeada con SDS
2:27y si además le ponemos
2:28betamercaptetanol, rompemos los puentes
2:30de sulfuro. Entonces, el SDS Page con
2:34betamercapto etanol, que incluye esto,
2:37nos plancha completamente las proteínas
2:38y además las disocia en si tienen
2:41diferentes subunidades, rompe todas las
2:43uniones débiles o beta y o puente y
2:46sulfuro y nos quedan
2:49todas rodeadas de carga negativa, por lo
2:52que la relación carga masa se hace
2:54constante. ¿Sí?
2:56Y entonces hacíamos un
2:59eh los pasos que que tenía la
3:02electroforesis era preparar la muestra
3:04con el buffer de siembra y todo lo que
3:07tenía agregado que tenía el azul de
3:09bromofenol que ya se los agregué en la
3:11diapo que la otra vez no estaba escrito,
3:14y el glicerol para poder aumentar la
3:16densidad y poder sembrar en el fondo de
3:17los wels la el detergente, el betamerco
3:21y el calor. Sí. Y entonces una vez que
3:24pasaba todo eso, quedaban las proteínas,
3:26fíjense acá, eh, como lineales, entonces
3:30todas tienen la misma forma y rodeadas
3:33de carga negativa y además separadas las
3:35subunidades. En este ejemplo teníamos
3:36una con dos subunidades y otra eh
3:40compuesta por una única subunidad.
3:43Sembrábamos el gel, lo poníamos a
3:45correr, ¿sí? todo en buffer y eso y una
3:48vez que terminaba podíamos teñirlo con
3:50un colorante que se llama
3:53Kumas Blue o hay otras tinciones azul de
3:55Kumasi y ahí ese colorante era algo como
3:59inespecífico, se tiñe todas las
4:01proteínas y las podemos ver. En este
4:04caso, por ejemplo, debemos tener como
4:05algo que viene de haber roto células y
4:08tenemos un montón, un montón, un montón
4:09de proteínas. De hecho, cada una de
4:11estas bandas no necesariamente es una
4:13sola proteína, sino que deben ser un
4:15montón de proteínas que tengan más o
4:17menos ese mismo tamaño y corren ahí
4:20todas juntas. Pero cuando tenemos algo
4:22que es como una única banda es porque la
4:23proteína está purificada. ¿Sí? Y este
4:27era el marker, ¿se acuerdan? Entonces,
4:29después uno
4:31le corta esta esta partecita al gel y le
4:35le numera las calles, identifica las
4:37bandas del marcador de peso molecular y
4:41midiendo cuánto migró cada banda
4:44respecto cuánto migró al frente, puede
4:46ir a puede hacer esta curva graficando
4:49el logaritmo del tamaño respecto eh la
4:52distancia esa relativa de migración y
4:55uno puede calcular con bastante precis
4:58el tamaño de una proteína incógnita
5:00usando esta curva, ¿sí? Que es lineal
5:04cuando uno grafica el logaritmo del
5:05tamaño
5:07de la proteína del mar.
5:10Bueno, ya habíamos dicho que acá tenimos
5:13todas las proteínas, pero si queremos
5:14ver una proteína en particular, no
5:16podemos usar el kumasi blue si tenemos
5:20nuestra proteína mezclada con un montón
5:21de otras cosas. Entonces, ahí es donde
5:24hacemos una técnica diferente que tiene
5:27la primera parte igual a lo que les
5:29acabo de contar, pero en vez de teñir
5:31las proteínas con azul de cumas, vamos a
5:33usar anticuerpos que reconozcan
5:35específicamente y entonces primero se
5:38hace el SDC page, pero en vez de
5:40teñirlas las transferíamos a una
5:42membrana y las revelábamos con el
5:43anticuerpo específico. Y ahí viene una
5:46pregunta que me habían hecho antes de
5:48que empecemos la clase, que era cómo es
5:50que hacíamos lo del anticuerpo primario
5:52y el secundario. Y acá con el dibujito
5:55lo van a ver mejor. Una vez que tenemos
5:57e las proteínas transferidas a la
5:59membrana, acuérdense que acá están todas
6:01dibujadas, pero en realidad no están
6:02teñidas. Imaginemos que es esto está
6:05dibujado así para que uno se imagine que
6:07están todas ahí, pero
6:10es esa membrana la vamos a a
6:15poner. Hay diferentes formas de de
6:18hacerlo, pero las podríamos poner como
6:20si fuese en un tapercito al que le
6:21ponemos una solución que tiene el
6:23anticuerpo. O a veces uno arma bolsitas
6:27selladas donde pone la solución con
6:29anticuerpo y así puede ahorrar y usar
6:32menos cantidad porque los anticuerpos
6:33son algo que es caro. Depende del
6:35anticuerpo que tenga puede ser muy caro.
6:38Es más, uno en general a veces ni
6:40siquiera usa la membrana entera, sino
6:41que corta un pedacito. Pero en general
6:43uno tiene que primero mirar con la
6:44membrana entera para asegurarse que el
6:46anticuerpo realmente reconoce lo que uno
6:48quiere. Pero si ya lo tiene supercocido,
6:51muchas veces uno corta y solo revela la
6:53parte del tamaño que que uno sabe que
6:55está su proteína, pero para eso lo tiene
6:57que tener chequeado que ese anticuerpo
6:59no reconozca otras cosas en específicas.
7:03Bueno, cuestión que eso que pones,
7:05imaginemos que estamos con la membrana
7:06entera en un taper, le ponemos una
7:08solución que tiene el anticuerpo
7:10primario, lo dejamos incubando un
7:12tiempo, a veces, no sé, varias horas o
7:14toda la noche, depende el anticuerpo.
7:17Después lo sacamos, le tenemos que hacer
7:19unos lavados para sacar todo el
7:21anticuerpo que quedó medio enganchado
7:23más o menos, pero no específicamente
7:27y entonces solo va a quedar el que está
7:28específicamente pegado en mi proteína. Y
7:31después de hacerlo un par de lavados,
7:33ahí le pongo un anticuerpo,
7:35el la solución del anticuerpo
7:37secundario, de la misma manera que había
7:38puesto el anticuerpo primario. Lo dejo
7:40un rato. El anticuerpo secundario
7:43también se va a enganchar un poco por
7:45todos lados, pero más en la parte donde
7:48está el anticuerpo primario. Vuelvo a
7:51hacer unos lavaditos para sacar el que
7:52está medio suelto por ahí y que quede
7:54solo el que está interactuando
7:56específicamente con el anticuerpo
7:58primario. Y ahí ya lo revelo y lo revelo
8:02se usando lo que tenga que usar según
8:05qué tenía acá atrás o qué tenía
8:07enganchado mi anticuerpo secundario, si
8:10era un anticuerpo que tenía una enzima o
8:13si era un anticuerpo que tenía un
8:15fluoróforo. van a ser diferentes las
8:17formas de
8:20revelarlo. Y aparte, acuérdense que esto
8:22de tener el anticuerpo secundario nos
8:24daba varias ventajas y una de ellas es
8:26que amplifica bastante la señal respecto
8:29a si tuviese marcado el anticuerpo
8:31primario, porque muchas moléculas de
8:33anticuerpo secundario pueden reconocer
8:34al primario. Sí.
8:37No sé si la duda que me habían
8:38preguntado y que yo dije, después le
8:39explico con el dibujito quedó clara
8:41ahora de cómo se ponía lo del anticuerpo
8:43secundario.
8:46Sí, sí, profe, gracias. Excelente.
8:50Bueno, y habíamos visto este ejemplo que
8:52no lo vamos a ver ahora en detalle
8:54porque eh ya lo vimos mucho tiempo la
8:56clase pasada,
9:00pero solo para recordar que si teníamos
9:03modificaciones postraduccionales en la
9:06proteína, a lo mejor se le alteraba la
9:07movilidad. se dice como que tiene
9:11una movilidad electroforética diferente
9:14a la proteína nativa sin ninguna
9:16modificación postraduccional. Y acá
9:18habíamos visto con este ejemplo que de
9:20paso aproveché para contarles un poquito
9:22cómo se hacía un experimento de western
9:23blood
9:25partiendo desde el principio que uno
9:26tiene un con células a las que le hace
9:29un estímulo y todo eso y después le
9:31rompe esas células y se queda con todas
9:33las proteínas y las corre en un S de ese
9:36pecho y después revela la membrana con
9:38lo que uno quiera. Y entonces en este
9:40caso veíamos que el mismo anticuerpo en
9:42un caso o en el otro reconocía una banda
9:44que tenía un poquitito de una movilidad
9:47un poquito distinta. Y en este caso lo
9:50que pasó fue que el en esta en esta
9:54proteína esta modificación que es esa
9:56fosforilación le hace un retraso en la
9:59movilidad electroforética. otros otras
10:02veces no le puede no pasarle nada y
10:04otras veces puede hacer un retraso mucho
10:05más grande, pueden pasar diferentes
10:06cosas.
10:08Y también les conté para aproveché este
10:11ejemplo para decirles, fíjense que
10:13tenemos anticuerpos tan específicos que
10:15podemos o reconocer a toda la proteína,
10:18va a la proteína en alguna región donde
10:21no me doy cuenta si está fosforilada o
10:23no. Y entonces en este caso se llamaba
10:26como que es un anticuerpo que me
10:27reconoce esta proteína total. Total
10:30quiere decir si está fosforilada o no
10:32está fosforilada. Pero teníamos también
10:34un anticuerpo que solo lo reconocía si
10:36está fosforilado porque reconoce esta
10:38parte entonces a este no lo reconoce.
10:41Sí, como ejemplo para que vean cuán fino
10:45es el análisis que podemos ser hacer con
10:47las herramientas que hay disponibles.
10:51Y después vimos medio al final las
10:54electroforesis nativas, donde ahí no la
10:57destruíamos, no la desarmábamos toda la
11:00proteína, sino que mantenía su forma y
11:02también mantiene su carga. Y
11:06eh
11:08entonces si mantiene su carga ahí no
11:11podíamos sembrar en un extremo como
11:13hacemos con el SDC Page que son todas
11:15cargadas negativamente porque la carga
11:17que tenía propia se hace despreciable
11:20frente a todo el SDS. Ahora no tenemos
11:22SDS, entonces esta proteína puede llegar
11:24a tener carga positiva o carga negativa
11:26y por eso tengo que sembrar en el medio
11:29para que la proteína pueda ir para un
11:30lado o para el otro. Sí. Y es importante
11:33a que pH uno corra el gel, uno corra
11:36esta electroforesis, porque a diferentes
11:39pHs habíamos visto que las proteínas
11:43podían cambiar su carga porque según la
11:45cantidad de protones que ya disponibles
11:47en el medio, la proteína se va a
11:48protonar o se va a desprotonar y eso le
11:51va cambiando su carga neta. ¿Sí? Y así
11:54uno puede llegar a correr una
11:57electroforesis nativa a diferentes pHs y
12:00encontrarse que en un momento corre para
12:02un lado o en un momento incluso no corre
12:04si está neutra o corre para el otro. O
12:06sea, si una una molécula se quedó sin
12:09carga no va a migrar porque la única
12:11razón por la que migra es que es atraída
12:14por el polo opuesto a su carga. Si no
12:15tiene carga se queda quieta.
12:18Y habíamos llegado hasta ahí. ¿Todo
12:21okay? ¿Alguna duda antes de que
12:23empecemos con temas nuevos?
12:28Bueno, seguimos entonces.
12:31Fin del recap
12:34y entonces seguimos con temas de la
12:36clase pasada.
12:38Esto vamos a verlo muy cortito,
12:39solamente estamos contando estos temas
12:42porque hay algunos problemas de la guía
12:44de seminario que requiere que sepan lo
12:46que es una cromatografía,
12:48pero después en Cube van a ver
12:51cromatografía en s super detalle, así
12:54que ahora les vamos a solo contar los
12:57conceptos más grandes. Sí, no tiene, no
13:01es objetivo de la materia meternos en
13:02mucho, mucho detalle de cromatografía,
13:04pero sí que tengan un poquito la idea de
13:07que es es otra técnica que uno puede
13:09usar para separar proteínas
13:11y se basa todas. Hay distintos tipos de
13:14cromatografías que ahora las vamos a
13:15ver. Vamos a ver rápidamente algunos,
13:18pero el principio de toda cromatografía
13:21es el mismo y es este. Yo tengo una
13:23mezcla que acá la representamos como
13:26algo de color negro porque tiene un
13:28montón de cosas mezcladas que ahora las
13:30vamos a separar. Entonces, en este
13:31dibujito están representadas negras y
13:34esta mezcla tiene distintos componentes,
13:36que en este caso son estos componentes
13:39como el rojo y el verde. Sí.
13:42y vamos a separar los distintos
13:45componentes de la mezcla,
13:48que la mezcla va a estar en en una fase
13:50móvil, o sea, va a estar como en una
13:52especie de, por ejemplo, en una solución
13:55o
13:57eh que se va a ir desplazando a través
14:00de una fase fija. Por ejemplo, en este
14:04dibujito, esa fase fija es como si fuese
14:06una columna. Imagínense una jeringa, una
14:09jeringa que la llenamos como de unas
14:10pelotitas que tienen distintas cosas y
14:12esas pelotitas no se mueven. Y mi mezcla
14:16la voy a poner en la parte de arriba de
14:17la jeringa y la voy a ir haciendo pasar.
14:20Sí, ahí sí la puedo ir haciendo pasar
14:22porque le hago vacío o porque con la
14:26gravedad a lo mejor tarda un poco.
14:27Entonces, bueno, va o a veces por la
14:30gravedad misma, depende. en general es
14:32como que uno la tiene que ir haciendo
14:34pasar despacito porque
14:39el principio de la cromatografía se basa
14:41en que los distintos componentes de la
14:44mezcla tienen diferente capacidad de
14:47interactuar con esa fase fija. ¿Sí? Y
14:51ahora vamos a ver por qué razón, porque
14:53las razones son distintas según la
14:54cromatografía. Entonces van a ir
14:56atravesando, pero si alguno se queda un
14:58poco más enganchado, más que
15:00otro, ahí se van a ir separando a medida
15:02que pasen. ¿Sí? Entonces, fíjense, la
15:05definición es la separación de
15:07componentes de una mezcla que están en
15:09una fase móvil según la su capacidad de
15:11interacción con los componentes de la
15:13fase fija. ¿Sí? Cada componente va a
15:15tener diferente capacidad de interacción
15:19y entonces como tienen distinta
15:21capacidad de interacción van a cada uno
15:22lo va a atravesar a distinta velocidad.
15:25y van saliendo en diferentes fracciones.
15:28Se llaman fracciones porque uno va
15:30colectando lo que sale de la
15:32cromatografía en un tubito y entonces
15:35dice, "Bueno, colecto un un poquitito
15:37unos un volumen, listo, sacá, ahora
15:40viene otro volumen, listo, saca el tubo,
15:42pone otro." Sí. Y entonces uno va a ir
15:45colectando distintos tubos y en algún
15:48momento acá no sale nada que me importe,
15:50acá no sale nada que me importe, pero
15:52acá justo sale este. Entonces
15:55saco el tubo y después otra vez sale
15:57algo que no me importa y después sale el
15:59otro. Sí, ese es eh el principio.
16:05Más o menos me siguieron.
16:09Sí, profe. Buenísimo.
16:11Sí, sí.
16:12Genial. Gracias por contestarme.
16:15Bueno, entonces, un tipo de
16:17cromatografía
16:18se para tamaño. Fíjense
16:22qué cómo es el sistema. Qué qué
16:25divertido. Las pelotitas de las que yo
16:28les hablé recién, que están como todas
16:30empaquetadas adentro de, imaginemos,
16:32como si fuese una jeringa, como una
16:33columna. Las pelotitas estas tienen
16:37canales por adentro, tienen como eh son
16:41porosas y los poros se atraviesan de un
16:44lado para el otro. ¿Sí? Entonces,
16:48este tipo de de cromatografía se llama
16:51tamis molecular y va a separar por
16:53tamaño.
16:55¿Qué pasa en este caso? Las pelotitas
16:57más chiquititas se empiezan a meter por
17:00adentro de esos eh canal canales que hay
17:04adentro de la perdón, no las pelotitas
17:06más chiquitas. Acá están representadas
17:08como pelotitas, pero son mis los
17:10componentes de la mezcla, ¿no? Las
17:11proteínas que sean más chiquititas van a
17:14poder meterse adentro de estos canales,
17:16pero las más grandes ni entran por los
17:18canales, entonces van a atravesar por
17:20afuera. Y entonces, fíjense lo que pasa
17:23acá. En este caso, las proteínas grandes
17:25salen primero porque no se retrasan
17:27metiéndose en ese laberinto de de
17:30canales que hay adentro de de las bits.
17:35Se llaman bits como pelotitas que que
17:38están formando la fase fija. Entonces,
17:40las más grandes salen primero porque no
17:42se retrasan y las más chicas como se van
17:45metiendo en los poros salen después.
17:48No en los poros, sino en los canales.
17:50Sí, bueno, son poros. ¿Se dan cuenta?
17:52¿Lo entendieron? Entonces, hay que estar
17:54reatento porque esto es al revés que lo
17:56que pasa en la electroforesis. En la
17:58electroforesis
18:00eran todas las las moléculas atravesando
18:04una malla, tipo una red y a las más
18:06grandes les costaba más atravesar la
18:08red. Acá lo que tiene es que las más
18:10grandes ni se meten por este estos
18:12caminitos y pasan por afuera, entonces
18:14van más rápido. Sí,
18:17hay diferentes
18:20tamaños, o sea, uno puede eh usar
18:24pelotitas que tienen estos canales más
18:27chiquititos o más grandes, según cuáles
18:29sean las proteínas que quiere separar.
18:32Entonces uno elige una que le que le sea
18:35útil, porque si uno pone una cosa re
18:36chiquitita y yo quiero separar algo
18:39mediano de algo grande, pero ninguna de
18:41las dos se mete, medio que no las voy a
18:44poder separar. Eh, el el concepto acá
18:48importante es elegir bien el tipo de
18:51Cfadex que yo voy a usar, que tienen
18:53unos números,
18:54tal que me permita que unas se metan y
18:57las otras no. ¿Está bien?
19:00Entonces, ese es el camis molecular. ¿Lo
19:03entendieron?
19:07Sí, sí, sí,
19:07sí.
19:10Perfecto. Y entonces uno calibra
19:13ese tamí. Uno dice, "Bueno, a ver, ¿en
19:16qué tubito, en el tubito número uno o en
19:18el dos o en el tres o en qué volumen,
19:20porque digo, junté 1 ml, después junté
19:22otro militro, junté otro mililitro, en
19:24qué volumen me va saliendo cada tamaño,
19:26uno lo calibra con proteínas conocidas
19:29que las puede identificar, ¿está bien?
19:33Eh, y puede hacer así lo mismo, una
19:36curva y va según acá en este caso en vez
19:38de cuánto migró el volumen en el que fue
19:42elido, se llama elón.
19:44volumen de ilusión en lo que fue
19:45saliendo. Entonces, uno lo calibra así,
19:48¿está bien? Bueno, listo. Esa es mis
19:50molecular.
19:52Otra otra cromatografía que necesito
19:55contarles porque también aparece en los
19:57problemas es una cromatografía que se
20:00llama de afinidad.
20:03Eh,
20:05es una una cromatografía que el
20:08principio por el que funciona es que
20:10aprovecha
20:12algo
20:13eh de la proteína que quiero separar,
20:17una la capacidad de unirse a algo. ¿Sí?
20:20Entonces, eh en este en este caso, en
20:25esta mezcla tenemos un montón de cosas,
20:27estos triangulitos de de color amarillo
20:30que tienen cualquier forma, qué sé yo. Y
20:32esto que es lo que la mi molécula de
20:35interés, que son estos circulitos que
20:37tienen acá como para enganchar, que se
20:39unen particularmente a algo, ¿sí?
20:43una proteína que reconoce otra cosa.
20:45Entonces, lo que hago es eh tener una
20:49fase fija, las bolitas, en este caso con
20:52las que voy a armar, por ejemplo, mi
20:53columna, que no son siempre con columna,
20:56pueden ser de otra manera, pero para que
20:58entiendan el concepto, tienen unida,
21:01pero unida covalentemente,
21:03¿si?
21:05este esta este dibujito acá como un
21:08rectangulito negro, que es esa molécula
21:11a la que se une con gran afinidad la
21:14molécula que yo quiero separar. ¿Sí?
21:16Entonces voy haciendo pasar mi mi mezcla
21:20que tiene de todo y solo se quedan
21:21enganchadas acá las cosas,
21:24mi proteína de interés, todo lo demás
21:26sale. Entonces, en este caso no junto lo
21:29que sale porque lo que sale no me
21:31interesa. Lo que me va a interesar es lo
21:33que quedó acá pegado, pero me pudo me
21:36puedo sacar de encima todo lo que no
21:38quedó pegado. Vamos bien hasta ahí.
21:43Sí, profe.
21:43Está bien.
21:45Sí. Bien.
21:46Sí, profe.
21:47Perfecto. Entonces, ¿cómo lo saco?
21:50Lo que saco es lo
21:54en un primer momento, la primera ilusión
21:56que no necesito ni juntarla, salen todas
21:58las proteínas que no me interesan, pero
22:00ahora le voy a hacer algo a la columna,
22:03le voy a tirar alguna cosa a la columna
22:06que me permita sacar lo que yo quiero.
22:08En este caso está como un ejemplo, como
22:10si fuese una enzima a la que puedo
22:12medirle la actividad. Y acá le le puse
22:15algo a la que le que la encima puede
22:17unir. Sí. Bueno, la forma que se usa
22:22para el huir es tirarle.
22:25Una vez que termino y está todo acá
22:27pegado lo que yo quiero y que me aseguré
22:28de que no quedó nada que no me interese,
22:31le tiro a la columna para el huir una
22:34solución que tiene muchos de estos, de
22:37esto mismo, que es la molécula la que mi
22:40proteína se une, pero gran cantidad de
22:43eso que ahora viene suelto. ¿Sí?
22:47Entonces, ¿qué pasa? Esta la proteína no
22:50está pegada para siempre covalentemente.
22:53Lo que está covalente es
22:55esta molécula a la a la pelotita que yo
22:58tengo empaquetada en la columna. Pero mi
23:01proteína, imaginemos que es una proteína
23:02que reconoce a esta molécula negra, no
23:05se une así para siempre. Es esa unión de
23:08la que les hablaba la clase pasada que
23:09se que le decimos que respira. Se une un
23:12ratito, un ratito se suelta. Se une un
23:14ratito, un ratito se suelta. Y ahora
23:16imagínense que le tiro un montón, un
23:19montón, un montón de esos sueltos.
23:21Entonces se unió un ratito el de la
23:22pelotita y cuando se soltó
23:25se une por puede unirse por probabilidad
23:29de algo que viene una cantidad enorme al
23:31que está suelto. Y entonces a medida que
23:34van pasando las cosas sueltas en el
23:36instante en que se separó se une a lo
23:38suelto y ahí tu lo puedo lo puedo sacar,
23:41o sea, lo eluyo como por una competencia
23:44con lo que está pegado acá, eh, lo que
23:47está unido covalentemente a la fase
23:48fija, ¿está bien? ¿Lo
23:52entendieron?
23:55Sí,
23:57profe.
23:58Genial. Bueno, entonces esta es la
23:59cromatografía de afinidad
24:02y les voy a contar esta otra muy
24:03cortita, la cromatografía de intercambio
24:05iónico, como para que tengan como un
24:08pantallazo general de los distintos
24:10tipos de cromatografía y terminen de
24:12entender ese concepto que es el que nos
24:13interesa que se lleven de acá, que es
24:17tengo una mezcla
24:20donde está lo mi proteína de interés y
24:23mezclada con otras cosas que no quiero y
24:27que las quiero separar. y tienen
24:28diferentes capacidades de unirse a una
24:30fase fija. Y entonces voy a usar, tengo
24:33que pensar qué es lo que quiero usar,
24:34por qué razón lo quiero separar y en ese
24:38caso voy a elegir qué cromatografía
24:40usar. Esta otra la separa por distinta
24:45carga. Entonces la cromatografía, ay,
24:48perdón, la cromatografía de intercambio
24:50iónico
24:51lo que hace es tener bolitas acá en esta
24:54columna con una carga en particular. Sí,
24:58por ejemplo, en este caso están las
24:59bolitas están cargadas negativamente y
25:02lo que se va a quedar pegado entonces
25:04son las proteínas que sean positivas.
25:06Las proteínas que sean neutras o eh
25:09negativas no se van a quedar pegadas acá
25:12porque las pelotitas son negativas. ¿Sí?
25:14Y entonces uno hace pasar toda su
25:17mezcla, se queda pegado lo que yo quiero
25:20y después,
25:22¿cómo se les ocurre que lo puedo
25:24despegar?
25:26le agregas una solución que tenga alta
25:28carga positiva.
25:30Exacto. De alguna forma lo que yo tengo
25:31que hacer es lograr que mi proteína que
25:35estaba pegada porque estaba cargada
25:36negativamente, ahora deje de estar
25:38cargada negativamente. Entonces le voy
25:40cambiando el pH. De hecho, así uno puede
25:43ir, si va cambiando el pH de a poquito,
25:45puede ir despegando distintas cosas.
25:48Según a medida que se van poniendo
25:49neutras las proteínas, dejan de estar
25:51pegadas, porque la única razón por la
25:53que estaban pegadas era porque estaban
25:54atraídas. de manera electrostática
25:57porque tenían la carga opuesta a la
25:59pelotita, a a la B o la pelotita que
26:03estaba empaquetada en la fase fija de la
26:06cromatografía. ¿Está bien? Bueno, con
26:09eso ya tienen una idea
26:11general de lo que es cromatografía y de
26:13los distintos tipos de cromatografía que
26:15hay.
26:16Eh, después en QB lo van a ver recontra
26:19más en profundidad, pero ya tienen una
26:22idea eh de los conceptos más
26:23importantes. Estamos,
26:26profe, disculpa, ¿podrías volver a la
26:29parte de la diapositiva donde estaba la
26:31definición, por favor? No,
26:33solo para que le saque una foto porque
26:35sí, igual el PDF de de esta clase eh lo
26:41van a tener enseguida en el campus, así
26:43que pero
26:44Ah, okay. Gracias. Igual enseguida, no
26:46sé, a lo mejor el fine no lo tienen,
26:49eh, pero el lunes lo van a tener seguro.
26:53Gracias,
26:54ahí está.
26:55Ya está. Gracias.
26:56Perfecto.
26:59Eh, profe, una consulta.
27:01Sí.
27:02Eh, no entiendo en cómo se leen los
27:06resultados de las cromatografías. Ah,
27:09bueno, está bueno. En realidad no lo
27:11entendés porque no se los dije y hay
27:13diferentes formas de leerlo. Depende
27:18qué es lo que uno esté tratando de
27:20purificar. Si uno, por ejemplo, está
27:22purificando una enzima, como es el caso
27:25de este ejemplo, uno puede medir la
27:28actividad enzimática y eso ahora lo
27:29vamos a entender en un ratito cuando
27:30veamos enzimas, que hay formas de mirar
27:33actividad enzimática y que uno la
27:34detecta, ¿sí? Eh, o a lo mejor vos tenés
27:37una proteína que es fluorescente y podés
27:39detectar la fluorescencia directamente,
27:42eh, o una o algo que tiene un color y lo
27:44puedes ver directamente. Sí. E está muy
27:49bien tu pregunta. Yo no lo había dicho
27:50en realidad. ¿Quedó ahí?
27:54Sí, sí, gracias.
27:55Genial. Igual ahora en un ratito
27:57arrancamos con enzimas y ahí vamos a ver
27:58lo de cómo uno puede ver la actividad de
28:01una enzima, cómo puede medirla o
28:03detectarla.
28:05Bueno, pero antes de entrar con enzimas
28:06les cuento una última cosa de la clase
28:08pasada para que no se queden con la idea
28:11de que solo estudiamos a las proteínas
28:13afuera de la célula, porque hasta ahora
28:15lo que les conté fue electroforesis
28:17nativa o electroforesis en LS page o las
28:22cromatografías que todo esto es pensando
28:24en proteínas que ya están afuera de la
28:26célula. Yo rompí la célula y me quedé
28:28con las proteínas y le puedo estudiar
28:29distintas cosas, pero hay un montón de
28:32herramientas que nos dejan estudiar a la
28:33proteína adentro de la célula.
28:37Eh, entonces en este caso, cuando acá
28:40les escribí, además de de estudiar las
28:42proteínas invitro, acá el término
28:44invitro es rompía la célula y lo saqué.
28:48Uno puede estudiarlas en vivo, que es
28:51adentro de la célula con la célula,
28:53incluso hasta con la célula viva. Ahora
28:55les voy a contar que las podemos
28:56estudiar con la célula muerta o con la
28:58célula viva, pero hay un montón de cosas
29:00que podemos que queremos ver de las
29:02proteínas adentro de la célula y que si
29:05yo rompí y me quedé con las proteínas
29:07afuera,
29:09eh, puedo no
29:11me pierdo toda esa información.
29:14Eh, un paréntesis, porque a veces pueden
29:16llegar a encontrarse
29:19cuando lean distintos papers o en libros
29:21o lo que sea, el término invivo invitro
29:25a veces está usado de manera diferente
29:27según quién lo use. Los biólogos
29:31moleculares y celulares le llamamos
29:34invivo a la a los experimentos que
29:36hacemos en las células. E invitro es si
29:39rompimos la célula y nos quedamos con
29:41todas las moléculas afuera. Pero la
29:43gente que trabaja con animales le llama
29:45invivo a los experimentos en el animal y
29:48le dice invitro a la célula. ¿Se dan
29:50cuenta la diferencia? Entonces, eh,
29:53bueno, ojo con ese término y según dónde
29:55lo estén leyendo.
29:57Bueno, entonces podemos ver un montón de
29:59cosas. ¿Cuánto hay de una proteína?
30:01¿Dónde está adentro de la célula? ¿una
30:04proteína está interactuando con otra?
30:06¿De qué manera? Y entonces hay
30:07diferentes diferentes eh metodologías
30:11que uno puede usar.
30:12Ya conocen a los anticuerpos, que ya los
30:14usamos para western, así que no se los
30:16tengo que volver a presentar, pero
30:18podemos usar a los anticuerpos para
30:19mirar a la proteína también adentro de
30:21la célula. Entonces, si uno quiere mirar
30:23a la proteína dentro de la célula con un
30:26anticuerpo, lo que tengo que hacer es
30:29de alguna manera fijar todas las cosas
30:32en la célula, que no se muevan más,
30:35hacerle como agujeros a la membrana de
30:38la célula para que puedan entrar estos
30:40anticuerpos, que esta es la parte que
30:42digo acá de permeabilizar, y ahí meter
30:45los anticuerpos, el primario y después
30:48el secundario y poder ver. Y fíjense que
30:51cosas hermosas que uno puede ver. Esta
30:53foto es sacada de un catálogo de
30:55anticuerpos que tenemos anticuerpos que
30:58reconocen distintas proteínas que están
31:00en particular en diferentes regiones de
31:03la célula. Entonces acá podemos ver que
31:06yo una proteína que marca la membrana
31:09nuclear. Entonces, fíjense como se ve el
31:11bordecito acá que es la membrana
31:13nuclear. Si yo rompo la célula y miro
31:15esta misma proteína en un western, me
31:18perdí esto de la localización. ¿Sí? Y
31:20ahí tenemos eh diferentes ejemplos de eh
31:25proteínas que están formando estructuras
31:27en particular dentro de la célula eh que
31:30es muy informativo poder mirarlo sin
31:32haber roto la célula. ¿Se dan cuenta qué
31:36voy a hacer? Inmunofluorescencia o
31:38western. Y bueno, depende cuál sea mi
31:40pregunta y qué necesito y a lo mejor a
31:42veces tengo que hacer las dos cosas y
31:44con los resultados de esos dos
31:45experimentos termino de contestar mi
31:48pregunta. Sí, no es que una técnica es
31:51mejor que la otra. Una técnica me sirve
31:54para unas cosas y tiene limitaciones
31:55para la otra y viceversa.
31:59Pero esto que les conté de la
32:01inmunofluorescencia requiere haber
32:02matado a la célula para poder hacerle
32:04estos agujeros y meter a los
32:05anticuerpos. Pero a veces yo quiero
32:08puedo, digamos hoy, hoy en día también
32:11tenemos herramientas para poder mirar a
32:12las proteínas adentro de las células sin
32:14matarlas en células vivas y así puedo
32:17estudiar procesos dinámicos. Por
32:19ejemplo, esto que les escribí acá, ver
32:21que le pasa a una proteína si le hago un
32:23estímulo, que ahora les voy a mostrar un
32:25ejemplo, pero para poder ver eso no
32:27puedo usar anticuerpos que yo le ponga
32:29desde afuera. Lo que tengo que usar son
32:32proteínas que ya de por sí sean
32:35fluorescentes. Y entonces ahora vamos a
32:38empezar a usar como herramienta a las
32:40proteínas fluorescentes, que son, no sé
32:42si seguramente ya la conocen y ya se las
32:45mencioné hace un rato, existe en la
32:47naturaleza una proteína fluorescente
32:49que se descubrió y después de a partir
32:51de ahí se descubrieron otras que tienen
32:53otros organismos y esta es la GFP GFP
32:56proteína verde fluorescente que viene de
32:58esta medusa.
33:01Y fíjense, es una proteína que ya de por
33:03si ella es fluorescente,
33:06tiene esta estructura que ya se las
33:07conté cuando les hablé de motivos
33:09estructurales que tiene esta formita de
33:12barril y que son todos es un barril
33:15formado por todas eh hojas beta plegada
33:18con una alfa hélice central. Sí.
33:21Y el fluoróforo, lo que lo que da la
33:23fluorescencia
33:25es está formado directamente por tres
33:28aminoácidos de esta alfaélice central,
33:31pero que le pasa le pasa algo después.
33:34Las se la proteína se traduce, se se
33:36sintetiza, se pliega y ocurre una
33:39modificación postraduccional rara que yo
33:42no se las conté, es como muy particular,
33:45que es una ciclación y después una
33:48oxidación. No importa el detalle, solo
33:50para que vean como ejemplo una cosa, una
33:53modificación postrauccional diferente a
33:55las que les conté y que encima involucra
33:57como varios aminoácidos de la misma de
34:00esta proteína que se unen entre sí, les
34:03pasa una modificación y una vez que pasa
34:05eso, queda formado como una estructura
34:08que si recibe luz de una longitud de
34:12onda en particular, en este caso verde e
34:14perdón, azul, emite luz verde. Si, pero
34:20eso pasa solo si esto, este conjunto de
34:23aminoácidos que le pasó todo eso está
34:25metido en el medio de este barril que se
34:27forma como un entorno hidrofóbico. ¿Sí?
34:31Si yo tengo esto aislado así solo afuera
34:33de este barrilito, no no es
34:35fluorescente. Esa fluorescencia se da en
34:38este contexto. ¿Sí? Entonces, eh acá les
34:42puse varias varias imágenes sacadas de
34:45de un lugar donde uno puede hacerlas
34:47girar para que la entiendan un poquito
34:50cómo funciona, pero si ustedes la
34:51googlean y se encuentran con esto,
34:53pueden jugar un ratito, pero básicamente
34:56el fluoróforo está formado en el medio
34:57por aminoacios de esa misma alfa hélice
34:59que les pasó esta modificación rara.
35:01Solo se las escribo acá por si alguno
35:03dice para no entendí cómo es la
35:04modificación. Ahí la tienen para mirar,
35:06pero no es para que se la sepan para
35:07nada, ¿no? Y ahí entonces se formó este
35:10cromósforo que en este contexto es
35:14fluorescente. Y hay otras hay otras
35:17proteínas fluorescentes producidas por
35:19otros animales y además hoy en día hay
35:22un montón de variantes que se hicieron
35:24cambiándoles los aminoácidos y haciendo
35:27eh logrando que den otros eh fluoróforos
35:30que uno los puede excitar con otras
35:32longitudes de onda y emiten en
35:34diferentes longitudes de onda. Entonces,
35:35uno así puede tener una variedad de
35:38proteínas fluorescentes que las puede
35:39combinar y mirar varias cosas a la vez,
35:42porque entonces ahora lo que uno hace,
35:45por supuesto, no le interesa mirar la
35:46GFP en sí, sino que lo que uno hace es
35:48generar proteínas de fusión donde uno
35:51tiene su proteína de interés fusionada a
35:54la GFP. Esto es un esquema de un
35:57plásmido, que ya lo van a ver un poco
36:00más en detalle, pero es un ADN circular
36:02que uno puede meter artificialmente
36:05adentro de las células por un proceso
36:07que llama transfección.
36:09Y si uno se lo fabricó así
36:12por ingeniería genética, uno puede hacer
36:15esta fusión de mi proteína que yo estoy
36:17estudiando a la que le engancho una GFP
36:20y viajan juntas y así puedo verla a mi
36:23proteína, una GFP u otra variante de
36:26otro color.
36:28Y entonces así yo puedo ver dónde anda
36:30mi proteína o qué le pasa ante
36:33diferentes estímulos. Incluso puedo
36:35tener varias proteínas fusionadas a
36:37distintas proteínas fluorescentes y
36:39verlas todas a la vez. ¿Sí?
36:43Entonces, para resumir, uno puede mirar
36:45a las proteínas por inmunof adentro de
36:48la célula, por inmunofluorescencia, pero
36:50en ese caso requiere haber matado a la
36:54célula para que se le meta este
36:55anticuerpo, poder meter el anticuerpo
36:58después de haber hecho esa
36:59permeabilización en la membrana o
37:01mirarla en células vivas. Eh, si uno
37:04hace estas modificaciones donde hace
37:07expresar una proteína fluorescente
37:09fusionada a la proteína propia.
37:13Hoy en día existen, no me acuerdo si ah,
37:14no, no les puse la diapo. Hoy en día
37:17existen ya hace poquito tiempo y hay
37:20cada vez más
37:24unas variantes de
37:28anticuerpos. Me olvide de agregar la
37:30diapo. Después eh trato de agregárselas
37:32y se las mando en el PDF que ponga.
37:35Se fabricaron unos mini anticuerpos que
37:38son como si fuese el pedacito este no
37:40más que reconoce a a la proteína de
37:43interés fusionado a una proteína
37:45fluorescente. Entonces, eso se puede
37:48hacer expresar en la célula también y
37:51hay un montón de mini anticuerpos que
37:52reconocen diferentes cosas. Entonces uno
37:54puede hacer, uno puede detectar a la
37:56proteína endógena haciéndola expresar un
37:59mini anticuerpo que la reconozca, un
38:02mini anticuerpo fluorescente.
38:04Por eso es una cosa bastante nueva y
38:06todavía no hay mini anticuerpos para
38:08todas las proteínas.
38:11Bueno, entonces podemos, ¿qué cosas
38:13podemos estudiar en células vivas?
38:15Bueno, ¿cuánto hay de una proteína?
38:16¿Dónde está? ¿Cómo interactúa con otras
38:18moléculas? Y entonces acá les puse un
38:21ejemplo, una fotito como para verlo
38:23rápidamente donde ten este es sacada de
38:26un paper de un grupo de la FACU de del
38:29grupo de Vale Levi y Diego Presman, que
38:32es docente de acá del departamento.
38:36un paper de Martín y Adali,
38:38que son colegas míos,
38:42eh, donde ellos estudian una proteína
38:46que se que se llama GR, que es el
38:49receptor de glucocorticoides. Es un un
38:51receptor de de hormonas que en una
38:55célula ante que no tiene ningún
38:57estímulo, está tanto en el núcleo como
38:59en el citoplasma. Ellos están expresando
39:01justamente el GR fusionado a GFP. El GR,
39:05de hecho, es un factor de transcripción,
39:06además de ser el receptor de
39:08glucocorticoides.
39:11Cuando a las células las tratamos con la
39:13hormona dexametasa, que es el el
39:15glucocorticoides que se une a esa
39:17proteína, rápidamente
39:20todo el GR se va al núcleo. Fíjense que
39:23desaparece el GR que estaba en el
39:24citoplasma y aparece en el núcleo. Y no
39:28solo aparece en el núcleo, sino que
39:29encima está como que hay regiones más
39:31brillantes que son regiones donde se
39:33concentra, no está todo distribuido
39:36homogéneamente. Y eso es algo que está
39:39que es super importante y es parte del
39:41estímulo. ¿Vieron lo que decíamos? Eh,
39:44el estímulo que viene una molécula
39:46señal, la reconoce su receptor y pasan
39:49cosas. En este caso, ¿qué cosas pasan?
39:51Eso, ese receptor es el mismo, la misma
39:54proteína que va al núcleo y en el núcleo
39:55directamente regula la expresión de
39:57genes. Entonces, era esto. Volvemos a lo
40:00de la oración, ¿no?, que tenemos las
40:02palabras acá interactuando. Y en este
40:04caso sería eh que un estímulo
40:07directamente interactúa con su receptor.
40:11Ese receptor va al núcleo y en el núcleo
40:14pasan otras cosas y y y eso termina
40:17dando una respuesta en la célula.
40:20Bueno, y entonces para cerrar esta
40:23parte, esto de las proteínas
40:25interactuando funcionalmente permiten
40:26que la célula responda señales. Se los
40:29acabo de mostrar un ejemplo, mirando con
40:31proteínas unidas a proteínas
40:33fluorescentes y podemos verlo
40:34directamente en células vivas.
40:37Y entonces terminamos con la clase de
40:40del otro día y recién viene ahora la
40:42clase de hoy. Sí.
40:44Eh, perdón, mi pregunta. Eh, cuando vos
40:47como que le metés a la a la célula eh
40:50proteínas fluorescentes,
40:52e la célula después de que vos hiciste
40:55todo ese proceso eh se muere, deja de o
40:59sea, de emitir la luz, eh puede
41:01reproducirse y las células que se
41:03reproducen siguen como teniendo esas
41:05protes que vos le metiste por alguna
41:07extra.
41:08Está buenísima la pregunta.
41:10Todo eso que vos me preguntás, en
41:11realidad hay diferentes cosas que le
41:14pueden pasar según cómo vos le metas esa
41:16proteína a la célula.
41:18Esto que yo les conté muy rápido porque
41:20es como un pantallazo, un pantallazo
41:22general, pero a ustedes le falta todavía
41:24varios conceptos para eh poder verlo más
41:27en profundidad, pero les adelanto por la
41:30por la pregunta que vos me hiciste. Me
41:31imagino que ya hay varios que se están
41:33preguntando eso. Este dibujito que yo
41:35les puse acá de este plásmido que les
41:37contaba que es un ADN circular, si yo lo
41:39meto en la célula, tiene que llegar al
41:41núcleo para poder transcribirse y
41:43después ese RNA mensajero sale al
41:46citoplasma y se traduce. Igual que si
41:48fuese un RNA mensajero producido por un
41:50gen endógeno, esto es algo que yo le
41:53puse de afuera. Si yo hago esta
41:56transfección que les conté con un
41:59plásmido así no más, las células estas
42:01van a expresar esta proteína. Pero si
42:03este plásmido,
42:05por ejemplo, en una célula de mamífero
42:07no tiene forma de dividirse, a medida
42:09que la célula se dividan, ese plásmido
42:11se va a ir perdiendo. Entonces, vos
42:13podés ver esa fluorescencia solo en las
42:15células de las primeras generaciones,
42:18pero vos puedes hacer algo para que esto
42:22se meta adentro del genoma de la célula
42:24y pase a formar parte del ADN endógeno y
42:27entonces en ese caso es lo que se llama
42:29una transfección estable y ahí las
42:31células hijas también lo van a tener.
42:34Sí, me fui a un tema que ni pensaba
42:37contarles, pero como me preguntaste eso
42:38me imagino que a lo mejor a varios se
42:40les está ocurriendo. Y otra cosa que uno
42:43tiene que chequear es que vos con esto
42:44que le hayas puesto a la célula, la
42:46célula no la pase mal, porque a lo mejor
42:48le metiste un montón de una proteína que
42:50le hace mal porque no es algo natural de
42:52la célula, es lo que se llama una
42:53sobreexpresión y entonces son cosas que
42:56uno tiene que controlar en su
42:57experimento.
43:00Si la
43:01Gracias, profe, reinteresante, ¿no? Por
43:02eso, tipo, o sea, me dio curiosidad eso
43:05de
43:07lo que le metés, tipo,
43:08hace que seas perdura. Ah, o no. Pero eh
43:13eso depende de qué tipo de transfección
43:15vos estés haciendo y hay herramientas
43:18para que si vos querés que esto se meta
43:21en el genoma, tenés formas de usar unos
43:23plásmidos especiales que tienen algunos
43:26algunas secuencias y uno hace distintas
43:29estrategias tal que se puede meter
43:30adentro de se puede incorporar al genoma
43:34de manera estable, pero eso lo van a ver
43:36más adelante. Sí, pero más o menos me
43:39entendieron así rápidamente.
43:42Sí, profe, gracias. Genial.
43:44Y para ver las proteínas en realidad uno
43:47no las ve directamente, no es que están
43:48floreciendo así solo, sino que
43:50acuérdense que se va a poner
43:52fluorescente si uno le da una longitud
43:55de onda en particular. Entonces, uno
43:56para verlas las tiene que llevar a un
43:57microscopio que tiene una luz especial
44:01que uno le le
44:04hace incidir una luz de una longitud de
44:06onda en particular y ahí excita ese
44:08floróforo y ese fluoróforo emite luz en
44:12otra longitud de onda que uno la tiene
44:13que capturar con el microscopio. Se usan
44:15microscopios especiales para poder
44:18excitar los florósforos y captar después
44:22la eh la luz emitida, ¿sí? de otra
44:25longitud,
44:26profe.
44:27Sí.
44:28Entonces, eso quiere decir que yo al
44:30insertar el plásmido no puedo ver tipo a
44:32simple vista cuando efectivamente se
44:35exprese o no, sino que tengo que como
44:37que llevar un control con el
44:39microscopio.
44:40Exacto. A simple vista no se ve la GFP
44:43porque hay que excitarla. Bueno, primero
44:46que además si estamos en una célula
44:47tenemos que usar un microscopio,
44:49¿no? Eh, pero eh si vos me decís,
44:53"Bueno, pero yo tengo un animal al que
44:55le hago expresar eso y tengo o tengo una
44:57cantidad enorme y está todo verde."
44:59Bueno, uno tendría que por lo menos
45:01excitar con la longitud de onda
45:02necesaria para poder ver esa
45:06fluorescencia. Sí,
45:09sí, gracias.
45:10No, de nada. Bueno, genial,
45:13profe.
45:14Sí.
45:16Entonces, mi proteína de interés se une,
45:20se fusiona con el GFP.
45:23Claro, si uno quiere estudiar su
45:25proteína en células vivas, por ejemplo,
45:27este caso que les conté acá, ellos
45:30fabricaron un ese ese dibujito que yo
45:34les mostraba del plásmido, sería la
45:36parte azul, sería la proteína de interés
45:39de ellos, que es este GR, que es el
45:41receptor de glucoiticoides fusionado a
45:43GFP. Entonces, lo que yo estoy viendo
45:45acá en realidad lo los fluorescentes es
45:48el GFP, pero como está fusionado al GR y
45:50no le alteró la función,
45:54porque eso es algo que también podría
45:55llegar a pasar y uno lo tiene que
45:56controlar, el GR se puede seguir uniendo
46:00a su eh a a su ligando, que es en este
46:04caso la dexametazona, que es este
46:06glucocorticoida que llama dexametazona.
46:07Entonces, uno le pone dexametazona, se
46:09une al GR y así como se une a todo el GR
46:12endógeno de la célula, también se une a
46:14las moléculas de GR GFP que ahora esta
46:16célula está expresando porque le
46:18metieron ese plásmido que codifica para
46:20GRGFP y entonces el GR endógeno va para
46:25el núcleo, pero yo no lo veo, pero el
46:27GRGFP también va para el núcleo y lo
46:29puedo ver. ¿Me entendieron?
46:34Eh, sí. Y después dijimos que las
46:38proteínas
46:39interactúan funcionalmente para poder
46:42generar reacciones o eso entendí yo.
46:47Bueno, la que interactúen
46:48funcionalmente.
46:51Ah, entre sí. Ah, perdón. Cuando yo les
46:54conté, les volví a resumir esta parte
46:56que se la hago se las hago aparecer cada
46:59tanto como para esa parte
47:01reforzar este concepto, o sea,
47:04interactúan funcionalmente
47:06para producir
47:08algo que en este caso lo que yo decía es
47:10oraciones, no reacciones, oraciones, que
47:12es esta metáfora de del videíto que les
47:15contaba al principio de todo el bloque
47:16de proteínas.
47:18Cerrando entonces esta parte es la la
47:21metáfora de la oración sería como una
47:26alguna vía metabólica, algo que está
47:28pasando en la célula. Entonces, en este
47:30en el ejemplo, en los ejemplos que les
47:32contaba, podría ser viene una molécula
47:35señal, interactúa con una proteína, a
47:37esa proteína le pasa algo, esa proteína
47:39ahora va a interactuar con otra que le
47:41pasa algo y va a interactuar con otra
47:43que le pasa algo y termina dando una
47:45respuesta en la célula. En este caso,
47:49el GR interactuó con con su ligando y
47:53eso le hizo hacer un cambio
47:54conformacional de tal manera que termina
47:56en el núcleo y ahora interactúa con
47:58otras cosas y termina cambiando la
48:00expresión de genes y esos genes que
48:02ahora se expresan van a dar proteínas
48:04que terminan interactuando con otras y
48:06van a producir un efecto en la célula
48:07que a lo mejor a la célula le va a pasar
48:09algo, por ejemplo, o se va a dividir o
48:11se va a morir o va a hacer alguna otra
48:14cosa. Y esa sería la metáfora de la
48:17oración.
48:19Algo que pasa, como en este ejemplo
48:20decía, romper azúcar, ¿no? Pero podría
48:23ser dividirse o morirse o migrar
48:29o cambiar de forma y sacar un un
48:34segudo o diferentes cosas, ¿sí? Que ya
48:38las van a ir viendo, lo vamos a ir
48:39viendo a lo largo de la materia.
48:41¿Está bien?
48:44Sí, gracias, profe.
48:45No, de nada. Bueno, entonces ahora sí
48:48arrancamos con la clase con lo que nos
48:50qued el va la clase tres, pero que
48:53bueno, ya
48:55eh sabíamos ya sabía que la clase dos en
48:59general no entra todo ahí, pero bueno,
49:01es parte de los temas que tenemos que
49:02ver ahí. Bueno, vamos bien. No
49:06necesitamos intervalo todavía, ¿no?
49:07Porque en realidad nos falta un rato.
49:09Avanzamos un poquito, hacemos un
49:10intervalo dentro un ratito.
49:13Dale, profe.
49:14Dale.
49:14Sí, profe.
49:15Genial. Entonces,
49:17vamos con la parte, la clase tres. ¿Se
49:21acuerdan que habíamos dicho que había un
49:23montón de proteínas diferentes que
49:24permiten que la célula funcione y que
49:27cuando dijimos hacen de todo,
49:30eh,
49:32mencionamos diferentes grupos de
49:34proteínas, hicimos estuvimos un rato
49:37largo al principio de la clase hablando
49:38de distintos grupos de proteínas y uno
49:40de esos grupos eran las proteínas que
49:42catalizan reacciones y ustedes ahí me
49:44dijeron las enzimas. Bueno, llegó el
49:46momento de hablar de las enzimas.
49:49¿Qué son las enzimas?
49:51Las enzimas son catalizadores
49:53biológicos. Casi todos los procesos que
49:56que ocurren en la célula eh requieren
50:00ser catalizados y eso es aumentar su
50:03velocidad porque
50:05eh si no no tuvieran una catálisis no
50:09podrían ocurrir una velocidad compatible
50:11con la vida, o sea, no se hubiesen
50:13formado las células funcionales que
50:15conocemos.
50:18Acá un paréntesis, algunos de los de las
50:20reacciones son catalizadas solo por RNA
50:23y esas son las que se llaman ribosimas,
50:25¿sí? Pero la mayoría de los
50:26catalizadores que que nos encontramos en
50:28la célula son proteínas, pero no se
50:30queden con que las enzimas son solamente
50:32proteínas, sino que algunas son
50:35ribosimas que son RNA. Esta tablita, por
50:39supuesto, no es para que se la sepan de
50:41memoria, pero es, me parece que es muy
50:43conceptual, sacada del Alberts. Las
50:45tablas que son así con color verde,
50:47verdecito claro, así que yo pongo en mis
50:49en mis diapos están sacadas del Alberts.
50:53Eh, y acá hay como términos generales
50:55que agrupadas como por función y qué
50:59tipo de reacción catalizan. Por ejemplo,
51:02las hidrolas es el término general que
51:05se usa para enzimas que hacen reacciones
51:08de clivaje. Nucleasas clian, ácidos
51:11nucleicos, proteasas son las que ya
51:13comentamos, rompen una unión peptídica y
51:17entonces clian, clivar es generar un
51:20corte, ¿no?
51:25cadenas poliptídicas y así tenemos
51:27diferentes nombres, por ejemplo, eh
51:31ligazas, proteínas que hacen lo
51:34contrario que una hidrolas. Unen, hacen,
51:39generan una unión y en general es un
51:41proceso dependiente de energía. Y así
51:44tenemos diferentes grupos, nombres de
51:47proteínas que todas estas le van a ir
51:48apareciendo a lo largo de la materia.
51:50¿Sí? Y acá está como el término general
51:53y y acá les cuenta que justamente las
51:56enzimas típicamente se se nombran así
51:59que terminan en asa, pero hay
52:03excepciones que son enzimas que se las
52:05había nombrado antes de que se genere
52:07esta regla y que se les mantuvo su
52:09nombre, que no termina en asa. Sí.
52:13Bueno, ¿y por qué se la suele
52:14representar así con forma de Pacman?
52:17Vieron que uno dibuja un encima y en
52:19general se imagina algo como con una
52:21forma de Pacman,
52:23porque en realidad ya nos estamos
52:25imaginando que el enzima va a estar
52:27interactuando y reconociendo
52:29específicamente algo que enganche justo
52:32en este lugarcito, en esta formita, que
52:34ahora vamos a ver a qué se le llama, qué
52:37es formita y cuál es el nombre
52:38específico que se le da. Pero ahora
52:41volvemos a esto. Antes quiero ir a esta
52:45cosa general. salgo de las enzimas y
52:48pienso particularmente en las proteínas.
52:50Es algo característico y general para
52:52proteínas, ¿no? exclusivo de enzimas.
52:55Esta unión de las proteínas aún ligando.
52:58O sea, no toda proteína que se une a
53:00algo es una enzima
53:02para nada. Y es una cosa muy particular
53:05que tienen las proteínas por esta
53:07capacidad que tienen de tener esta
53:08forma, ¿sí? forma justamente determinada
53:11por su estructura tridimensional, que
53:13tanto hablamos en las clases anteriores
53:16de la importancia de estructura
53:18tridimensional para su función. Esta
53:21forma y el hecho de que haya ciertos
53:24aminoácidos en particular ubicadas en
53:26este lugar van a permitir
53:29una unión específica por uniones en
53:32general no covalentes, ¿sí? que hacen
53:36esta eh esta especie de interacción tan
53:40específica de proteína ligando. Sí, pero
53:43no lo vamos a generalizar como enzima
53:45sustrato. Sí, enzima sustrato es una
53:48unión específica proteína ligando, pero
53:50hay otras uniones proteína ligando que
53:51no son de enzima sustrato.
53:55Y eso que yo les decía de la forma y no
53:58solo la forma, sino qué
54:01eh aminoácidos estén ahí y entonces qué
54:04cadenas laterales de aminoácidos estén
54:06expuestas, va a definir perfectamente
54:09esta unión y que es recontraespecífica y
54:12bastante estable. Son uniones débiles,
54:14pero es una unión bastante estable
54:16porque está formada,
54:18estabilizada por muchas uniones. Fíjense
54:21acá nos dibujan un bolsillito unido a un
54:26ligando que es esta molécula en naranja
54:29acá. Y miren todas las uniones
54:31específicas que se están formando. Una
54:33unión puente de hidrógeno con esta
54:35serina que es parte de este de esta
54:38bolsillito de la proteína. una eh
54:41atracción electrostática con esta carga
54:43negativa de este fosfato del ligando y
54:46una carga positiva de la arginina que
54:48forma parte de este bolsillito y así
54:51otros ejemplos. ¿Se dan cuenta?
54:53Entonces, no es solo la forma, sino
54:56interacciones que se están formando
54:58entre aminoácidos de esa región y el
55:01legando.
55:03Y entonces ahora, volviendo a las
55:05enzimas,
55:07esto lo podemos pensar para el sitio
55:09activo asociado al sustrato. Y entonces
55:12el sitio activo de la de la enzima es
55:14complementario tanto en forma como en
55:17esas propiedades de interacción que yo
55:19les contaba recién de aminoácidos del
55:23sitio activo interactuando con el
55:25sustrato o los sustratos. Sí, en un
55:28ratito volvemos a esto, pero esta
55:30interacción entre la enzima, fíjense en
55:32este ejemplo, es una enzima con dos
55:34sustratos,
55:36hay una interacción, se forma por un
55:38instante un complejo enzima sustrato y
55:40después va a dar el producto y el
55:42producto se libera y la enzima se
55:45reutiliza. Y ahora vamos a ir viendo más
55:47en detalle esto. Hay un montón de Sí.
55:52¿Por qué antes habías dicho que no hay
55:54que decirle sustratos y no ligando?
55:56No, no es que no hay que decirle
55:58sustrato, sino que
56:02si estamos no es exclusivo para el
56:04sustrato. Hay diferentes moléculas que
56:07se pueden unir a proteínas que no
56:09necesariamente son un sustrato.
56:12Ah, okay. Pero proteínas que no son
56:14enzimas.
56:15Sí. Y si estamos hablando de una
56:16proteína que no es una enzima y se une a
56:19algo, a lo mejor esto no es un sustrato,
56:21sino que es un ligando, no le no le va a
56:24pasar nada, no le va a hacer una
56:25reacción acá y lo va lo va a modificar,
56:28pero sí se une con alta especificidad.
56:30Entonces, el término genérico es una
56:33proteína uniéndose de manera específica
56:34a un ligando. Ahora, en particular, para
56:37las enzimas puede ser la enzima, que es
56:40la proteína, y que este ligando sea su
56:43sustrato, pero van a ver que incluso las
56:45enzimas pueden tener otros ligandos que
56:48no necesariamente es el sustrato y que
56:50también se une de manera específica.
56:52Entonces yo para que no se vayan
56:54encerrando a esas cosas que ustedes
56:57siempre quieren generalizar y es bueno,
56:59vayamos entendiendo el concepto general,
57:01una proteína uniéndose a un ligando.
57:03Ahora, un caso particular es cuando ese
57:06ligando es el sustrato de la enzima y y
57:08la proteína es un enzima. Sí, pero hay
57:11otras otras cosas. ¿Está bien? ¿Quedó
57:13esa diferencia?
57:14Okay. Sí. Perfecto.
57:17Entonces, ahora sí vamos al caso
57:18particular de la enzima y sustrato. Una
57:21enzima con un sustrato. Eh, también
57:25tenemos estos bolsillitos que son que
57:27que en ese caso esto va a ser el sitio
57:29activo. Si estamos hablando de la enzima
57:32y de ligándose el sustrato. En este caso
57:35son dos sustratos
57:37que van a dar un producto. En este otro
57:39caso es al revés un producto
57:42interactuando con el sitio activo y que
57:44va a dar, perdón, un sustrato y que va a
57:47dar dos productos. Sí. Y hay infinidad
57:50de posibilidades,
57:52pero el concepto clave es que la enzima
57:55tiene altísima especificidad por su
57:57sustrato. Cuando estamos hablando
57:58entonces de que la enzima es una
58:01proteína y que el ligando es el
58:03sustrato, este esta región se llama
58:06sitio activo y es de altísima altísima
58:09eh especificidad.
58:15Y lo que hacen las enzimas es aumentar
58:16justamente muchísimo la velocidad de la
58:18reacción. Y entonces es lo que decíamos
58:20al principio, que reacciones que serían
58:23a lo mejor muy muy muy lentas,
58:25incompatibles con la vida, pasan ahora a
58:28velocidades
58:29donde la célula puede funcionar.
58:33¿Cómo logran ese aumento tan alto de
58:35velocidad? lo que hacen es
58:38eh bajar lo que se llama la energía de
58:41activación, que no tiene sentido que nos
58:43metamos muy en detalle, que lo van a ver
58:44más en química inorgánica.
58:47Eh, y es un concepto termodinámico
58:50que lo van a terminar de entender cuando
58:53estudian termodinámica, pero lo que hace
58:55el complejo encima sustrato es
58:57justamente lo que se dice bajar esta
58:59energía de activación y entonces
59:03eso es lo que aumenta completamente la
59:05velocidad.
59:06eh de la reacción
59:10y lo eh lo que hace, cómo lo hace, cómo
59:14es que logra esto. justamente
59:18estabilizando
59:20este momento de eh de este intermediario
59:25eh que es un el complejo encima
59:27sustrato, que podría ser algo un poco
59:29inestable, que o sea
59:34es como
59:36que
59:38la el hecho de que esté la encima no nos
59:41va a permitir que se genere este que se
59:45estabilice este momento quedó como medio
59:47rara esta parte de la explicación. No me
59:49quiero meter en conceptos
59:50termodinámicos, pero y no quería leer
59:52exactamente esto, pero ahí es donde está
59:54explicado de la forma más simple. Eh, lo
59:57que hace el sitio activo al reconocer de
59:59manera tan específica y ser tan
1:00:01complementario al sustrato es
1:00:04estabilizar este estado de transición. Y
1:00:07se hay un modelo que se llama modelo del
1:00:09ajuste inducido donde dice, bueno,
1:00:12cuando la la enzima interactúa con el
1:00:15sustrato, hay como un acomodamiento de
1:00:18esa región y hace que eso sea más
1:00:20estable y termina dando el producto. En
1:00:22este caso del ejemplo tenemos los dos
1:00:24sustratos y un único producto. Sí,
1:00:27fíjense.
1:00:27Perdón, profe, ¿te puedo hacer una
1:00:28pregunta?
1:00:29Sí, déjame que ahí termino esta idea y
1:00:31ahí me preguntas. Fíjense que en este
1:00:33caso que son dos sustratos, el hecho de
1:00:35que la enzima
1:00:38los mantenga unidos cerquita, ¿no?
1:00:42Porque a lo mejor estos dos sustratos
1:00:43andan sueltos por la célula y la
1:00:45probabilidad de que estos sustratos se
1:00:47encuentren y se queden un rato
1:00:50juntos como para permitir que se forme
1:00:53esta unión es mucho más baja que la
1:00:58probabilidad de que pase eso. mucho más
1:00:59baja que si se encuentran con la enzima
1:01:02que los mantiene cerquita
1:01:06un rato más largo y eso es lo que
1:01:08permite,
1:01:09lo que da tiempo a que se forme esta
1:01:11unión, que de otra manera si esto no
1:01:12hubiese pasado a lo mejor se no no se
1:01:16terminaban de
1:01:18no terminaban de estar cerca el tiempo
1:01:20suficiente para dar lugar a que ocurra
1:01:21la unión. Sí. Entonces, esa es como un
1:01:24una forma bastante simple de tratar de
1:01:27entender por qué es que estabiliza ese
1:01:29momento de transición.
1:01:31Sí, perdóname que ahora sí te escucho la
1:01:33pregunta.
1:01:35Sí, perdón que te interrumpí, es para
1:01:37olvidar
1:01:38e porque mi pregunta es para básicamente
1:01:41entender cuando la enzima básicamente es
1:01:45entre comillas como que se moldea en
1:01:47base a los sustratos para para poder
1:01:51agarrarlos mejor. Supongo que es eso
1:01:53para que no se escapen, por así decir.
1:01:56Em,
1:01:58a lo que iba con esto es eh literalmente
1:02:00se unen los sustratos con la enzima o
1:02:03son ciertas eh como ligaduras, entre
1:02:07comillas, como
1:02:07interacciones débiles.
1:02:10Interacciones débiles. Perfecto.
1:02:11Claro. O sea, siguen siendo
1:02:12interacciones débiles como en otras
1:02:14proteínas. Exactamente, es exactamente
1:02:16esto lo que pasa.
1:02:17Ah,
1:02:18son
1:02:19Okay.
1:02:20Eh, lo tenemos que que pensarlo así que
1:02:24entonces este acomodamiento que decimos,
1:02:28vamos a tratar de no usar el pasa esto
1:02:31para tal otra cosa, como si la proteína
1:02:33lo pensara. A propósito, vamos a con el
1:02:35tiempo se van a ir acostumbrando a no
1:02:37decirlo de esa forma. Lo que pasa es una
1:02:39cuestión termodinámica y de interacción
1:02:42de interacciones químicas entre las
1:02:44entre las diferentes moléculas.
1:02:46Entonces, acá estamos haciendo como si
1:02:48fuese un zoom al bolsillito ese del al
1:02:51sitio activo. En este caso estaba
1:02:53general para cualquier proteína con su
1:02:54ligando, pero ahora pensemos que esto
1:02:56mismo pasa en el sitio activo de una
1:02:59enzima y entonces este sería un zoom al
1:03:02bolsillito ese que es el sitio activo. Y
1:03:05este es el ligando. Primero entró este
1:03:07ligando y a lo mejor hasta que se
1:03:09encontró este este
1:03:12esta parte del ligando con este
1:03:15aminoácido, esto estaba acomodado un
1:03:17poquito que no necesariamente estaba ahí
1:03:18cerca, estaba eh acuérdense que la las
1:03:23proteínas no son rígidas. todas las
1:03:25moléculas en la célula eh se están
1:03:28moviendo y a menos que tengamos todo en
1:03:31el cero absoluto, esa energía permite
1:03:33que
1:03:35las moléculas sean flexibles y entonces
1:03:38esta esto del ajuste inducido no es más
1:03:41que ir permitiendo que se formen estas
1:03:43uniones, que si al principio esto estaba
1:03:44apuntando un poquito para otro lado, en
1:03:47algún momento que se se estaba moviendo,
1:03:49cuando se encontraron se formó esta
1:03:51unión. Sí, eso es lo del ajuste
1:03:54inducido, pero no es que entra y
1:03:55directamente ya estaba así. Esto estaba
1:03:57flexible y a lo mejor estaba un
1:03:58poquitito más lejos, un poquito más
1:04:00cerca, pero tenía la posibilidad de
1:04:02formarse todo esto. A lo mejor en cuanto
1:04:04entra no está todo esto formado, pero si
1:04:07le damos tiempo se va formando. Y en
1:04:09otro bolsillito que estaba por ahí cerca
1:04:11pasó otra cosa parecida y es esos dos
1:04:15bolsillitos que estaban dibujados ahí.
1:04:18Vuelvo a la otra diapo,
1:04:21a esta misma.
1:04:23Acá estaban pasando esas cosas y acá
1:04:24también pasaban otras. Y ahora esto,
1:04:27estas dos moléculas que tenían que
1:04:28interactuar, había átomos acá que iban a
1:04:31interactuar con átomos de acá para que
1:04:32se forme esta unión. Están un rato
1:04:36juntos y bien cercanos porque la enzima
1:04:40los mantuvo ahí. Entonces, eso es lo que
1:04:42va a permitir que esto se forme con
1:04:44mayor probabilidad que si nadie los
1:04:45acercaba,
1:04:46¿lo entienden?
1:04:47Claro. Sí. Y siempre vos cuando hablás
1:04:51de que la enzima se reutiliza, ¿sí?
1:04:53¿Se va a reutilizar para el mismo tipo
1:04:55de sustrato en específico o puede llegar
1:04:57a tener otros? Bueno, hay enzimas que
1:05:00pueden llegar, podría haber enzimas que
1:05:02pueden llegar a cataliz, hay enzimas que
1:05:04catalizan distintas reacciones, pero el
1:05:06concepto desde que la enzima se
1:05:07reutiliza es que una vez que esto pasó,
1:05:10esto se suelta porque esta reacción así
1:05:13como se unió un ratito, todas estas
1:05:15uniones son débiles. si esto ahora formó
1:05:17otra unión y bueno, en una de esas le
1:05:19cambia un poquito la conformación y se y
1:05:21y ya hace que se suelte, o sea, esto no
1:05:25está unido para siempre, porque si
1:05:27estuviese, si esto fueran uniones
1:05:28covalentes y se queda ahí para siempre,
1:05:30ya estamos hablando de otro tipo de
1:05:32reacción que no es la que está
1:05:33ocurriendo con las enzimas, donde esto
1:05:35es débil y una vez que se formó el
1:05:37producto suele haber como algún cambio
1:05:39de conformación que hace que ya la
1:05:41enzima no sea tan tan afí y hay mayor
1:05:45probabilidad de que se suelte. Entonces,
1:05:46ahora vuelve a quedar esto libre para
1:05:48que se le una lo que sea, ya sea otra
1:05:51vez el mismo sustrato para la misma
1:05:52reacción u otra cosa en caso de que ese
1:05:54encima también haga otras reacciones.
1:05:56Ah, listo, listo, está bien,
1:05:57está bien.
1:05:58Sí, gracias.
1:05:59No, perfecto. Pero este es un concepto
1:06:01importante donde la enzima no se no se
1:06:04destruye porque en realidad no forma
1:06:05parte de la reacción, no es que la
1:06:07enzima quede enganchada o se va a romper
1:06:09por algo en particular. La enzima
1:06:11posibil favoreció que esta reacción y
1:06:15una vez que se dio la reacción, esto se
1:06:17suelta y esta encima ahora está lista
1:06:19para ser usada de vuelta.
1:06:21Sí.
1:06:23Genial.
1:06:24Genial. Entonces, eh
1:06:27yo tengo una duda.
1:06:28Sí.
1:06:30Cuando se habla de que la enzima eh
1:06:33estabiliza el estado de transición,
1:06:35¿sí?
1:06:37Por lo que entendí es cuando, o sea,
1:06:38permite que las moléculas de los
1:06:40sustratos interactúen para formar el
1:06:42producto,
1:06:44porque, o sea, si la enzima no los no
1:06:47los acercaba, era mucho menos probable
1:06:49que eso pasara por solo.
1:06:51Exacto. Exacto. Eso es bien fácil de
1:06:54entender en el caso de que vos unas dos
1:06:56cosas. V decir, ay, qué viva. Lo está
1:06:57explicando con esta que une dos cosas y
1:06:59cuando es una sola, ¿qué onda?
1:07:03No, eh, eso es como más eh más
1:07:07complicado entender, pero el tema es que
1:07:10el estado de transición para cualquier
1:07:12reacción, ya sea dos sustratos que se
1:07:15van a unir en un producto, que ahí es
1:07:16bastante claro entender porque es, ah,
1:07:18bueno, los estás acercando y los
1:07:19mantienes juntos, entonces hay un
1:07:22momento donde se está un está ocurriendo
1:07:25alguna reacción que está formándose un
1:07:27intermediario de la reacción que no es
1:07:29ni el nirato ni el producto, hay un
1:07:31intermediario que es una cosa bastante
1:07:34energéticamente bastante eh improbable o
1:07:38termodinámicamente bastante más costosa.
1:07:41hay un momento como incómodo de
1:07:43situación
1:07:44más difícil, la enzima lo estabiliza y
1:07:48pu decir, "Bueno, en el caso de dos
1:07:49sustratos uniéndose, lo entiendo porque
1:07:51eh los está acercando, pero en el caso
1:07:53de un solo sustrato que se tiene que, no
1:07:55sé, romper o modificar, bueno, la enzima
1:07:57le da algún tipo de forma o algo que
1:08:00hace que sostenga ese momento que es eh
1:08:05como energéticamente desfavorable y tú
1:08:08llegas al producto y otra vez está todo
1:08:10bien y se puede soltar. Sí, la enzima
1:08:14estabiliza ese momento de transición
1:08:17entre que no es ni el sustrato ni el
1:08:18producto y que es como más complejo. Eso
1:08:20es lo de bajar la energía de activación.
1:08:23Pero de verdad, o sea, cuando vean en
1:08:25detalle termodinámica en química y en
1:08:26orgánica, eso va a tener más sentido.
1:08:30Por ahora, tratemos de entenderlo así
1:08:32como en el formato más simple, que es
1:08:35como que hay un momento más complicado,
1:08:38eh, y como que si si no va a ocurrir
1:08:41igual porque es termodinámicamente
1:08:42favorable ir desde el sustrato hasta el
1:08:44producto, pero la enzima nos permite
1:08:47estabilizar ese momento de transición
1:08:49que es energéticamente más complejo.
1:08:52¿Está bien?
1:08:55Ahí quedó.
1:08:57Sí, profe.
1:08:58Buenísimo.
1:09:01Bueno, y entonces ahora vamos a este
1:09:03otro concepto que es que algunas enzimas
1:09:06necesitan sí o sí alguna otra molécula
1:09:10para poder para poder eh catalizar la
1:09:13reacción. no alcanza solo con la enzima
1:09:15para hacer de sustrato a producto. Y
1:09:19entonces es lo que me me gusta pensarlo
1:09:21así como asistentes y me gustó mucho
1:09:23este este concepto eh de las ameva
1:09:27Sisters y este dibujito. Y esas son las
1:09:29enzimas que se llaman conjugadas. ¿Se
1:09:32acuerdan que se las había presentado el
1:09:33primer día que dije, hay proteínas que
1:09:35solo tienen la parte proteica y hay
1:09:37otras que van a tener asociada alguna
1:09:40otra molécula que no es proteica y que
1:09:42es esencial para su función? Acá tenemos
1:09:46no no es exclusivo para las enzimas. El
1:09:48otro día se los conté con la
1:09:49hemoglobina, que no es una enzima y sin
1:09:51embargo necesita tener asociado al grupo
1:09:53emo. Sí, que entonces se llama grupo
1:09:56prostético porque es eh una parte no
1:10:02proteica y en el caso del grupo emo está
1:10:05unido covalentemente.
1:10:07Entonces acá dice, si el asistente está
1:10:08unido covalentemente se llama grupo
1:10:10prostético. Pero ya ven, este nombre no
1:10:12es exclusivo de enzimas, sino que es se
1:10:15refiere a una molécula no proteica unida
1:10:18covalentemente a la parte proteica y
1:10:20necesaria para la función,
1:10:22pero tenemos algunas que pueden estar
1:10:24unidas covalentemente y otras que no. Y
1:10:27además tenemos algunas que pueden ser
1:10:30iones, por ejemplo, que entonces son
1:10:32este tipo de, bueno, los iones son muy
1:10:35chiquititos, o moléculas orgánicas más
1:10:37grandes y entonces ahí es donde se las
1:10:39llama o cofactores o coenzimas.
1:10:42Cofactores en general se usa para los
1:10:43iones, que son eh
1:10:48típicamente eh metales y así, depende
1:10:51cuál sea la enzima. Y otros son
1:10:53moléculas orgánicas que suelen ser como
1:10:55transportadoras de átomos o de
1:10:56electrones y muchas son derivados de
1:10:59vitaminas y son absolutamente
1:11:02necesarias. La enzima no puede cumplir
1:11:04su función sin tener asociado el
1:11:06cofactor o la coenzima en el caso de que
1:11:08sea una enzima que lo necesite. ¿Sí? Y
1:11:11en ese caso, cuando la enzima está
1:11:14completa, se la llamaenzima,
1:11:16que es la parte proteica, incluyendo la
1:11:19parte no proteica. ¿Estamos bien?
1:11:23La parte proteica se la llama apoenzima
1:11:26y a la parte no proteica que puede ser
1:11:28cofactor o coenzima,
1:11:32bueno, se la llama cofactor o coenzima,
1:11:34¿no? Es la parte no proteica y se la
1:11:35llama cofactor o coenzima, dependiendo
1:11:38cómo sea o grupo prostético si está
1:11:39unido covalentemente. Sí, no importa. Yo
1:11:43digo por si les van apareciendo esos
1:11:44nombres, se hacen un poco de lío, está
1:11:46todo acá explicado, les queda ya en la
1:11:48diagon y algunas enzimas necesitan de
1:11:51los dos, necesitan un cofactor y una
1:11:55coenzima y entonces tendríamos la parte
1:11:57proteica que es la apoenzima, el
1:11:59cofactor y la coenzima. Y entonces todo
1:12:02esto es la oenzima, pero otras se
1:12:05arreglan con uno solo y otras ni
1:12:07siquiera lo necesitan. ¿Sí?
1:12:10Y acá esta otra tablita del Alberts es
1:12:12para que eh solo para que tengan una
1:12:15idea, obviamente, no para que se la
1:12:17prendan, pero vieron que a veces que
1:12:21siempre dicen, "Bueno, hay que
1:12:23incorporar vitaminas y esto está
1:12:25buenísimo que comas esta comida porque
1:12:27tiene tal vitamina o tal otra."
1:12:29Fíjense la importancia enorme de las
1:12:31vitaminas, que hay un montón de
1:12:32coenzimas que derivan de vitaminas y
1:12:34tenemos un montón de enzimas que
1:12:36necesitan esas coenzimas, así que sin
1:12:38las vitaminas no podemos hacer un montón
1:12:41de reacciones. Los convencí tienen que
1:12:44incorporar vitaminas.
1:12:47Bueno, entonces ahora ya sabemos lo que
1:12:49son las enzimas. tenemos un montón de
1:12:51definiciones y cosas sobre
1:12:55eh
1:12:59sobre las enzimas y podemos entender un
1:13:01poquito mejor esto que habíamos visto de
1:13:03cómo podíamos revelar dónde estaban los
1:13:06anticuerpos en el western usando
1:13:07enzimas. Fíjense que si tenemos esta
1:13:10enzima,
1:13:11eh, este primer caso que habíamos dicho,
1:13:13e la la enzima produce un producto
1:13:15coloreado. Bueno, ahora ya sabemos que a
1:13:17la enzima le podemos dar un sustrato y
1:13:19va a dar un producto y en las
1:13:21condiciones en que se está todo
1:13:23preparado y se hace esto, ese producto
1:13:25queda ahí depositado en el lugar donde
1:13:28está el anticuerpo. Ahora, si el
1:13:29producto sale nadando para todos lados,
1:13:30no me va a servir. Esto está hecho en
1:13:32unas condiciones donde el producto queda
1:13:34ahí justo en ese lugar o enzimas que
1:13:37reaccionen, perdón, que catalicen
1:13:39reacciones
1:13:41donde de acá para acá lo que veo en
1:13:43realidad es la luz que se emite al hacer
1:13:45esta transformación. Hay enzimas que
1:13:47hacen eso. E
1:13:53así que bueno,
1:13:55creo que ahora tenemos que ir a una
1:13:56parte donde ya los necesito un poquito
1:13:58más despejados y son las 11:10. Les Ah,
1:14:01no, pero tenemos hasta las 12:30.
1:14:04¿Seguimos un ratito más? ¿Cómo andan?
1:14:06¿Seguimos tipo 10, 15 minutos más o
1:14:09necesitan ahora el intervalo?
1:14:13Seguimos. ¿Seguimos?
1:14:16¿Van bien? Si van bien, seguimos.
1:14:18Seguimos un ratito, vemos este tema y
1:14:20después hacemos el intervalo. Sí.
1:14:23Profe, ¿te puedo hacer una pregunta? Sí,
1:14:25obvio.
1:14:26Eh, en la parte anterior donde hablas de
1:14:28anticuerpos en las enzimas,
1:14:30sí.
1:14:31Eh, si, o sea, no entiendo si eh porque
1:14:36dice diferentes formas de ver donde
1:14:37están los anticuerpos. Siempre va a
1:14:39haber un anticuerpo
1:14:41o cómo funciona eso? No, no, esto es
1:14:43simplemente hice un paréntesis volviendo
1:14:46al al western que les conté la clase
1:14:48pasada, que la clase pasada les dije,
1:14:50para revelar dónde está la proteína de
1:14:53interés mía en la membrana del western,
1:14:55puede usar un anticuerpo primario que lo
1:14:57reconozca y ese anticuerpo lo miro con
1:14:59un anticuerpo secundario, pero ese
1:15:00anticuerpo secundario
1:15:02sería invisible si no le pongo nada para
1:15:05verlo. Y hay diferentes estrategias para
1:15:07verlo. Y una estrategia que es como la
1:15:09más
1:15:10fácil de imaginar es que ese anticuerpo
1:15:12tenga algo, un fluoróforo. Entonces,
1:15:14listo, le doy con la luz que necesita
1:15:17este fluoróforo para excitarse y lo
1:15:18puedo ver porque emite flores.
1:15:20Ah, o sea, estabas integrando el tema
1:15:22anterior en esto.
1:15:23Estaba integrando el tema anterior
1:15:24porque la vez pasada les dije, hay
1:15:26anticuerpos que en la parte de acá atrás
1:15:28o que para revelar el secundario tienen
1:15:30una enzima, pero la verdad es que
1:15:32todavía no habíamos hablado de enzimas y
1:15:33ahora ya empezamos a hablar de enzimas.
1:15:36Entonces, por eso volví a ese tema. Nada
1:15:38más.
1:15:38Listo, gracias.
1:15:39Porque además les había prometido que lo
1:15:41iban a ver mejor, lo iban a terminar de
1:15:44entender cuando hayamos visto enzimas.
1:15:46Entonces, simplemente se los traje acá
1:15:47para que ustedes después se acuerden de,
1:15:49"Ah, para, ahora que ya entendí lo de
1:15:50las enzimas, voy a ir a volver a mirar
1:15:52esto que capaz no lo entendí del todo."
1:15:54Eso era nada más.
1:15:56Ah, okay. Gracias.
1:15:57Está bien.
1:15:59Bueno, entonces ahora, ¿cómo podemos
1:16:01medir o detectar la actividad de una
1:16:03enzima?
1:16:05que también antes le dije, alguien me
1:16:07preguntó, "¿Y cómo me doy cuenta eh
1:16:09dónde está la enzima o dónde están las
1:16:10proteínas?" Bueno, podemos ver si es un
1:16:12enzima, podemos ver la actividad de
1:16:14alguna manera.
1:16:16Entonces, las dos posibilidades,
1:16:20bueno, en realidad hay más, pero una
1:16:22sería
1:16:24ver la aparición de producto o ver la
1:16:29desaparición de sustrato. Sí, si yo
1:16:32tengo que una reacción enzimática que me
1:16:34da un producto que uno de los productos
1:16:37o el producto es de color o es
1:16:40fluorescente o algo, lo puedo lo puedo
1:16:42ver y lo puedo medir.
1:16:44Ahora, si me es más fácil tener un
1:16:46sustrato de color, lo que podría hacer
1:16:48es ir viendo cómo desaparece o ver cómo
1:16:50aparece el producto o ver cómo
1:16:52desaparece el sustrato. ¿Cuál hago? La
1:16:55que pueda. Dependiendo la enzima, a lo
1:16:57mejor voy a tener moléculas que sea más
1:16:59fácil inventarme una molécula de color o
1:17:02fluorescente para el sustrato o para el
1:17:04producto. O sea, no es que hay una regla
1:17:06y es siempre es mejor tal cosa o mejor
1:17:08tal otra. La realidad es que es lo que
1:17:10pueda yo hacer en el laboratorio. Sí.
1:17:13Y de hecho uno de los productos, como en
1:17:15el caso que les conté recién, uno de los
1:17:17productos podría ser luz. Cuando digo
1:17:19produce un producto y en el medio eh
1:17:21sale luz, bueno, la realidad es que en
1:17:24ese caso la luz sería uno de los
1:17:25productos. Entonces, estaríamos en una
1:17:27situación como si fuese esto. ¿Sí?
1:17:31Bueno, y entonces el que sea más fácil
1:17:33de medir y hay diferentes métodos que
1:17:36uno puede hacer como para que además sea
1:17:38algo que uno pueda cuantificar, darle
1:17:40números, valores numéricos para poder
1:17:43hacer un análisis cuantitativo y no solo
1:17:45decir acá está, acá hay más, acá hay
1:17:47menos, medio a ojo. Hay cosas que uno
1:17:51puede directamente cuantificar, por
1:17:53ejemplo, si es un color por absorbancia
1:17:56con un espectrofotómetro
1:17:58a midiendo cierta longitud de onda, la
1:18:01absorbancia a cierta longitud de onda o
1:18:04si es algo fluorescente, uno podría
1:18:06cuantificar esa fluorescencia también
1:18:07con un equipo especial.
1:18:10Tenemos un TP que es el TP de eh
1:18:13actividad de alfamilaza, donde medimos
1:18:16justamente la actividad de la enzima
1:18:19esta alfamilaza que la sacamos de la
1:18:21saliva. Ustedes van a tener que juntar
1:18:23saliva y de ahí en en la saliva hay está
1:18:26la enzima alfa milasa y vamos a hacer
1:18:28diferentes tratamientos al encima para
1:18:31ver cómo se afecta cambiándole el pH,
1:18:34calentándola,
1:18:35eh agregándole cosas, qué sé yo. Y lo
1:18:37que vamos a medir es
1:18:39desaparición del sustrato. Vamos a
1:18:41ponerle un sustrato que lo que que tiene
1:18:43un color y vamos a ir viendo cómo
1:18:44desaparece. Está buenísimo.
1:18:48Bueno,
1:18:48profe, una pregunta.
1:18:49Sí.
1:18:51Eh, imagino que la enzima al ser una
1:18:53proteína y que le afecte tanto la
1:18:55temperatura y el pH.
1:18:58Sí.
1:18:58Supongo entonces que hay un equilibrio
1:18:59en el que dependiendo el pH y la
1:19:01temperatura en la que está tiene un
1:19:03punto máximo de producción de productos.
1:19:06Exacto. Eso de hecho es lo que van a
1:19:08buscar ustedes. Se van a ir a fijar o o
1:19:12si uno quisiera averiguar cuál es el la
1:19:14condición donde tiene su máxima
1:19:16actividad, uno tendría que poder medir
1:19:18la actividad, por ejemplo, a una
1:19:21temperatura, a otra temperatura, a otra
1:19:22temperatura, a otra temperatura y ahí
1:19:24encontrar. Ahora en un ratito aparecen
1:19:26esas diapos o un pH, otro pH. Ahora ahí
1:19:28vamos a eso.
1:19:30Sí, de hecho eso van a ser en el TP. A
1:19:32lo mejor no van a ser un montón de
1:19:33temperaturas, un montón de pHs, pero sí
1:19:36van a ser varios puntos como para ver
1:19:38las diferencias. Pero entonces, antes de
1:19:41empezar a variarlas, miremos cómo cambia
1:19:42la temperatura a una condición, perdón,
1:19:44cómo cambia la
1:19:47cómo cómo medimos la actividad en una
1:19:48condición fija. Sí, después vamos a ir
1:19:50viendo los cambios. Si vamos a medir
1:19:53actividad,
1:19:55eh, perdón, aparición de producto en
1:19:58función del tiempo, esto sería cómo
1:20:01aparece el producto en función del
1:20:03tiempo, ¿no? A lo mejor que yo si esto
1:20:05es un producto de color amarillo que yo
1:20:09puedo mirar la absorbancia, una longitud
1:20:12de onda en particular que cuanto más hay
1:20:14más valor de de absorbancia me da. Este
1:20:17eje sería absorbancia a tal longitud de
1:20:20onda que es directamente proporcional a
1:20:22cuánto producto se produce. Y esto es el
1:20:24tiempo, ¿no? A medida que que avanza que
1:20:27pasa el tiempo va apareciendo el
1:20:29producto y llega un punto donde ya
1:20:31listo, no aparece más porque se acabó
1:20:33todo el sustrato que había o porque le
1:20:35pasó algo o porque yo ya no puedo
1:20:36detectar más cantidad. Sí, pero lo
1:20:39importante es esto, va apareciendo el
1:20:41producto en función del tiempo y en
1:20:44cambio, si mido sustrato, al revés,
1:20:45empiezo de una cantidad de sustrato y a
1:20:48medida que pase el tiempo va
1:20:49desapareciendo. Acá también imaginemos
1:20:51un sustrato de un color que yo lo puedo
1:20:53cuantificar de alguna manera y voy
1:20:55viendo entonces a medida que pasa el
1:20:57tiempo cómo baja.
1:21:00Ahora, ¿cuál es la diferencia entre
1:21:04estas curvas? Comparemos estas curvas,
1:21:07esta naranjita con esta amarilla y con
1:21:09esta amarilla clarita, son todas
1:21:13aparición de producto en función del
1:21:14tiempo. Pero, ¿qué ven acá? O en este
1:21:18caso desaparición del producto en
1:21:19función del tiempo. ¿Cuál es la
1:21:20diferencia? Una llevó más rápida,
1:21:22digámosle, una crecimos más rápidamente.
1:21:25Exactamente.
1:21:27Esta es como que enseguida chuk apareció
1:21:31el producto y este en cambio el producto
1:21:34tarda más tiempo en aparecer, ¿no? Y acá
1:21:37esta enseguida desapareció el producto,
1:21:39pasó repoquito tiempo y desapareció el
1:21:41producto y esta,
1:21:43perdón, el sustrato y esta va tardando
1:21:46más tiempo y va más lento. ¿Lo ven
1:21:48todos? Es muy importante que vayan
1:21:51entendiendo, vayan viendo cómo es que se
1:21:53interpretan estos gráficos. ¿Sí? Siempre
1:21:56uno tiene que saber qué son los ejes. En
1:21:58este caso, absorbancia en función del
1:22:00tiempo me está representando cantidad de
1:22:01producto en función del tiempo. Acá está
1:22:03representado como que lo que es de color
1:22:05es el producto y este absorbancia en
1:22:07función del tiempo es en este caso que
1:22:09estoy midiendo el sustrato, ¿no?
1:22:12Es importante ver esta pendiente. Si es
1:22:14una pendiente pronunciada quiere decir
1:22:16que pasó más rápido y esta es una
1:22:18pendiente más lenta y entonces va
1:22:20pasando es una reacción más lenta. Esto
1:22:24entonces puede haber sido el caso donde
1:22:25yo me di actividad enzimática en una
1:22:29condición donde era más rápida o en una
1:22:31condición donde era más lenta o una
1:22:34enzima tipo, mira la encima, no sé esta
1:22:38la encima de tu saliva o la encima de mi
1:22:40saliva y capaz son distintas porque hay
1:22:42distinta concentración o algo. Sí, pero
1:22:45es importante esto que vayan
1:22:47entendiendo. ¿Me siguieron?
1:22:50Sí, profe.
1:22:51Genial. Sí,
1:22:52sí, profe.
1:22:53Bueno, entonces tenemos más rápido o más
1:22:55lento.
1:22:58Entonces, ahí sí vamos a esa pregunta
1:23:00que me habían hecho hace un ratito. ¿Qué
1:23:02pasa si salimos de la zona de confort
1:23:04donde la enzima anda bárbaro?
1:23:07Exactamente. Cambia la actividad
1:23:08enzimática. ¿Se acuerdan que habíamos
1:23:10dicho general para proteínas, no? Y
1:23:12entonces también aplica para enzimas,
1:23:14que si a una enzima le podemos hacer
1:23:17esto, imaginemos que la calentamos o le
1:23:19ponemos alguna molécula, esto era urea,
1:23:22estaba representado así amarillito, la
1:23:24urea, que se metía así y y nos
1:23:26desarmaban los puentes de hidrógeno. O
1:23:27sea, si le hago algo que le cambie su
1:23:30estructura tridimensional,
1:23:32ahora que estamos pensando en la enzima,
1:23:34que ya vieron re claro que la estructura
1:23:36tridimensional de una enzima es
1:23:37reimportante para que el sitio activo
1:23:40pueda enganchar perfecto al sustrato que
1:23:42tenga la forma y los aminoácidos que
1:23:45iban a interactuar con el sustrato justo
1:23:47justo en posición. ¿Se imaginan que si
1:23:49yo hago esto es un desastre, ¿no? Para
1:23:52la actividad enzimática.
1:23:54Entonces vamos a este concepto y es que
1:23:56para que una proteína sea funcional
1:23:59y vale para cualquier proteína y para
1:24:01las enzimas también debe tener cierta
1:24:03estructura y que entonces hay una
1:24:05relación muy importante entre estructura
1:24:07y función. Pierdo la estructura, pierdo
1:24:09la función, vale general para todas las
1:24:11proteínas, incluyendo las enzimas.
1:24:14Entonces, si estamos en condiciones no
1:24:16ideales que afectan la estructura de la
1:24:18función,
1:24:20la estructura y la función de la enzima,
1:24:22es el fantasmita del Pacman
1:24:25destruyendo las condiciones no ideales,
1:24:29eh, afectando al enzima. Y entonces me
1:24:32encantó esto, es el videío es muy
1:24:34divertido,
1:24:35eh, donde tenemos sal encima y
1:24:40el sustrato le dice, "Has cambiado
1:24:42porque ya algo le pasó y no puede
1:24:44enganchar bien en su sitio activo." Y es
1:24:47no me pareció muy simpático. Puesto acá
1:24:50yo sola en mi casa con la cámara y nadie
1:24:54ahí. No sé si les divirtió o no, pero no
1:24:55importa.
1:24:57Eh,
1:24:57sí, está bueno, profe, está bueno.
1:24:59Simpático.
1:25:01Eh, me siento tan en pandemia con esta
1:25:04clase así,
1:25:06pero bueno. Bueno, entonces, ¿qué
1:25:07parámetros son los que pueden hacer eh
1:25:10pueden cambiar la actividad enzimática?
1:25:13Hay un montón de cosas,
1:25:16pero básicamente diferentes cosas que
1:25:18afecten la estructura, seguro, y algunas
1:25:20otras cosas también. En principio el pH
1:25:23y la temperatura y algunos compuestos en
1:25:25particular. Y además puede haber
1:25:27moléculas que sean inhibidores o
1:25:29actividadores y que funcionen por
1:25:30distintos mecanismos. Y ahora en un
1:25:32ratito entramos bien en profundidad en
1:25:34eso. Pero entonces una de las
1:25:37condiciones que afecta la velocidad de
1:25:39reacción, que no lo vimos, pero que no
1:25:41tiene que ver con la actividad, con la
1:25:43forma de la enzima, es la concentración
1:25:46de sustrato. Es algo que no vimos, pero
1:25:47es algo que tenemos que tener en cuenta.
1:25:50Si yo tengo muy poquito sustrato, lael,
1:25:54si yo mido la velocidad de la enzima con
1:25:57muy poquitito sustrato, por ejemplo,
1:25:59saco acá, tengo una condición donde lo
1:26:02medico poquito sustrato, voy a tener
1:26:03poca actividad, poca velocidad.
1:26:06¿Porque? ¿Por qué? Porque en realidad si
1:26:09tengo poco sustrato, voy a tener un
1:26:11montón de enzimas aburridas que no se
1:26:12encuentran con ningún sustrato. Entonces
1:26:15voy a estar midiendo la la velocidad
1:26:20mayor que me puede dar esa solución
1:26:21porque tengo un montón de enzimas sin
1:26:23actuar. Si pongo más sustrato, voy a
1:26:26tener más. Si tengo más sustrato, voy a
1:26:28tener más. Y además aumenta la
1:26:30probabilidad de que se encuentre el
1:26:32enzima con el sustrato, porque todo se
1:26:34está moviendo por ahí, pero si hay muy
1:26:35poco sustrato, no se van a encontrar ni
1:26:37locos. Sí,
1:26:38profe.
1:26:39Sí.
1:26:40Igual cuando hay mucho sustrato, ¿no hay
1:26:42como una probabilidad de que la enzima
1:26:44se sature.
1:26:46Bueno, pero si la enzima se satura, lo
1:26:48que voy a estar haciendo es
1:26:50asegurándome, si yo estoy en una
1:26:52condición donde el sustrato no es no es
1:26:54limitante, es lo que se llama
1:26:58medir la actividad en condiciones
1:27:00saturantes de sustrato. Y eso es algo
1:27:02que voy a tener que hacer. Eso lo van a
1:27:05ver super en profundidad después, igual
1:27:06en QB, pero piensen que si yo quiero ver
1:27:09cómo otros factores que no sean el
1:27:12sustrato afecta la la proteína, yo digo,
1:27:15ahora le voy a cambiar el pH, ahora le
1:27:16voy a cambiar la temperatura y yo quiero
1:27:20estar seguro que lo que mido, si ahora
1:27:22detecto que hay menos actividad o más
1:27:24actividad, quiero estar segura que no
1:27:25hay ninguna enzima ahí aburrida que no
1:27:27se encontró con el sustrato, sino que
1:27:28estoy midiendo al máximo posible, pero
1:27:32si veo cambios en en la actividad por el
1:27:35lo que yo hice no es porque había poco
1:27:37sustrato, sino que es porque le cambié
1:27:39el pH o porque le cambié la temperatura
1:27:41o porque le agregué tal inhibidor o tal
1:27:43cosa. Entonces, lo que yo quiero es que
1:27:45el sustrato no sea limitante, que la
1:27:47enzima siempre tenga sustrato
1:27:50disponible. ¿Cuándo voy a medir? en
1:27:52condiciones, o sea, cuando voy a medir
1:27:55la actividad de la enzima y quiero saber
1:27:58cómo está variando por otras cosas, no
1:28:00por el sustrato. Entonces,
1:28:03todas esas determinaciones que uno hace
1:28:05cambiando cosas las tiene que hacer en
1:28:07el en condiciones donde
1:28:10saturantes de sustrato. ¿Sí? O sea, eso
1:28:13que vos dijiste es verdad, está saturada
1:28:15la enzima, pero estar saturada no quiere
1:28:16decir que uy, no puedo hacer nada.
1:28:18Quiere decir estoy en condiciones donde
1:28:19todas las enzimas siempre se están
1:28:21encontrando con sustratos. todas las
1:28:22enzimas funcionales. ¿Está bien?
1:28:25Sí. Genial. Gracias.
1:28:27Perfecto. No, de nada. Bueno, entonces a
1:28:29mayor concentración de sustrato, aumenta
1:28:31la probabilidad de encuentro encima
1:28:34sustrato. Y acá les aviso que ojo, que
1:28:36esta curva no es siempre sí. Hay otras
1:28:37enzimas que tienen unas curvas distintas
1:28:39que ahora en un ratito las vamos a ver.
1:28:41Pero entonces volvemos a qué parámetros
1:28:43pueden afectar la actividad enzimática.
1:28:45Vamos a medirlos todos en
1:28:46concentraciones saturantes de sustrato
1:28:48para solo enfocarnos en estas cosas que
1:28:51vamos a cambiar.
1:28:53Ahí está. Acá justamente lo decía.
1:28:57Y entonces, volviendo a esto que lo van
1:29:00a hacer en el TP, ¿qué pasa con la
1:29:02enzima de diferentes temperaturas?
1:29:05Bueno, pasa esto. Más o menos tienen
1:29:08este tipo de curvas.
1:29:11¿Y qué es lo que está pasando? Vamos a
1:29:13tener una temperatura donde sea la
1:29:16óptima, donde más la mayor cantidad de
1:29:18enzimas esté actuando. Sí,
1:29:21pero si aumentamos la temperatura, eso
1:29:24es algo que ya sabemos. ¿Qué pasa acá?
1:29:27Si vamos aumentando la temperatura, las
1:29:29enzimas se van desnaturalizando.
1:29:30Entonces, acá cae la actividad
1:29:32enzimática.
1:29:34Cae la actividad enzimática. ¿Por qué?
1:29:36Porque cada vez tenemos menos moléculas
1:29:38de enzima que pueden que están en una
1:29:41conformación funcional. se me van
1:29:43desarmando las enzimas y
1:29:46ya el sitioactivo no va a reconocer a a
1:29:49al sustrato y la enzima no va a ser
1:29:50funcional. Pero ahora para este lado de
1:29:53la curva, perdón, para este lado de la
1:29:55curva, ¿qué está pasando? ¿La en
1:29:58desnaturalizada?
1:30:01Si baja la temperatura.
1:30:04Eh, no,
1:30:05no. De este lado no es que me baja la
1:30:07actividad porque la enzima está
1:30:09desnaturalizada, sino que de este lado
1:30:11tenemos menos actividad porque está
1:30:13bajando la energía del sistema. Al haber
1:30:15menos temperatura, todo se empieza a
1:30:17mover más lento y entonces baja la
1:30:19probabilidad de encuentro de enzima
1:30:21sustrato y aún cuando se encuentra el
1:30:23enzima con el sustrato baja también esa
1:30:27probabilidad de que la enzima se acomode
1:30:30bien y se formen todas esas uniones que
1:30:32les conté antes y de que ocurra la
1:30:35reacción que vaya a ocurrir. Entonces,
1:30:37lo que está pasando de este lado de la
1:30:38curva es
1:30:41menor energía cinética en el sistema y
1:30:43entonces menor probabilidad de encuentro
1:30:46y de reacción. En cambio, de este lado
1:30:48baja la cantidad de reacciones que
1:30:50ocurren porque se van desnaturalizando
1:30:51las enzimas. Sí,
1:30:54hay enzimas que a lo mejor toleran
1:30:57mayores temperaturas, hay enzimas que a
1:30:59lo mejor funcionan e me las encuentro en
1:31:02organismos que viven a altas
1:31:03temperaturas. Entonces, claramente
1:31:05fueron seleccionaron
1:31:08eh tendrán ciertos aminoácidos que hacen
1:31:10que esa enzima sea restable y que por
1:31:12más que caliente aguante, porque si no
1:31:15no existiría ese organismo a esa
1:31:16temperatura. Sí, perdón, había una
1:31:18pregunta y yo no dejé hablar.
1:31:20Sí, perdón, interrumpí. Eh, la enzima
1:31:23solo se puede desnaturalizar con calor,
1:31:25o sea, que si yo la enfrío,
1:31:28no, porque dijiste, viste que está
1:31:30inactiva, pero como que se podía, o sea,
1:31:34después iba a funcionar, o sea, no se
1:31:36puede desnaturalizar con frío.
1:31:39O sea, el frío no desnaturaliza una
1:31:40enzima porque el hecho de que se
1:31:42desnaturalicen, o sea, ¿por qué se por
1:31:45qué se desnaturaliza con calor? Porque
1:31:47cuando uno entrega energía, todas las
1:31:50uniones débiles
1:31:52eh se rompen porque todos los átomos
1:31:55empiezan a vibrar y estoy entregando más
1:31:57energía y entonces todo se está moviendo
1:31:59tanto que no hay ninguna unión que
1:32:01permita que yo pueda que esa condición
1:32:04de alta temperatura eh permita que quede
1:32:07estable. O sea, la alta temperatura
1:32:09desnaturaliza porque
1:32:12todo se empieza a mover demasiado rápido
1:32:13y entonces las uniones débiles ya no
1:32:16pueden permanecer estables. Después hay
1:32:18otras formas de desnaturalizar como la
1:32:20que les conté, por ejemplo, con urea que
1:32:23se mete, interfiere con los puentes eh
1:32:25con los puentes hidrógeno y después
1:32:27otras moléculas otras que también
1:32:29interfieren con esas uniones.
1:32:31Y además si uno quiere romper los
1:32:33puentes de sulfuro con el betamercapto
1:32:34que hablamos la otra vez, pero con el
1:32:37frío yo no puedo desnaturalizar porque
1:32:39lo que hago bajando la temperatura no es
1:32:41romper ninguna unión, sino si yo tenía
1:32:43una enzima que está con su con su
1:32:46estructura funcional y le bajo la
1:32:48temperatura, esa estructura va a quedar,
1:32:49solo que va a estar más rígida la encima
1:32:51y entonces no va a funcionar porque uno
1:32:54necesita cierta movilidad.
1:32:56Primero necesitas energía para que se
1:32:58encuentre encima con el sustrato,
1:33:01porque si no hay movimiento, no hay
1:33:02energía. Y aparte necesitas energía para
1:33:04que se pueda unir la encima con el
1:33:07sustrato, se puedan volver volver a se
1:33:10puedan formar esas nuevas uniones,
1:33:14interacciones entre la enzima y el
1:33:15sustrato y además pueda ocurrir la
1:33:17reacción con baja energía. La razón por
1:33:20la que baja la actividad enzimática no
1:33:22es que se desnaturaliza porque las
1:33:23enzimas quedaron ahí, sino que no hay
1:33:27energía para que ocurran las reacciones,
1:33:28no se encuentran las cosas y nada está
1:33:30moviéndose o muy pocas cosas, sí, a lo
1:33:34mejor ocurren más lento o hay pocas
1:33:36moléculas que justo tuvieron la la eh
1:33:40por casualidad y por baja probabilidad
1:33:41se encontraron con un sustrato y
1:33:43entonces uno encuentra un producto
1:33:44apareciendo cada tanto y es una cuestión
1:33:47de baja probabilidad y velocidad lenta
1:33:49de reacción.
1:33:51No sé si esa era tu pregunta,
1:33:53¿no? Sí, sí, entendí, entendí. Ahora, si
1:33:55tu pregunta es, si yo desnaturé
1:33:57desnaturalicé la enzima y ahora una vez
1:34:00desnaturalizada le bajo la temperatura,
1:34:02ese es otro problema que lo vamos a ver
1:34:04dentro de un ratito. A ver qué pasa, a
1:34:06ver si puede o no recuperar la
1:34:07estructura nativa. Eso lo vemos dentro
1:34:09de un rato.
1:34:11Bueno, genial. Entonces, ya entendimos
1:34:12la razón por la que una actividad
1:34:14enzimática pueda eh puede ser diferente
1:34:18a distintas temperaturas y va a haber
1:34:19una actividad óptima. Ojo, cuando
1:34:21decimos una temperatura óptima, una cosa
1:34:25es óptima para medir esa enzima y otra
1:34:28cosa es óptima para la vida.
1:34:31Esto que es óptima temperatura quiere
1:34:34decir a en la temperatura en la que yo
1:34:37encontré máxima actividad enzimática, no
1:34:39necesariamente es la óptima para la
1:34:41vida. Porque a lo mejor en la vida que
1:34:44yo me puedo encontrar una temperatura
1:34:46óptima, no sea 38º
1:34:48y resulta que
1:34:51normalmente esa enzima está a 36 donde
1:34:54la actividad es un poquito más baja,
1:34:55pero eso de hecho está bueno y se
1:34:58seleccionó así y así funciona porque
1:35:01permite que esa enzima puede pueda
1:35:04funcionar un poco más todavía. O sea,
1:35:06tenemos rango. En general, las cosas en
1:35:08la célula no están siempre funcionando
1:35:10al mango, están funcionando en un nivel
1:35:13donde pueden ser regulados tanto para
1:35:14abajo como para arriba. Y eso es lo que
1:35:16funciona genial en la célula y se
1:35:18seleccionó a lo largo de la evolución.
1:35:21No, no confundan actividad óptima con
1:35:24así va a funcionar en la célula. Seguro
1:35:26que en la célula tiene que estar en una
1:35:27condición donde ande, pero es probable
1:35:29que no sea donde ande al mango total. Y
1:35:31eso es justamente algo que está
1:35:33buenísimo porque se puede regular
1:35:35también para arriba, no solo para abajo.
1:35:37Estamos.
1:35:39Bueno, y también el pH nos va a ser algo
1:35:42que nos afecte eh la actividad
1:35:44enzimática. Y acá, por ejemplo, tenemos,
1:35:47no sé, una una enzima que es la pepsina,
1:35:51que es una enzima del estómago, en la
1:35:53cual el pH óptimo donde encontramos
1:35:56máxima actividad es un pH recontraácido,
1:35:59¿sí? Cerca de dos, mientras que la
1:36:02tripsina, que es una enzima que funciona
1:36:04en el intestino, tiene un pH bastante
1:36:06alcalino, ocho y pico. ¿Sí? Y fíjense
1:36:10que son enzimas que están en ambientes
1:36:13diferentes y claramente funcionan a pHs
1:36:17distintos.
1:36:18¿Por qué? A ver, no me acuerdo qué diapo
1:36:21tengo. Ah, ¿qué pasa si ponemos más
1:36:23encima? ¿Por qué eh el pH altera la
1:36:27actividad enzimática?
1:36:29¿Por qué lo afecta? ¿Qué está pasando a
1:36:32un lado y otro de la curva acá? y que el
1:36:35ambiente es en un lado más ácido y en el
1:36:38otro es más básico, o sea, que hay mayor
1:36:40eh
1:36:42como mayor presencia de protones y
1:36:44electrones.
1:36:45Perfecto. Y entonces,
1:36:47por lo tanto, la carga la carga es
1:36:49diferente y se desnaturaliza. Va, estoy
1:36:52asumiendo, pero asumo que en diferentes
1:36:55ambientes se desnaturaliza con mayor
1:36:56facilidad o no.
1:36:58Claro, porque exactamente porque lo que
1:37:00pasa es que
1:37:02todos los aminoácidos de la de de la
1:37:05enzima,
1:37:06como pasaba con cualquier proteína, a
1:37:08diferentes pHs van a ir cambiando su
1:37:11carga porque se van a protonar o se van
1:37:13a desprotonar y al ir cambiando su carga
1:37:15también van a ir cambiando
1:37:17cómo interactúan entre ellos las cadenas
1:37:19laterales y eso va a terminar cambiando
1:37:21la estructura tridimensional de la
1:37:23proteína,
1:37:24toda la estructura y además el sitio
1:37:26activo.
1:37:27Y entonces a veces hay enzimas muy muy
1:37:30sensibles que uno les cambia penitas el
1:37:32pH y ya pierden porque incluso necesitan
1:37:35tener átomos eh perdón, cadenas
1:37:38laterales de los aminoácidos que tienen
1:37:40átomos con cierta carga. Si ese esa
1:37:43carga, ¿vieron como el dibujo que les
1:37:44mostré al principio eh que había
1:37:47aminoácidos cargados que interactuaban
1:37:49directamente con una carga de ligando,
1:37:52eso está en el sitio activo. Si cambia
1:37:53un poquito el pH, esa carga desaparece y
1:37:55ya cambia. cuán fuerte puede interactuar
1:37:58con el ligando, porque una de las
1:37:59uniones la va a perder. Entonces, se
1:38:02desarma la enzima y además puede con un
1:38:05cambio mínimo que capaz no logra
1:38:07desarmarme la encima, ya me puede llegar
1:38:08a cambiar algo muy importante del sitio
1:38:10activo. ¿Lo entendieron?
1:38:13De hecho, en el cuerpo humano el pH, o
1:38:16sea, no tiene muy poca variación,
1:38:18siempre funciona entre dependiendo de la
1:38:20célula, pero siempre funciona tipo entre
1:38:217.1, un 6,9 como que
1:38:24claro,
1:38:25o sea, digo, así de chiquito es como el
1:38:27espacio que tiene para variar el pH.
1:38:31Exactamente. Eh, bueno, eso en la
1:38:33mayoría de las células. Después tenemos
1:38:35ciertos tejidos, como les mostré recién
1:38:37el intestino o y el estómago, que ahí
1:38:40tenemos pHs,
1:38:43pHs como yéndose de más para el ácido,
1:38:46más para el calino. Eh, y fíjense que
1:38:49acá estas se las quería mostrar.
1:38:54Eh,
1:38:56acá me sonaba.
1:38:59tenemos directamente en el sitio activo
1:39:01una arginina que tiene que estar
1:39:02cargada. Si yo me me voy me muevo de pH
1:39:05y se pierde esta carga, pierdo esta
1:39:07unión y a lo mejor ya esta interacción
1:39:10no se da. ¿Se dan cuenta? a lo mejor no
1:39:12necesite desarmar toda la enzima por el
1:39:13cambio de pH, sino con un poquito de
1:39:16algún aminoácido que ya pierda su carga,
1:39:18es probable que eso afecte la función
1:39:20del enzima porque directamente afecta
1:39:22las uniones que se pueden estar
1:39:24formando, las interacciones que se
1:39:26forman con con el ligando. ¿Está bien?
1:39:29Y profe, una consulta.
1:39:32Sí.
1:39:33Eh, puede pasar que vos si sometima, a
1:39:37cierta temperatura
1:39:39eh, que la saca de balance o a cierto pH
1:39:42que que la perjudica no tenga vuelta
1:39:45atrás, que ya la encima entra un lugar
1:39:47que no vuelva a funcionar.
1:39:49Sí. O sea, cualquier cosa que hagas para
1:39:51desnaturalizarla encima, ya sea por
1:39:53haberle cambiado el pH o por haberla
1:39:56calentado o por haberle agregado alguna
1:39:57solución que la desarma, después, aunque
1:40:00vos le saques esa solución o le bajes la
1:40:02temperatura, hay que ver si puede volver
1:40:05a su estructura nativa funcional, que
1:40:07eso es lo que vamos a hablar dentro de
1:40:08un ratito para pensar en la
1:40:09reversibilidad y la desnaturalización.
1:40:12Eso lo vemos en un ratito, pero es
1:40:13verdad ese concepto de si la desarmé,
1:40:16hay que ver si la puedo volver a armar.
1:40:18Sí. Claro,
1:40:19ya les adelanto en general, ¿no?
1:40:24Ah, okay. Gracias.
1:40:25Spoiler, la mayoría son
1:40:28no son resistentes a la
1:40:30desnaturalización, no recuperan su
1:40:33estructura nativa, la mayoría, pero eso
1:40:35lo vemos en un ratito. Bueno,
1:40:38sí.
1:40:40Eh, yo tengo una pregunta, ¿viste que a
1:40:43diferentes temperaturas dice que no pasa
1:40:45lo mismo a ambos lados del pico de
1:40:46máxima actividad? Claro,
1:40:48con el pH pasa lo mismo.
1:40:49Claro, con el pH lo que pasa pasa lo
1:40:51mismo para un lado y para el otro lo que
1:40:54está pasando es que está cambiando las
1:40:56cargas de lo, o sea, pasa lo mismo
1:40:57conceptualmente, ¿no?
1:41:01Pero en un caso se protonan y en el otro
1:41:02caso se desprotonan, pero lo que pasa es
1:41:04que cambian las cargas de las cadenas
1:41:06laterales de los aminoácidos y eso puede
1:41:08afectar directamente la estructura
1:41:10tridimensional o incluso más fino la
1:41:13carga de aminoácidos en el sitio activo
1:41:15y que pueda directamente afectar la
1:41:17interacción con el ligando, con que o
1:41:20con el sustrato o con otros ligandos que
1:41:22puedan tener que ahora en un ratito
1:41:23vemos. ¿Está bien?
1:41:25Perfecto. Gracias.
1:41:26Genial,
1:41:26profe.
1:41:27Sí.
1:41:29Eh, por ejemplo, si yo a una enzima la
1:41:31someto a un cambio de pH que no hace que
1:41:34cambie la estructura de la enzima, o
1:41:35sea, solamente le modifica el sitio
1:41:37activo, porque me acuerdo que, o sea,
1:41:40habíamos hablado un poco de los, o sea,
1:41:42muy por encima de los prones que era
1:41:44como que,
1:41:45o sea, que que era un leve cambio en la
1:41:47conformación de la proteína que la hacía
1:41:48como reasesina.
1:41:50Acá puede pasar que la enzima, o sea, se
1:41:52vuelva como, o sea, empiece como a
1:41:55degradar otro sustrato que no tiene que
1:41:57degradar y
1:41:58ah
1:41:59y no sé.
1:42:00Ah, bueno, como que cambie su función.
1:42:02Como que cambie su función
1:42:04cl que se vuelva malvada, algo así
1:42:06podría llegar a pasar. Sí, de hecho, yo
1:42:09creí que me ibas a preguntar por estas
1:42:11formas. Hay enzimas que tienen que que
1:42:14pueden resistir bastante y entonces te
1:42:16puedes encontrar con algunas que en vez
1:42:17de ser una punta así o sean una punta
1:42:20muy muy finita como esas que digo, capaz
1:42:22no resiste ni un poquitito cambio de pH
1:42:24y otras que sean bastante planas y
1:42:26toleren bastante, eh, que no cambien su
1:42:29estructura y puedan seguir reconociendo
1:42:30el pH. Por eso vos me preguntas que a lo
1:42:32mejor cambia y se transforma en otra
1:42:34cosa y pueda reconocer otro pH. No se me
1:42:37no conozco un caso en particular, pero
1:42:39no veo por qué no podría existir, podría
1:42:41ser. Pero lo de los prones es otra cosa
1:42:43bastante distinta que lo vamos a ver eh
1:42:45dentro de un rato. Sí,
1:42:48gracias, perfecto.
1:42:49Perfecto. No, de nada. Bueno, y si
1:42:51ponemos más encima, lo que pasa con
1:42:54todas estas curvas es que en realidad
1:42:56van a tener la misma forma, o sea, van a
1:42:58resistir a la mismos cambios de pH y van
1:43:00a se van a afectar igual con la
1:43:01temperatura, pero vamos a tener curvas
1:43:03más altas, ¿no? Como con igual forma,
1:43:06pero con mayor actividad porque vamos a
1:43:07tener mayor cantidad de enzimas. Siempre
1:43:10estamos a concentración saturante de
1:43:11sustrato,
1:43:12aunque tengamos más enzima, tendremos
1:43:14que a lo mejor poner más sustrato. ¿Está
1:43:17bien? Profe, acá preguntaron en el chat
1:43:19con qué estructura se queda entonces la
1:43:22proteína y si se queda solo con la
1:43:24primera si se desnaturaliza.
1:43:26Bueno, si se desnaturaliza, si la
1:43:28proteína se desnaturaliza,
1:43:31eh, ya sea por calor o por cambio de pH,
1:43:37si mientras yo no cambie esa condición,
1:43:40tipo, si la llevé a, no sé, 80º,
1:43:43mientras yo la deje a 80 gr va a seguir
1:43:45así desplegada. O si la llevé a tal pH y
1:43:48no le cambio el pH, va a seguir así
1:43:49desplegada. Si ahora yo trato de volver,
1:43:52por ejemplo, bajando la temperatura o
1:43:54cambiándole el pH,
1:43:58pensémoslo con la temperatura, que es
1:44:00más simple y después si quieren lo
1:44:01volvemos a pesar con el pH, pero voy
1:44:03bajando la temperatura primero. Cuando
1:44:04desarmé por la temperatura, todo, todo,
1:44:07todo se empieza a mover, se empieza a
1:44:08mover y dejan de interactuar las cadenas
1:44:10laterales y pierde la estructura. Cuando
1:44:12baja la temperatura,
1:44:14la se empiezan a empezar a se van
1:44:16formando otra vez uniones entre cadenas
1:44:18laterales de los aminoácidos. Pero
1:44:20probablemente no se forme las mismas
1:44:22interacciones que se habían formado
1:44:24originalmente cuando la proteína se
1:44:26sintetizó en la célula con un montón de
1:44:30ayuda y y que iba apareciendo primero
1:44:32una parte, después la otra. Es probable
1:44:34que ahora se una parte con otra que no
1:44:36tenían nada que ver y como ya bajé la
1:44:39temperatura, no voy a dejar posibilidad
1:44:42de que esto se salga y se vuelva con
1:44:44otra. Entonces, depende cómo haga yo ese
1:44:46proceso de tratar de que se
1:44:48renaturalice, va a ir adquiriendo otra
1:44:51conformación, pero la mayoría de las
1:44:53enzimas no logra volver a ponerse en su
1:44:56forma eh nativa, funcional, porque se
1:45:01terminan estabilizando. Si le terminé
1:45:03bajando la temperatura, después la dejo
1:45:04a una en una conformación que no tiene
1:45:07nada que ver y ni hablar si la tenía
1:45:10desnaturalizada y de golpe tuc la la
1:45:12enfrío rápidamente y queda congelada así
1:45:15en esa conformación toda de abierta.
1:45:18pasa lo mismo con el tema del pH, solo
1:45:20que al ir cambiando el pH, lo que voy
1:45:21haciendo es que gradualmente vayan
1:45:23cambiando las las cargas de los
1:45:24aminoácidos, pero no necesariamente va a
1:45:28volver a una conformación nativa, ya que
1:45:30esa conformación nativa se formó en la
1:45:32célula con un montón de otros elementos
1:45:34de la célula que iban permitiendo que se
1:45:37forme la conformación biológica, ya sea
1:45:39porque iban apareciendo primero unas
1:45:41partes y después otras o porque había
1:45:42otras proteínas que ayudaban que en el
1:45:44tubo de ensayo donde yo estoy trabajando
1:45:46no está.
1:45:47Está bien, contesté.
1:45:51Igual lo vamos a volver a ver dentro de
1:45:52un ratito porque es un tema que
1:45:54involucra chaperonas y eso que lo vemos
1:45:56en un ratito.
1:45:58Bueno,
1:46:00creo que ahora sí podemos hacer, siendo
1:46:0211:23, hacemos un intervalito
1:46:06e
1:46:0811:2 es como hagamos de cuenta que son
1:46:1225, volvemos y 35, ¿sí? Y nos queda una
1:46:16horita. ¿Les parece bien?
1:46:19Dale, profe.
1:46:20Buenísimo. Nos vemos en en un segundito,
1:46:24¿no? En 10 minutos.
1:46:35Ahí está. Volvimos al intervalo.
1:46:39Vamos con Sí, continuamos. Bueno,
1:46:43entonces
1:46:44las enzimas tienen además habíamos
1:46:46habíamos visto que había otras cosas
1:46:48también que podían afectar la actividad
1:46:50enzimática
1:46:53y son estos inhibidores y activadores y
1:46:55hay diferentes mecanismos, vamos a ver
1:46:57algunos,
1:47:00pero ya tenemos este dibujito acá
1:47:02simpático.
1:47:05¿Que
1:47:06qué tenemos? ¿Qué qué tipo de inhibidor
1:47:09tenemos acá?
1:47:16activo.
1:47:17Claro, un inhibidor que es como una
1:47:19molécula que está interactuando
1:47:21directamente con el sitio activo. Y acá
1:47:23el sustrato se está enojando y es, ¿qué
1:47:25haces ahí? Y el inhibidor comp inhibidor
1:47:29competitivo porque está ocupando
1:47:32parte del sitio activo y y de esta
1:47:35manera interfiere con la unión del
1:47:37sustrato con el sitio activo. Este es un
1:47:40tipo de mecanismo. Entonces,
1:47:44eh
1:47:46en este en este dibujito podemos ver una
1:47:49reacción normal, tendríamos la enzima,
1:47:52este subsio activo, el sustrato y da dos
1:47:54productos, por ejemplo, este, en este
1:47:55caso, ¿no? Un inhibidor competitivo
1:47:58podría funcionar directamente uniéndose
1:48:00acá y
1:48:04interfiriendo y va evitando que entre el
1:48:07sustrato. Sea justamente competitivo
1:48:09porque compiten por el sitio activo.
1:48:12Ambos se unen al sitio activo
1:48:15y cuando se une este de alguna manera si
1:48:18hay un montón o está o es mucho más
1:48:20afino algo gana y no deja que el
1:48:23sustrato se se una. Un inhibidor no
1:48:27competitivo sería un inhibidor que
1:48:31eh no se une al sitio activo y por otra
1:48:34por otro motivo, por otro mecanismo eh
1:48:39interfiere con la reacción, por ejemplo,
1:48:41uniéndose en otro sitio, ¿no? Y entonces
1:48:44ahora vamos a una definición porque hay
1:48:47hay unos términos, espero que no se
1:48:49confundan mucho, lo vamos a tratar de
1:48:50decir como bastante simple para que se
1:48:53queden con con los conceptos y no se
1:48:55hagan lío, pero
1:48:58eh justamente las moléculas que se unen
1:49:01otro sitio,
1:49:04sí se llaman, ahí tengo como
1:49:08no me acuerdo, no no veo bien acá si qué
1:49:10es lo que tengo escrito.
1:49:12Ahí está. Y no me acuerdo o en otra,
1:49:16pero las moléculas
1:49:21eh que se unen en otro lugar, ese a ese
1:49:23otro lugar se lo llama sitio alostérico.
1:49:27Entonces las moléculas que se unen en
1:49:29otro lugar son moduladores alustéricos
1:49:32porque se están uniendo en otro sitio
1:49:33que no es el sitio activo. Y tenemos
1:49:35tanto inhibidores como activadores. Sí,
1:49:38podemos encontrar diferentes cosas y
1:49:40diferentes mecanismos, pero miren cómo
1:49:42es el dibujito. Muestra como que se une
1:49:45a un lugar y cuando se une hace algún
1:49:48cambiocional tal que impacta en
1:49:53profe, están pidiendo por el chat que
1:49:54repita lo de eh los inhibidores
1:49:58competitivos.
1:50:00Ah, bueno, ahí voy. Termino con este
1:50:02concepto y vuelvo a los inhibidores
1:50:04competitivos.
1:50:06Eh, pero e este esta idea de los
1:50:09inhibidores o activadores que se unen en
1:50:13otro lugar lo que hacen es producir
1:50:15algún tipo de cambio conformacional que
1:50:17termine impactando en el sitio activo y
1:50:19ya sea que lo hace
1:50:22eh menos a fin por el sustrato o a lo
1:50:25mejor lo convierte en a fin por el
1:50:27sustrato y antes no era. Sií, depende de
1:50:29los mecanismos, pero el concepto general
1:50:31de un modulador alostérico es al es una
1:50:34molécula que se une a otro lugar que no
1:50:36es el sitio activo, que se llama sitio
1:50:38alostérico porque de ahí viene el nombre
1:50:41de otros de otro sitio, le cambia la
1:50:44conformación y afecta positivo o
1:50:45negativamente el sitio activo. ¿Esto lo
1:50:48entendieron? Ahí vuelvo a los
1:50:49competitivos.
1:50:52Sí,
1:50:53perfecto. A ver.
1:50:59Un inhibidor competitivo es simplemente
1:51:01una molécula que compite con el sustrato
1:51:04por el sitio activo, por eso llama
1:51:05competitivo. Su mecanismo de acción no
1:51:08es cambiarle la conformación ni nada,
1:51:10sino simplemente bloquear el sitio
1:51:12activo y no dejar que se una el
1:51:13sustrato.
1:51:15¿Está bien?
1:51:20Bueno, y entonces
1:51:23eh quedó claro que un inhibidor
1:51:24competitivo se une al sitio activo y en
1:51:27cambio
1:51:30un inhibidor no competitivo se une a
1:51:33otro lugar y ese otro lugar se llama
1:51:35sitio alérico porque es un lugar
1:51:38distinto al al sitio activo. Pero lo que
1:51:40se puede unir a otro lugar, también
1:51:43puede ser un activador, puede ser un
1:51:45inhibidor, un activador. Sí.
1:51:48Y entonces el modulador alérico, dicho
1:51:50así genérico para no decir inhibidor y
1:51:52activador, digamos modulador que
1:51:54podríamos estar refiriéndonos a los que
1:51:56hacen una cosa y los que hacen otra
1:51:58según el estérico y puede actuar por
1:52:00diferentes mecanismos. En general, lo
1:52:02que hace habitualmente es esto que les
1:52:04decía recién de inducir un cambio
1:52:07conformacional que de alguna manera
1:52:08termina afectando al sitio activo y lo
1:52:11hace o más afín o menos afin al sustrato
1:52:13o lo bloquea o o
1:52:17lo activa y estaba inactivo. O sea,
1:52:18pueden pasar diferentes cosas, pero todo
1:52:20a través de un cambio conformacional
1:52:22inducido por la unión en el otro lugar.
1:52:24Sí, todos estos dibujitos están
1:52:26justamente para mostrar a dónde se une
1:52:28uno y a dónde se une el otro. Acá está
1:52:30el sitio activo y el sitio el este
1:52:33inhibidor el hisérico se une al sitio
1:52:35del estérico. Está
1:52:37también podría ser que se una a otro
1:52:39lugar y aún así unido a otro lugar tiene
1:52:42una forma tal que termina bloqueando al
1:52:44sitio activo y entonces decí mm y
1:52:46entonces no será competitivo. No, no es
1:52:48competitivo porque no está compitiendo
1:52:50por el sitio activo, porque no se une el
1:52:52sitio activo. Sin embargo, lo termina
1:52:55bloqueando por un mecanismo que es en
1:52:57vez de de inducir un cambio
1:53:00conformacional es bloquearlo. Si, pero
1:53:03bueno, es más que nada para que vayan
1:53:06empezando a entender estos estos
1:53:09conceptos.
1:53:12Está bien, vamos bien hasta ahí.
1:53:15Sí, prof.
1:53:17Entonces,
1:53:19entonces cuando bloquean el sitio
1:53:21activo, no son competitivos.
1:53:24O sea,
1:53:24los competitivos son los que ocupan el
1:53:26sitio activo. Yo yo no lo diría cuando
1:53:29bloquean el sitio activo no son
1:53:30competitivos porque puede quedar medio
1:53:32confuso eso. El el competitivo se lo
1:53:35llama al que se une al sitio activo. En
1:53:37realidad lo está bloqueando, al unirse
1:53:39lo bloquea también, pero
1:53:41la definición de competitivo es que se
1:53:44une al sitio activo porque justamente
1:53:45compite con el sustrato por el sitio
1:53:47activo. Entonces ahí como todo un tema
1:53:49de cuánto hay, cuán afin es cada uno,
1:53:52porque a lo mejor de este hay 1 kg y
1:53:55entonces es muy probable que venga y te
1:53:56bloquee o de este sí hay poquito, pero
1:53:58es recontra más afín también bloquea.
1:54:01Pero entonces el inhibidor competitivo
1:54:03es el el que compite por el sustrato con
1:54:05el sitio activo. En cambio, el inhibidor
1:54:08al estérico puede producir por distintos
1:54:10mecanismos, pero lo importante es que no
1:54:12se une el sitio activo, sino el sitio
1:54:14del estérico y la mayoría de las veces
1:54:17lo que el mecanismo involucra un cambio
1:54:19conformacional que afecta el el sitio
1:54:21activo, pero indirectamente pues está
1:54:23unido en otro lado, pero puede haber un
1:54:26caso en que bloquee, pero igual no lo
1:54:28llamo inhibidor competitivo porque no
1:54:29está uniéndose al sitio activo, entonces
1:54:32nunca compite por el sitio activo con el
1:54:34otro, se une acá. Okay,
1:54:36está bien.
1:54:36Genial. Gracias.
1:54:37Está bien la diferencia. Genial.
1:54:39Sí, sí.
1:54:40Perfecto. Bueno,
1:54:41profe, tengo una duda.
1:54:43Sí.
1:54:45¿Querías saber cuál es la diferencia
1:54:48entre los moduladores alostéricos y las
1:54:50coenzimas o los cofactores? Ah, bueno,
1:54:54el pensando en el modulador alérico, vos
1:54:56decís que sea un activador,
1:55:00que está muy bien.
1:55:01Sí, sí,
1:55:02el modul en realidad la coenzima y el
1:55:05cofactor son esenciales para la
1:55:07actividad. O sea, sin sin ella sin sin
1:55:12la coenzima o el cofactor, una enzima
1:55:15que los necesita, no anda directamente,
1:55:17por ejemplo, porque te provee
1:55:18directamente uno de los eh aminoácidos o
1:55:23uno de los eh átomos con los que se va a
1:55:24unir, a los que se va a unir ese
1:55:26sustrato podría llegar a ser.
1:55:30Eh, lo que pasa es que en este en este
1:55:31dibujo parece que el sustrato no puede
1:55:35entrar para nada hasta que viene este
1:55:36activador y como que fuese
1:55:37indispensable. Entonces ahí te agarra la
1:55:39duda y decís, "Entonces no será." No.
1:55:42Los inhibidores o activadores
1:55:43alostéricos en realidad modulan. Esto es
1:55:46como una cosa muy exagerada, pero puede
1:55:48ser como que el sustrato pueda entrar
1:55:50acá, pero con menos afinidad y cuando
1:55:52viene el activador le aumenta un montón
1:55:54la afinidad, por ejemplo. Pero no le
1:55:57podemos decir modulador al estérico a un
1:56:01coactor o eh perdón, a un cofactor o
1:56:03coenzima, porque no es modulador, es
1:56:05esencial. En cambio, estos son
1:56:06moduladores, quiere decir que si no
1:56:08están igual puede funcionar, solo que a
1:56:10lo mejor lo ponés y se dispara un montón
1:56:11la actividad. ¿Está bien?
1:56:17Sí, está bien, gracias.
1:56:18Perfecto.
1:56:20Bueno, y ahora vamos con otro concepto,
1:56:22pero porque también viene justamente
1:56:24este concepto de el alosterismo y puede
1:56:27ser un poco confuso, entonces es el
1:56:29momento de contárselos.
1:56:32Eh, ¿qué hay?
1:56:35¿Vieron que yo ya les había adelantado
1:56:37cuando hablamos de la hemoglobina, que
1:56:38no es una enzima, pero tiene este efecto
1:56:40cooperativo que les voy a contar ahora.
1:56:42Pero hay enzimas en las que
1:56:46existe este efecto que se llama
1:56:47cooperativo, que son enzimas que tienen
1:56:50más de una subunidad
1:56:53y cuando se une el sustrato a una de
1:56:55ellas produce un cambio conformacional
1:56:58que hace que después el otro sustrato se
1:57:01pueda unir mejor en la otra subunidad.
1:57:04Entonces son estas enzimas que tienen
1:57:06esta otra curva. Si uno grafica
1:57:07velocidad en función de concentración
1:57:09del sustrato, ¿se acuerdan que les dije
1:57:12esta curva la vimos antes y les dije ojo
1:57:13que hay en que tienen otra pinta la
1:57:16curva que si uno grafica velocidad en
1:57:18función de concentración del sustrato,
1:57:20esta es una curva que se llama
1:57:22sigmoidea, ya después en Qé van a ver un
1:57:24montón como son las ecuaciones y
1:57:26Micaelis Mente y la sigmoidea. Nosotros
1:57:28no vamos a entrar en ese detalle, pero
1:57:30sí podemos entender un poquito cuál es
1:57:33esta diferencia, qué quiere decir que
1:57:35tengan esta pinta distinta. Y esta es
1:57:38como bueno, viene muy tranqui, voy
1:57:40aumentando la concentración de sustrato
1:57:41y no aumenta tanto
1:57:43y de golpe tuc se dispara. ¿Qué es lo
1:57:46que está pasando acá? Puede ser que cada
1:57:48sustrato se vaya metiendo en una de las
1:57:50unidades de una encima, de la otra, de
1:57:52la otra y no hay mucha actividad. Pero
1:57:55cuando de golpe muchas enzimas ya tienen
1:57:58un sustrato en una, ese cambio
1:58:01conformacional que se induce le aumenta
1:58:03un montón la afinidad al otro y entonces
1:58:05se dispara esa velocidad. ¿Sí? Entonces,
1:58:08esto es lo que se llama homoalosterismo
1:58:11y es que la unión del sustrato al sitio
1:58:14activo, pero de una subunidad
1:58:18cambia, aumenta la afinidad en el otro.
1:58:21Acá es como, "Uy, pero ¿y por qué se
1:58:22llama si en realidad se está uniendo al
1:58:25sitio activo?" Porque eso es lo que
1:58:26podría llegar a confundirlos, pero es
1:58:28que se está uniendo al sitio activo,
1:58:29pero de otro de otra encima de otra
1:58:32subidad. ¿Me siguen? Entonces, otro
1:58:36lugar.
1:58:37Eso es lo que puede llegar a
1:58:38confundirlos. Yo ahora tengo una diapo
1:58:40donde están bien todas las definiciones
1:58:42que se las dejo para que las miren
1:58:44tranquilos. Esta
1:58:47no vamos a leerlas ahora porque es un
1:58:48plomo, pero les queda acá, pero es todo
1:58:51lo que hablamos. Se los resumo.
1:58:54Simplemente tenemos el efecto alostérico
1:58:57este del que les hablaba recién, que
1:58:59podemos tener como para, vale, para
1:59:02enzimas o proteínas que tienen como dos
1:59:05conformaciones y que justamente este
1:59:07cambio de conformación se da por la
1:59:09unión de el sustrato o de de un ligando.
1:59:13En el caso de la hemoglobina es un
1:59:15ligando que no es un sustrato porque no
1:59:16es una enzima. Pero en este caso de las
1:59:17enzimas alostéricas, el lo que se une es
1:59:20el sustrato en una y eso induce un
1:59:23cambio conformacional, ¿sí? Que afecta a
1:59:26las otras y las da como mayor afinidad.
1:59:29Entonces,
1:59:32eh puede ser confuso que se llame
1:59:34alosterismo también porque es como que
1:59:36se está uniendo al sitio activo, pero
1:59:37está teniendo el efecto sobre otros
1:59:39sitios activos. Y después tenemos aparte
1:59:42los reguladores alostéricos, que son los
1:59:45que se unen a otro lugar que no es el
1:59:48sitio activo. que está representado acá
1:59:50como puesto en otro en otro lugar
1:59:53diferente el sitio activo, pero no
1:59:55necesariamente tiene que ser una una
1:59:58encima de muchas subunidades, solo que
2:00:00están aprovechando para mostrar todo
2:00:02junto
2:00:04y cuando se une hace un cambio
2:00:06conformacional a lo mejor que modifica
2:00:08el sitio activo y entonces puede ser un
2:00:10activador o un inhibidor al estérico que
2:00:12termina modificando la actividad
2:00:14enimática, pero por unirse a otro lugar
2:00:16que se llama sitio al estérico. Está
2:00:18bien, se los dejo acá como todas
2:00:21definiciones así medio aburridas, pero
2:00:23por si se hacen un poco de lío con cada
2:00:26una, pero no nos vamos a detener más
2:00:28tiempo ahora porque tenemos cosas muy
2:00:30copadas para ver y nos queda poco
2:00:32tiempo.
2:00:35Bueno, ¿se acuerdan? ¿Se acuerdan?
2:00:38Seguro que se acuerdan de las
2:00:39modificaciones posttraduccionales de las
2:00:40que hablamos un montón.
2:00:43Ahora solo las traigo acá para decir,
2:00:44"Ah, ¿quiénes hacen esas modificaciones
2:00:46posttraduccionales?" Por ejemplo, la
2:00:48fosforilación que habíamos dicho, los
2:00:50hacen las enzimas. Justamente
2:00:53todas las modificaciones postraccionales
2:00:54son efectuadas por enzimas que de en
2:00:58alguna manera, por ejemplo,
2:01:01esta enzima que pone el fosfato, ¿qué
2:01:04sustratos tiene? tiene a la uno de sus
2:01:07sustratos es la proteína a la que le va
2:01:09a poner el fosfato y el otro sustrato es
2:01:13la molécula de la que va a sacar el
2:01:15grupo ffato y lo va a poner, lo va a
2:01:17unir a la a tal aminoácido de la
2:01:20proteína. Entonces tiene dos sustratos y
2:01:22hace una reacción que es justamente uno
2:01:26de los sustratos es el ATP y o ATP y de
2:01:29ahí va a sacar un grupo fosfato y va a
2:01:32unirlo covalentemente a una cadena
2:01:34lateral de uno de un aminoácido, en este
2:01:36caso una cerina. Esta proteín quinasa
2:01:39fosforila a lacerina usando a la ATPE
2:01:43como dador de grupo fosfato. Sí. Y forma
2:01:46esta unión. Y así como la quinasa hizo
2:01:49esta unión,
2:01:51hay una fosfatasa que puede sacar esa
2:01:55modificación. Entonces, el ¿Quién es el
2:01:57sustrato de la fosfatasa? La enzima
2:02:00perdón, la proteína fosforilada. Ella,
2:02:03la fosfataza, es la enzima la proteína
2:02:05fosforilada y cuando le saca se libera
2:02:08este eh el grupo fosfato y queda la
2:02:12proteína sin fosforilar. Entonces, el
2:02:13sustrato sería el sustrato de la
2:02:15fosfatasa es la proteína fosforilada y
2:02:19los productos son la proteína sin
2:02:21fosforilar y el grupo fosfato que se
2:02:24libera. ¿Lo entienden? Y entonces acá
2:02:26tenemos quién hace y quién deshace esa
2:02:31modificación postrauccional. Y eso que
2:02:33está pasando, por ejemplo, en algunos
2:02:35casos puede hacer que una enzima se
2:02:38prenda o perdón, esta proteína, no sé,
2:02:41quien sea que sea, se active o se
2:02:43inactive. Sí, porque alguien le puso o
2:02:46le sacó la modificación postrauccional,
2:02:48¿está bien? Y no hay una regla general,
2:02:51no es que siempre está fosforilada, está
2:02:53prendida y y de fosforilada apagada. Acá
2:02:56ponen un ejemplo que va para el otro
2:02:57lado. Sí. Bueno, y eso todo esto es un
2:03:02tema central que van a ver con Omar en
2:03:04las clases de traducción de señales,
2:03:05como quiénes son estas proteínas y que
2:03:07se van foforilando y se van prendiendo
2:03:09como en cascada.
2:03:12Bueno,
2:03:13entendí.
2:03:14Eh, las modificaciones las realizan las
2:03:17estimas, dijiste. Nada que
2:03:18Claro, exactamente. Estas modificaciones
2:03:21postrauccionales de las que habíamos
2:03:22hablado la otra vez, que dijimos se
2:03:24puede fosforilar, se puede clivar, se le
2:03:27puede agregar todo un ramillete de
2:03:28azúcar, se le puede agregar
2:03:30ubiicuitinas, son todas reacciones
2:03:32catalizadas por enzimas, tanto el
2:03:35agregado de esas modificaciones como si
2:03:37alguien si la sacan. Hay enzimas que
2:03:39hacen esas modificaciones y enzimas que
2:03:41las sacan. Vieron que les que habíamos
2:03:43hablado que son reversibles, no es que
2:03:45si una proteína se fosforiló, queeda
2:03:47fosforilada para siempre. La mayoría
2:03:49cosa que me confunde que dice tipo que
2:03:52regulan la función de muchas enzimas, o
2:03:54sea, de muchas proteínas y entre ellas
2:03:55las enzimas, pero a su vez las enzimas
2:03:57también
2:03:58hacen la
2:04:00la hacen la modificación es otra enzima.
2:04:03Por ejemplo, esta enzima, esta quinasa
2:04:06que está haciendo esa modificación,
2:04:08fosforiló esta proteína y esta proteína
2:04:10puede ser una enzima que ahora al estar
2:04:12fosforilada a lo mejor no funciona más o
2:04:15al revés o funciona y hace lo que tenga
2:04:17que hacer.
2:04:18Ah, genial, ya entendí.
2:04:21Sí,
2:04:22sin mencionar que mucho encima de esta
2:04:24puede llegar a ser otra quinasa distinta
2:04:27que vaya y le ponga otro fosfato a otra
2:04:28proteína. Como van a ver en traducción
2:04:31de señales que tenemos muchas son así
2:04:33como cadenas de proteínas que una
2:04:35fosforila la otra y otra foforila la
2:04:37otra, otra fofforila otra y la otra
2:04:38cuando se fosforiló, no sé, se va al
2:04:40núcleo o sale del núcleo o hace otra
2:04:43cosa. Pasan distintas. Gracias.
2:04:46No, de nada.
2:04:48Bueno, entonces volvemos a pensar,
2:04:50salimos de las enzimas, volvemos a
2:04:52pensar en las proteínas en general y a
2:04:54esto que un poco fui y vine y esto de de
2:04:59desarmar las proteínas. Podemos planchar
2:05:01las proteínas en el laboratorio. ¿Se
2:05:03acuerdan que habíamos dicho que incluso
2:05:04para el gel con SDS podíamos calentarlas
2:05:07y si le agregábamos SDS quedaba todo
2:05:09planchado, pero yo les había hablado de
2:05:11la aurea, o sea, esto de desarmar la
2:05:13proteína es algo que podemos hacer en el
2:05:14laboratorio,
2:05:16pero imagínense que pase esto mismo de
2:05:20desarmarle la estructura tridimensional
2:05:22a la proteína ante alguna condición de
2:05:23estrés, por ejemplo, calor. Las células
2:05:27pueden llegar a estar sometidas a
2:05:28condiciones que de golpe les pase algo
2:05:31así o les cambie un poco el pH o
2:05:33aparezca una molécula que las planche o
2:05:35se levante la temperatura y algunas sean
2:05:37muy sensibles. ¿No se imaginan que eso
2:05:40pasa?
2:05:43¿Habrá algún mecanismo que evite que
2:05:45cuando pas que cuando pasa eso se pierde
2:05:47completamente la función de las
2:05:49proteínas porque pierden su estructura?
2:05:51Bueno, es reversible, que era una de las
2:05:54cosas que íbamos charlando. Le dije, lo
2:05:56vamos a ver dentro un ratito. Bueno,
2:05:58efectivamente vamos de a poco, hay un
2:06:00poco de todo.
2:06:02¿Qué le pasa a una proteína frente a
2:06:05estas condiciones extremas que le puedan
2:06:07hacer
2:06:09mal? Alto pH, alta temperatura. Bueno,
2:06:14esto se puede medir, se va desplegando
2:06:16la proteína. Uno puede medir proteína
2:06:18desplegada. Hay diferentes técnicas. No
2:06:21vamos a entrar en detalle, las van a ver
2:06:22super en detalle en QB, pero hay forma
2:06:25de uno, hay formas que tenemos en el
2:06:27laboratorio de medir cómo se despliega
2:06:28una proteína y entonces si ponemos
2:06:32distintas cantidades de alguna gente que
2:06:34haga eso, que desnaturalice, por
2:06:35ejemplo, calor, voy poniendo de a
2:06:37poquito más calor, más calor, más calor
2:06:39o urea, pongo una concentración bajita y
2:06:41después la subo, la subo, la subo. Y hay
2:06:43otros empieza a pasar esto, shuk, tiene
2:06:46esta forma como que al principio no se
2:06:49desarman mucho las proteínas y de
2:06:51repente llego a alguna condición donde
2:06:53se me desarman un montón y después tengo
2:06:55todo desarmado. Desarmado, no digamos
2:06:57desarmado, me corrijo, desplegado o
2:07:01desnaturalizado.
2:07:02Desarmado puede llegar a pensar que se
2:07:06se cortan eh
2:07:09los polipéptidos en aminoácidos
2:07:10separados y no no es eso lo que pasa.
2:07:12solo se desnaturaliza.
2:07:15Bueno, y entonces volvamos a los
2:07:17mecanismos que pueden existir en la
2:07:18célula y la realidad es que hay, y yo
2:07:22les voy a contar qué cosas graves pueden
2:07:24pasar si no hubiese
2:07:27si las proteínas se desnaturalizan
2:07:29adentro de la célula, les empieza a
2:07:31pasar esto. Acá tenemos como una
2:07:33esquemita de una proteína plegada.
2:07:37Si la proteína se despliega, se pueden
2:07:39empezar a formar agregados. agregados es
2:07:42que una proteína se empiece a pegotear
2:07:44con la otra. Sí, como ya habíamos
2:07:46hablado ya un poquito, les mencionamos,
2:07:47ahora en un ratito vamos a volver a lo
2:07:49de los prones, pero esto les puede pasar
2:07:50a proteínas eh en la célula
2:07:55si hay alguna condición de estrés. ¿Por
2:07:57qué se agregan? ¿Qué es lo que pasa? En
2:08:00realidad, cuando se despliegan, empiezan
2:08:02a exponer regiones hidrofóbicas que
2:08:05normalmente estaban escondidas y se
2:08:07empiezan entonces todas las proteínas
2:08:10empiezan a a exponer regiones
2:08:11hidrofóbicas y y todas esas regiones
2:08:13hidrofóbicas se empiezan a asociar entre
2:08:14sí y forman eh eh
2:08:18como pegotes, como agregados que
2:08:20claramente no son funcionales y pueden
2:08:22llegar a ser tóxicos en la célula. Y acá
2:08:24está el ejemplo. Cuando ustedes cocinan
2:08:27o o se calienta eh un huevo, la clara de
2:08:30huevo que tiene o albúmina, se despliega
2:08:32la o albúmina y se forman agregados. Y
2:08:35eso es lo que vemos como eh la clara
2:08:37cuando se pone blanca y deja estar
2:08:38transparente. Transparente. La
2:08:40ovalbúmina está con su conformación
2:08:41nativa
2:08:43interactuando bien con todo el ambiente
2:08:45acuoso y cuando se pliega forma estos
2:08:47agregados y que le dan este aspecto
2:08:49blanco al huevo. Imagínense acá. Me
2:08:51gustó mucho esta analogía. Si tenemos
2:08:53todos clips, podemos tener un vaso de
2:08:55agua lleno de clips, pero si los
2:08:57desplegamos y lo movemos un poco, así se
2:09:01pueden empezar a enganchar todos entre
2:09:02sí. Es como una metáfora que está
2:09:04bastante linda, una analogía linda.
2:09:08Y también habíamos dicho que las
2:09:11proteínas, si son muy enormes a veces no
2:09:14siempre pueden plegarse solas. Cuando
2:09:15les conté en la primer clase que les
2:09:17adelanté que si hay una proteína muy
2:09:20gigante y en realidad para que tenga su
2:09:21estructura tridimensional bien, va a
2:09:24tener que unirse con una parte que
2:09:25todavía no se sintetizó, a veces tenemos
2:09:28proteínas que las van ayudando a
2:09:31plegarse o a esperar a que termine de
2:09:33sintetizarse la otra, ¿sí? O que en
2:09:35ciertas condiciones ayudan y esas son
2:09:38las chaperonas y ahí las presento.
2:09:40Entonces, las chaperonas pueden hacer
2:09:42diferentes cosas, hay distintos tipos de
2:09:44chaperonas.
2:09:46Pero, por ejemplo, en algunos casos
2:09:48pueden colaborar con desarmar estos
2:09:51agregados, pero no siempre funcionan,
2:09:54depende cuán grave es este agregado,
2:09:56pero sí podrían llegar a funcionar acá.
2:09:59O también pueden llegar a ayudar a
2:10:02plegar una proteína
2:10:05eh que tenemos desplegada,
2:10:07pasa por una chaperona y la chaperona le
2:10:09permite le da como un ambiente apropiado
2:10:11y le permite dar volver a estar plegada.
2:10:14Sí. O sea, estoy hablando de dos
2:10:15mecanismos diferentes. Arreglar un
2:10:17agregado o permitir que se pliegue bien
2:10:21una proteína que nunca estaba agregada,
2:10:22sino que estaba simplemente desplegada.
2:10:25Entonces, hay un grupo de chaperonas que
2:10:28se un grupo muy enorme de chaperonas que
2:10:30se llama Heat Shock Proteins,
2:10:33justamente porque son proteínas que se
2:10:35descubrieron porque se empiezan a
2:10:37sintetizar. A lo mejor no hay mucha
2:10:38cantidad de estas proteínas, pero se se
2:10:41hay mecanismos de regulación de la
2:10:42expresión génica que hacen que se
2:10:44empiecen a a sintetizar en condiciones
2:10:47de estrés térmico donde empiezan a
2:10:49aparecer proteínas desplegadas.
2:10:53Y entonces tenemos diferentes mecanismos
2:10:57donde algunas se unen a regiones
2:10:59hidrofóbicas que se empiezan a exponer,
2:11:02por ejemplo,
2:11:04eh porque se desplegaron o a medida que
2:11:07se sintetizan. ¿Se acuerdan que les dije
2:11:09los dos casos? Entonces tenemos esos dos
2:11:11mecanismos y dos grupos de de
2:11:15proteínas al menos que funcionan
2:11:17diferente. Entonces las que las que
2:11:21funcionan a medida que se sintetizan
2:11:23eh las vamos a a ver ahora, las vamos a
2:11:25explicar en este gráfico. Y las que
2:11:28funcionan después cuando se encuentran
2:11:29con una proteína que ya estaba mal
2:11:30plegada, las vamos a mirar con este de
2:11:32acá abajo. Pero ambas, ambos tipos de
2:11:36chaperonas siempre tienen necesitan
2:11:40hacer esta este proceso que hacen de
2:11:42ayudar a plegar bien a la proteína con
2:11:44gasto de energía. Siempre necesitan que
2:11:46haya atepe en la célula y con gasto de
2:11:48atepe le van a ir dando posibilidades de
2:11:51volver a plegarse. Entonces, por
2:11:53ejemplo, vamos primero con esta de acá
2:11:55arriba, las que funcionan a medida que
2:11:57se va sintetizando la proteína. Esto es
2:11:59el ribosoma. se va sintetizando la
2:12:01proteína acá y justo aparece, por
2:12:03ejemplo, una parte hidrofóbica que se va
2:12:06a unir en su estructura tridimensional
2:12:08final con algo que todavía no se
2:12:10sintetizó. Entonces, acá es cuando
2:12:12vienen las chaperonas, se asocian, se
2:12:15mantienen acá asociadas y cuando termina
2:12:18de aparecer la otra parte permiten que
2:12:20se pliegue bien y nos da el plegado,
2:12:23pero no siempre funciona, a veces
2:12:27está mal plegada y entonces puede ser,
2:12:29si está mal plegada es probable que le
2:12:31hayan quedado otra vez regiones
2:12:33hidrofóbicas expuestas y entonces puede
2:12:35volver a ser eh a interactuar con las
2:12:38chaperonas y otra vez le da la
2:12:40posibilidad Y así pueden hacer varios
2:12:41ciclos hasta que quede bien plegada.
2:12:44Ahora vamos a ver que también puede
2:12:45pasar que nunca que debía plegada y
2:12:46ahora en la próxima día pues les cuento
2:12:48qué pasa.
2:12:50Esta otra es una que se encuentra con
2:12:52una proteína mal plegada, que por algún
2:12:53motivo, por ejemplo, porque aumentó la
2:12:57temperatura en la célula y se empiezan a
2:12:58desplegar todas las proteínas y se
2:13:00empiezan a a sintetizar estas HCP, heat
2:13:04Shock Proteins y tiene como una especie
2:13:07de forma de barrilito que interactúa con
2:13:09la proteína y le da como un ambiente
2:13:11protegido que permite que la proteína, o
2:13:14sea, ¿cómo hace que se pliegue bien?
2:13:15Simplemente le da un ambiente donde la
2:13:17proteína puede ir desplegándose y
2:13:20desplegándose y plegándose.
2:13:21Desplegándose y plegándose hasta que
2:13:25encuentra su forma bien, no porque lo
2:13:27sepa, sino porque por distintos pruebas
2:13:29y error va en algún momento puede llegar
2:13:32a a encontrar la que termodinámicamente
2:13:36es favorable y es su forma correcta y se
2:13:38libera también. Puede ser que nunca
2:13:40llegue. Sí,
2:13:41profe.
2:13:42Sí. Vuelvo al anterior.
2:13:44¿Y cómo se cuenta la proteína que está
2:13:46en la conformación correcta? ¿Qué le da
2:13:48la señal?
2:13:50Bueno, está muy buena esa pregunta. En
2:13:51realidad,
2:13:53la chaperona puede detectar que la
2:13:55conformación está incorrecta si quedaron
2:13:58expuestas regiones hidrofóbicas, por
2:14:01ejemplo, en un ambiente soluble. Y esas
2:14:03las reconoce. Pero además hay otros
2:14:05mecanismos que esto lo van a ver mucho
2:14:08más en detalle con Ale Colman Learner
2:14:10cuando veamos cómo una proteína puede
2:14:13llegar a distintos lugares de la célula,
2:14:15que lo vemos todo en la segunda parte de
2:14:16la materia y ahí hay un montón de
2:14:18momentos y lugares y organelas de la
2:14:20célula donde se van detectando las
2:14:23proteínas mal plegadas y si se detectan
2:14:25que están mal plegadas se le van
2:14:27agregando modificaciones
2:14:28postraduccionales que ellas son
2:14:29interpretadas también por chaperonas que
2:14:32van ayudando a a volver a plegarlas. Hay
2:14:35un montón de modificaciones
2:14:36postraccionales, muchas son
2:14:38glicosilaciones en distintos lugares y
2:14:40eso y son señales para ser detectadas
2:14:42que esto no está bien y está buenísimo
2:14:45porque entonces esa proteína, si por
2:14:46ejemplo una proteína que se tenía que
2:14:47secretar,
2:14:49mientras siga mal plegada no se va a
2:14:51secretar y está buenísimo porque no
2:14:52tenemos dando vueltas una proteína que
2:14:54anda mal, pero bueno, siempre puede
2:14:55fallar los sistemas, pero hay señales
2:14:58para ser detectada.
2:15:01¿Está bien?
2:15:04Bueno, entonces, perfecto. Entonces,
2:15:07justamente si la proteína queda
2:15:09desplegada se marca. Estas marcas son
2:15:12esas señales que les contaba que después
2:15:14van a ver recontra en detalle y si se
2:15:16marca eso termina yendo al proteasoma.
2:15:19Pero entonces, ¿qué le puede pasar? La
2:15:21proteína se sintetiza y a lo mejor se se
2:15:24plegó bien de entrada, correctamente
2:15:26plegada sin ayuda. Listo, todo joya.
2:15:28Ahora, si la proteína se sintetizó
2:15:32eh y era una de esas que necesitaba
2:15:34ayuda mientras se sintetizaba y quedó
2:15:36bien, listo. Ahora puede haber pasado
2:15:40que la proteína quede incompletamente
2:15:42plegada y la dijera un proteasoma o si
2:15:46no la digiera el protea, que está
2:15:48buenísimo que la digiera el proteasoma.
2:15:50Ahora vamos a ver cómo es.
2:15:53Eh, si no la digier el proteasoma es una
2:15:55proteína mal plegada que es un peligro
2:15:57para la célula y puede llegar a formar
2:15:59un agregado. Y ahora les cuento que en
2:16:01general no está bueno que pase eso.
2:16:04¿Cómo la reconoce el proteasoma si quedó
2:16:06mal plegada? O sea, tenemos dos cosas.
2:16:09¿Cómo la reconocen las chaperonas para
2:16:11tratar de seguir plegándola? ¿Y cómo la
2:16:13reconoce el proteasoma? Si después de
2:16:15muchas vueltas, muchas vueltas, muchas
2:16:16vueltas, igual no se plegó bien. Ahí se
2:16:19marca. ¿Y cómo se marca? ¿Se acuerdan
2:16:22que les dije la poliubicuitinación?
2:16:25era una de las modificaciones
2:16:26postraduccionales que terminaba mandando
2:16:28a la proteína a degradar y es una de las
2:16:30cosas que pasa cuando se detecta una
2:16:32proteína que no está plegada, no está
2:16:34bien plegada y entonces listo, ya está,
2:16:37no te damos más oportunidades ir dando
2:16:38vuelta, se marcó y justamente en el
2:16:42proteasoma hay receptores que reconocen
2:16:46a la acá está en el mismo proteasoma hay
2:16:50un receptor que reconoce a la
2:16:51poliobiquitina y después hay un enzima
2:16:53que tic le saca esta poli, le saca la
2:16:56ubicuitina y la proteína entra y se
2:16:58degrada y la ubiicuitina se recicla y se
2:17:01la pueden ir a poner a otra proteína mal
2:17:02plegada.
2:17:04Y ahí otra vez que hincha con la
2:17:06oración, pero listo, esta es la última
2:17:08clase, así que no se las digo más.
2:17:09Fíjense cómo es esta oración. Si la
2:17:11proteína queda desplegada, se marca para
2:17:13ir al proteasoma. ¿La entendieron la
2:17:16oración? ¿Alguien hay alguna una
2:17:18proteína que detecta que la proteína no
2:17:20está plegada? Alguien le pone una marca.
2:17:24Es otro alguien detecta esa marca y otro
2:17:27alguien manda a degradar la proteína.
2:17:31¿Vieron cuántas oraciones que vimos
2:17:33hasta ahora? Acá está, acá está la
2:17:36oración. Una proteína detecta la
2:17:38proteína mal plegada y le agrega la
2:17:40señal. tic, la señal esta se la pone a
2:17:43esta proteína que es la mal plegada y
2:17:46esto va al proteasoma y el proteasoma
2:17:50eh la degrada y eso está buenísimo
2:17:51porque evite que se forman esos
2:17:53agregados tóxicos.
2:17:56Bueno, también hay las chaperonas no
2:17:58solo funcionan para esto del plegado de
2:18:00las proteínas al principio o si ante
2:18:03estrés, sino que también van a ver que
2:18:05hay chaperonas necesarias para desplegar
2:18:08proteínas cuando tienen que entrar a
2:18:09ciertas organelas. Esto también lo vamos
2:18:11a ver cuando digamos, bueno, ¿y cómo va
2:18:13a llegar una proteína a la mitocondria?
2:18:15Ya van a ver que tiene ciertas señales,
2:18:17pero para entrar a la mitocondria no
2:18:19puede entrar toda armada. Hay todo un
2:18:21mecanismo que hace que la que se
2:18:23despliegue y después entra y se vuelve a
2:18:25plegar. Y ahí hay siempre chaperonas en
2:18:28algún lugar ayudando a desplegar de
2:18:30manera controlada y y a volver a plegar.
2:18:35Y este dibujito me encantó porque es
2:18:38bastante gráfico. No sé si lo si si
2:18:41lo pescan, pero hay algunas chaperonas
2:18:44que lo que hacen es mantener a su
2:18:46proteína, que es podríamos decir que el
2:18:48su el el la proteína de la que protegen
2:18:50es el sustrato de la chaperona, la
2:18:53mantienen en estado nativo, incluso en
2:18:55condiciones desfavorables. Están
2:18:56asociadas aunque aumente la temperatura
2:18:58así y no la dejan desplegarse. Y acá
2:19:01está representada como una proteína,
2:19:03como la condición desfavorable es el
2:19:05viento y estaría desplegándola y la
2:19:07chaperona en realidad cuando se une
2:19:08evita que esté pasando eso.
2:19:12Bueno, y llegamos a los prones que son
2:19:15una cosa muy particular que ya un
2:19:17poquito nos adelantamos y ya algo las
2:19:19conocen por lo que vi, pero son como
2:19:22proteínas que lo que tienen es modificar
2:19:25el plegamiento de otras que son iguales
2:19:27a ellas.
2:19:29La la proteína se llama Prion por
2:19:32proteína infecciosa. De ahí viene el PR
2:19:34y la I y la I, digamos. es una proteína,
2:19:39la proteína normal es una proteína
2:19:41necesaria que que tiene que cumple
2:19:43funciones y que tiene una estructura en
2:19:45particular, pero ante alguna cosa
2:19:47particular que a veces no se sabe y a
2:19:50veces hay como causas genéticas que
2:19:52tienen mayor predisposición o alguna
2:19:54cosa azarosa, alguna que dice que por
2:19:58suerte es muy raro que pase eso, cambia
2:20:01de conformación, pero cambia de
2:20:02conformación, fíjense cómo es la
2:20:04normalélices
2:20:07Sí, alguna beta, una hoja beta por acá y
2:20:09estas partes sin ninguna estructura y
2:20:11cuando cambia hace tuc tuc tuc tuc toda
2:20:14esta parte de hojas beta pierde esta
2:20:16alfa hélice y todo esto se transforma en
2:20:19hojas beta plegada y eso le cambia tanto
2:20:22la conformación
2:20:24que adquiere como una función nueva que
2:20:27la otra no tenía y es ir y empezar a
2:20:29reconocer proteínas que eran iguales a
2:20:31ella en su conformación anterior y su
2:20:34actividad enzimática, entre comillas, es
2:20:36cambiarle la conformación y
2:20:37transformarla en este en este horror.
2:20:40Acá están representadas como el la que
2:20:43tiene la conformación normal redondita y
2:20:46la que le cambió la conformación se pone
2:20:47así plana y cada vez que se asocian tuc
2:20:50le cambia la forma. Tipo eh zombies,
2:20:54zombies que van y tocan a otros y los
2:20:56transforman en zombies. Bueno, y encima
2:20:59no solo cambia la conformación, sino que
2:21:01se empieza empiezan a formar estos
2:21:02agregados que son resistentes a
2:21:05proteasoma y son resistentes a
2:21:07chaperonas. Una vez que adquieren esta
2:21:10forma, las chaperonas no lo pueden
2:21:11arreglar a este en particular, con lo
2:21:14cual son un horror, se empiezan a
2:21:17empiezan a formar precipitados y son
2:21:18tóxicos para las células y las neuronas
2:21:20son muy sensibles a estos tóxicos y
2:21:23empiezan a morirse y ahí es cuando
2:21:26producen estas enfermedades tan
2:21:27terribles
2:21:29que es la que seguramente conocen, la
2:21:31enfermedad de de las vacas locas en
2:21:32vacas y hay un equivalente en humanos
2:21:35que es esta enfermedad con este nombre
2:21:38un poco difícil de pronunciar, pero
2:21:42es una cosa muy impresionante y muy
2:21:44peligrosa cuando aparece y muy
2:21:45contagiosa, como de pri a pri, digamos,
2:21:48de pri a otra proteína, ¿no? Entonces,
2:21:52eh lo loco es que encima si una célula
2:21:56tiene eh los pri
2:22:00este prión puede salir de la célula y
2:22:02pasar a otra célula y entonces se va
2:22:05heredando a células hijas.
2:22:08Los asusté un poco.
2:22:10Bueno, hay una forma de combatirlos,
2:22:13profe. Tipo, me da
2:22:16no se conoce una forma de combatirlo. es
2:22:19muy terrible y cuando aparece y se
2:22:20detecta, sí, hay formas como de tratar
2:22:22de hacer como que evitar que avance así,
2:22:26pero lo el daño que que va causando y y
2:22:29cómo es que, o sea, hay hay formas de
2:22:31hacer que las en las personas, digamos,
2:22:34que esas
2:22:35eh que los síntomas sean como más leves,
2:22:38como haciendo tratamientos que afectan
2:22:40el sistema nervioso y eso, pero eh no,
2:22:43por ahora no y es muy muy terrible, pero
2:22:45bueno,
2:22:47pero vamos, no quiero agotar con este
2:22:49mensaje negativo porque nos queda 20
2:22:52minutos y vamos que ahora viene todo
2:22:54para arriba la clase. No sé qué le pasa
2:22:56a uno de mis perrosando como loco.
2:22:59¿Ustedes lo escuchan el ladrido?
2:23:01No, no se escucha.
2:23:02No, profe.
2:23:03Ah, menos mal. Profe, pregunta, ¿estas
2:23:06se las considera enfermedades
2:23:08autoinmunes o no son todas autoinmunes?
2:23:10No, no, no es autoinmune. Porque el
2:23:11problema no es una enfermedad autoinmune
2:23:14es cuando
2:23:16el el sistema inmunológico propio
2:23:19reconoce a algo propio, a alguna cosa
2:23:22como algo extraño y lo ataca.
2:23:24Acá el ataque no es producto del sistema
2:23:27inmunológico, sino que es producto de
2:23:29una proteína que por alguna razón
2:23:32extraña cambió su conformación y se
2:23:34transformó en una proteína con una
2:23:35actividad nueva que es inducir ese
2:23:37cambio de conformación a otras, empezar
2:23:40a a formar agregados entre sí,
2:23:43resistentes a todo y esos agregados son
2:23:45tóxicos en las neuronas y empiezan a
2:23:47matar neuronas.
2:23:49Ah, listo. No tiene que ver con el
2:23:51sistema inmunológico.
2:23:52No tiene que ver con el sistema
2:23:53inmunológico porque acá el daño lo
2:23:54produce el agregado formado
2:23:56por eh las distintas eh por las
2:23:59proteínas que van cambiando de
2:24:00conformación.
2:24:02Okay, listo. Gracias. No,
2:24:03profe, y una pregunta,
2:24:05e ponele, o sea, no, o sea, no, pero
2:24:10digo, ponele con Crist, no se podría
2:24:13arreglarlo el tema de los prones o el
2:24:15problema no está como en la base
2:24:16genética, sino que es como en los
2:24:18cambios postranscripcionales.
2:24:21Hay algunas, o sea, hay diferentes. Si
2:24:23les interesa eso, hasta lo pueden leer
2:24:25en en Wikipedia mismo si quieren empezar
2:24:28con algo tranqui. Hay un montón de
2:24:29información sobre esos priones y hay
2:24:31distintas manifestaciones de la
2:24:33enfermedad. Por suerte es muy rara, es
2:24:35muy poco frecuente. Hay algunas que
2:24:37tienen base genética, pero hay otras
2:24:39causas que que no, que son como que
2:24:41aparecen después. Eh,
2:24:44pero eh no es algo que uno pueda tratar
2:24:46y atacar, sino lo que hay que hacer es
2:24:48bueno, incluso empezó apareció a lo
2:24:51mejor en en tribus que que
2:24:55ejercían el canibalismo y que se comían
2:24:57el cerebro. de los muertos y entonces
2:25:00así se contagiaban de los prones.
2:25:02Entonces hoy en día se sabe que cuando
2:25:04aparece una enfermedad así, hasta leí,
2:25:06me llamó, de hecho, me llamó la atención
2:25:08que el material con el que se analiza
2:25:10una muestra que tuvo prones directamente
2:25:12se destruye, ni siquiera se esteriliza
2:25:15porque son como resistentes a la
2:25:17autoclave y esas cosas. Entonces, el
2:25:19material quirúrgico con el que que tuvo
2:25:21contacto se destruye de una manera así
2:25:23como muy violenta. Eh,
2:25:27pero bueno, no nos quedemos con esto.
2:25:29Salgamos de ahí porque viene todo para
2:25:30arriba y me faltan un montón de cosas.
2:25:33Viene todo para arriba y me faltan un
2:25:34montón de cosas para contarles muy
2:25:35lindas. Sí, pero si a alguien le
2:25:37interesa un poco más, hay un montón de
2:25:39material por ahí que pueden leer. Hay
2:25:41mucha, mucha info.
2:25:43Eh, de hecho, yo estuve leyendo un
2:25:45montón y digo, bueno, selecciono un
2:25:47poquitito para contarles y sigamos para
2:25:48acá. Pero bueno, empecemos por ir
2:25:51levantando y es no todos los agregados
2:25:54que se forman en la célula son tóxicos
2:25:56para que no se queden con esa idea de,
2:25:57uy, se empezó a formar un agregado de
2:25:59proteínas, está todo mal. No, hay un
2:26:03montón de agregados que se forman en la
2:26:05célula, pero que son reversibles y que
2:26:07tienen una función biológica.
2:26:10Y esto, esto que sean reversibles es
2:26:12clave porque justamente se pueden formar
2:26:16y ante alguna condición se pueden
2:26:17desarmar. Por ejemplo, hay hormonas
2:26:20peptídicas que cuando se sintetizan y ya
2:26:25van a ver después cuando otra vez cuando
2:26:27veamos eh transporte de proteínas
2:26:30adentro de las células, van a ver todos
2:26:32las organelas y van a ver que empiezan
2:26:34sintetizando el retículo, pasan por el
2:26:36goli, las proteínas que se tienen que
2:26:38secretar tienen un lugar en particular
2:26:40por donde se sintetizan y forman estas
2:26:43vesículas secretorias y esas forman como
2:26:46unos agregados que justo justamente
2:26:48también se llama eh como fibrilla
2:26:50amiloide, que son estos agregados que se
2:26:52forman y eso permite que se formen unos
2:26:54gránulos con mucho una cantidad compacta
2:26:57y de una cantidad grande de ese esa
2:27:01péptido que se va a secretar
2:27:04y cuando se secreta se solubiliza. ¿Sí?
2:27:06Y entonces es como un mecanismo de
2:27:07empaquetamiento reversible y controlado.
2:27:11Después en este otro que elegí acá como
2:27:13como ejemplo, en bacterias se forman
2:27:16agregados así eh de estas fibrillas
2:27:19amiloides también por empaquetamiento
2:27:21que eh son super importantes para formar
2:27:24eh,
2:27:26¿cómo se llama? Una como los biofilms
2:27:29que mantienen juntas un montón de
2:27:31bacterias y es importante en las
2:27:33comunidades de esas bacterias que se
2:27:35forman. Eh, y después hay otras
2:27:38interacciones así de este tipo que se
2:27:41llama tipo Prion, que no son agregados
2:27:43indefinidos, sino regiones controladas,
2:27:46que algunas proteínas de golpe exponen
2:27:47una región que se parece a la de un
2:27:50prión y se pueden unir entre sí de
2:27:53manera controlada y después ante ciertos
2:27:55eh estímulos se vuelven a separar y
2:27:58entonces se encontró que forman como a
2:28:00lo mejor asociaciones tipo gránulos o
2:28:03como mini organela sin membrana y eso.
2:28:06donde hay muchos de estos eh dominios
2:28:09tipo Prion eh donde se forman estos
2:28:11agregados pero reversibles y
2:28:12controlados. ¿Sí? Entonces, es el primer
2:28:15mensaje positivo.
2:28:18Salgamos de los prones y de los
2:28:20agregados y volvamos a otras cosas
2:28:22generales de las proteínas. Y una que no
2:28:25les comenté es que hay algunas proteínas
2:28:27que tienen como hay estructuras que
2:28:30forman como si fuesen andamiajes
2:28:32gigantes. ¿Ven que esta se llama como
2:28:36scafol proteín? Es como una proteína de
2:28:38andamiaje que tiene regiones donde se
2:28:41une, se une otra, se une otra, se une
2:28:43otra que de manera específica. Fíjense,
2:28:46con este dibujito están representando
2:28:48que se está uniendo de manera específica
2:28:51y permite entonces esa proteína de
2:28:52andamiaje asociar proteínas
2:28:56eh que tienen que estar cerca entre
2:28:58ellas o o moléculas en particular y
2:29:02termina eh formando un producto. Estas
2:29:04podrían ser proteínas o podrían ser
2:29:05otras moléculas. Esto sería como un caso
2:29:07particular de enzima donde lo único que
2:29:09hizo fue acercar y permitir que
2:29:12interactúen otras otras moléculas entre
2:29:14zip. Sí, pero se son proteínas que se
2:29:17llaman de andamiaje y a veces se acercan
2:29:20proteínas entre sí de una vía de
2:29:22señalización, por ejemplo, y que están
2:29:24muy regulados. Si a esa proteína de
2:29:26andamiaje a veces le pasa algo tipo se
2:29:28fosforila, no puede unir a alguien más,
2:29:30se corta toda esa vía de señalización
2:29:32porque la proteína de andamia no las
2:29:34está acercando, por ejemplo.
2:29:37Bueno, y después hay muchísimas
2:29:38proteínas también interactuando, como
2:29:41esto que les decía, pero formando redes
2:29:42regulatorias, que esto también pu lo van
2:29:45a ver más en detalle con Ale después,
2:29:48pero que hay, esto es simple, hay como
2:29:51redes gigantes que que donde uno arma y
2:29:54piensa, bueno, todas estas proteínas
2:29:56están interactuando funcionalmente y
2:29:58participan en, no sé, regular el ciclo
2:30:00celular o hacer eh tal cosa para la
2:30:04replicación y así como asociadas a
2:30:06diferentes diferentes funciones.
2:30:09Bueno, y lo último, me quedan 10
2:30:12minutos.
2:30:14Espero que estén con pilas porque les
2:30:16voy a contar una cosa muy divertida.
2:30:18¿Vamos bien para terminar? ¿Seguimos
2:30:20ahí?
2:30:20Sí, profe.
2:30:21Sí, sí, sí, sí.
2:30:23Espero que sigan bien porque ya no tengo
2:30:24otra clase de acá. esqueleto. Ya no
2:30:26tengo más clases, así que se los tengo
2:30:28que contar hoy. Hm.
2:30:32Bueno, entonces
2:30:34lo último,
2:30:38teniendo la estructura primaria de una
2:30:40proteína, uno puede determinar la
2:30:43estructura tridimensional, ¿no? Vamos
2:30:45bien. Si sé cuáles son los aminoácidos
2:30:47que hay que que que forman una proteína,
2:30:50uno podría incluso predecir la
2:30:53estructura tridimensional. Conocer de
2:30:55hecho la estructura tridimensional de
2:30:56una proteína es reimportante para poder
2:30:59entender con quién se va a unir, cómo
2:31:01funciona o incluso si la quiero regular,
2:31:05quiero decir, "Uy, mira, esta proteína
2:31:08ahora tiene esta mutación y en esta
2:31:09enfermedad no puede estar uniéndose con
2:31:12esto." Y entonces, ¿cómo se podría
2:31:13solucionar? Realmente conocer la
2:31:16estructura tridimensional de una
2:31:17proteína es super importante para poder
2:31:20estudiar su función y no es tan fácil
2:31:24estudiar en el laboratorio
2:31:26experimentalmente
2:31:27la estructura tridimensional de una
2:31:29proteína. Entonces, hoy en día se están
2:31:31usando métodos computacionales para
2:31:33predecir, pensando en todos los
2:31:35aminoácidos que las forman. ¿Cuál podría
2:31:38ser la estructura tridimensional? A
2:31:40ustedes les parece que es una pavada,
2:31:41pero en realidad hay un montón de
2:31:42posibilidades, no es que es tan simple.
2:31:46Y eso incluso pensemos ahora sabiendo la
2:31:49estructura tridimensional que quiero,
2:31:52digo, "Che, me vendría bien algo que
2:31:54enganche acá justo para hacer tal cosa.
2:31:57Uno podría ir para el otro lado y
2:31:59fabricarse una proteína." Sí. Y esto,
2:32:03este concepto que les acabo de contar
2:32:05condujo al Premio Nobel de química en el
2:32:0724. Sí. Esto es bastante reciente
2:32:12y se lo dieron a estos tres
2:32:13investigadores, a David Baker, Demis
2:32:16Hasabis y John Kumper. No sé si
2:32:18seguramente alguno a lo mejor capaz leyó
2:32:22a Demi Hasabi y John Jumper, eh
2:32:28se los dieron justamente por desarrollar
2:32:31eh un sistema que permite predecir la
2:32:35estructura tridimensional
2:32:38conociendo la estructura primaria, que
2:32:39eso es algo mucho más fácil de tener de
2:32:42una proteína.
2:32:43Y a David Baker se lo dieron por hacer
2:32:46el camino para el otro lado, teniendo
2:32:49una proteína que uno quiere diseñarse,
2:32:52fabricársela.
2:32:54Entonces, se los cuento muy rapidito.
2:32:55¿Cómo estamos de tiempo? Ahí estamos.
2:32:59Vamos en los dos primeros que es de
2:33:02conociendo la secuencia de aminoácidos
2:33:05tratar de ver qué forma tiene. Ellos
2:33:07desarrollaron este sistema Alpha Fold
2:33:10que fue avanzando y vamos teniendo
2:33:12distintas versiones cada vez mejores.
2:33:14Incluso ahora este puede predecir no
2:33:16solo a la proteína, sino a la proteína
2:33:19interactuando, por ejemplo, con ácidos
2:33:22nucleicos o con algunas otras moléculas.
2:33:25Y bueno, acá este es el paper eh de
2:33:28Alpha Fall 3, pero están todos los
2:33:30papers de los anteriores, son así como
2:33:32bastante técnicos eh de bioinformática,
2:33:36pero hay unas interfaces que uno tiene
2:33:38que usar para meterse y jugar un
2:33:42poquito, pero les cuento en qué se basa,
2:33:44cómo cómo funciona este sistema
2:33:48y es porque es muy interesante desde el
2:33:49punto de vista biológico.
2:33:52tenemos este concepto que yo ya se los
2:33:53conté la primer clase, que una proteína
2:33:56en distintas especies mantiene la forma.
2:33:58¿Se acuerdan que yo les había dado ese
2:33:59ejemplo de la de la misma proteína en
2:34:03levadura y en mosca cuando les hablaba
2:34:06de los de los dominios y les dije acá
2:34:07hay un dominio ñón al ADN y que tiene
2:34:10esta estructura
2:34:13y hay unos aminoácidos cambiados, pero
2:34:15sin embargo la forma es la misma. ¿Sí se
2:34:17acuerdan?
2:34:19¿Se acuerdan? ¿Alguien se acuerda?
2:34:20Sí. Sí.
2:34:21Bien,
2:34:23bueno, lo que ellos hacen es pensar,
2:34:27okay, si mantuvieron la forma, pero sin
2:34:29embargo a lo largo de la evolución las
2:34:30secuencias cambiaron, vayamos a mirar
2:34:33cómo cambiaron las secuencias y eso nos
2:34:36puede dar una pista de cómo están
2:34:37interactuando la las cadenas laterales
2:34:41que están en distintas posiciones dando
2:34:43esa forma. Si la forma se mantuvo, pero
2:34:45ahora hay distintos aminoácidos, podemos
2:34:48tratar de deducir quiénes están
2:34:49interactuando entre sí. Por ejemplo, si
2:34:52tenemos en este caso una licina y un
2:34:55ácido glutámico, justo tenemos un
2:34:57aminoácido con carga positiva y uno con
2:34:58carga negativa, estos podrían estar
2:35:00interactuando. Sin embargo, me puedo
2:35:03llegar a encontrar en otra especie que
2:35:05en esa misma posición que estaba la
2:35:07licina cambió por un ácido aspártico y
2:35:11cuando cambió este también cambió otro,
2:35:14o sea, dejó de estar este ácido
2:35:16glutámico y ahora hay una arginina.
2:35:19Fíjense que entonces ellos fueron
2:35:21descubriendo, bueno, es algo que ya se
2:35:24viene haciendo, solo que ellos ahora lo
2:35:25pueden hacer a gran escala, mirando un
2:35:27montón de genes, un montón de especies,
2:35:29perdón, un montón de proteínas, un
2:35:31montón de especies en un montón de
2:35:33posiciones y e ir descubriendo cuáles
2:35:36son los cambios que están apareados.
2:35:38Cambió este que era positivo, cambió por
2:35:40uno negativo y vino acompañado de este
2:35:43otro cambio. ¿Por qué? en realidad
2:35:45porque se seleccionó la evolución cuando
2:35:47cambió uno y el otro cambió a cosas que
2:35:49no tenían nada que ver. Eso nunca pudo
2:35:52dar un organismo que llegamos a ver.
2:35:55Pero cuando apareció esta otra
2:35:56combinación que mantenía la forma, eso
2:35:59sí se pudo conservar en la evolución
2:36:01porque lo importante para que la esa
2:36:04proteína funcione es que tenga la forma.
2:36:06Si justo cambiaron unos aminoácidos,
2:36:08pero la forma se mantiene, a lo mejor
2:36:10anda bien también. ¿Ven? Entonces, con
2:36:13eso ellos van identificando qué
2:36:15aminoácidos están cerca, ¿no? Si este
2:36:19por ejemplo estaba acá y van encontrando
2:36:23que estaban lejos en la cadena lineal,
2:36:26pero cerca en la estructura
2:36:28tridimensional, porque lo van deduciendo
2:36:30porque van estando juntos. El programita
2:36:33va armando aminoácidos más cerca, los
2:36:36pone como brillantes, los que están
2:36:37lejos los pone oscuros y así van
2:36:39combinando estas matrices y sacando un
2:36:42montón de van armando mapas de
2:36:44distancias. Sí, yo por acá en el PDF les
2:36:47dejo un link de un video que está
2:36:49bastante bueno, cómo explica cómo
2:36:51funciona
2:36:52por si alguno le interesa meterse un
2:36:54poco más, no porque sea obligatorio,
2:36:55pero si alguno se copó con esto y quiere
2:36:57saber un poquito más cómo funciona. Y
2:36:59así entonces
2:37:01metiendo datos de una secuencia de la
2:37:04secuencia de aminoácidos que es algo que
2:37:06uno puede determinar fácil en el
2:37:09laboratorio. En esta en esta red neural
2:37:13va probando distintas posibles
2:37:15conformaciones hasta que da una
2:37:16predicción de la estructura y de hecho
2:37:18hasta dice, "Bueno, la estructura puede
2:37:20ser que tenga más o menos esta forma.
2:37:23Esto seguro, esto seguro es así, pero
2:37:25esto más o menos nos da como un
2:37:28porcentaje de confianza de con cuánto es
2:37:32posible que realmente tenga esa forma y
2:37:34eso es absolutamente útil.
2:37:38Y ahora teniendo
2:37:40Sí.
2:37:41Eh, perdón, eh, o sea, ¿hay alguna
2:37:44materia? Eh, o me imagino que es no tan
2:37:48inicial, pero en alguna materia se use
2:37:51un poco el programa o sí, sí,
2:37:54completamente van a ir ya estamos en las
2:37:57primeras clases de IBMC, que es de las
2:37:59primeras materias de la carrera y me
2:38:00encanta que se vayan entusiasmando así
2:38:02con distintas cosas cuando bueno, esto
2:38:05es como más fácil charlarlo cara a cara,
2:38:07pero ya nos vamos a encontrar, eh, pero
2:38:10y podemos charlar todo lo que quieran de
2:38:11las distintas materias que hay a lo
2:38:13largo de la carrera, incluso
2:38:15Hay jornadas que organizamos y pueden ir
2:38:17charlando con profes que van teniendo,
2:38:20porque en general todos los profes damos
2:38:22una materia en el primer cuatro y otra
2:38:23materia en el segundo y entonces cada
2:38:24uno les puede ir contando un poco más
2:38:26qué es lo que la materia más
2:38:28especializada que da en el otro
2:38:29cuatrimestre, qué otras materias hay y
2:38:31entonces según lo que ustedes se van
2:38:32interes les va interesando, pueden ir
2:38:34armando después su plan para la segunda
2:38:37parte, pero si a ustedes les interesa
2:38:38eso, también tienen materias donde ven
2:38:41cómo funciona esto, que usan esto o
2:38:43incluso pueden ir metiéndose y explorar
2:38:45un poco. Hay un montón de tutoriales en
2:38:48línea que están buenísimos.
2:38:51Así que si les interesó ahí les dejo el
2:38:54link y se pueden ir metiendo y pueden
2:38:56estar horas jugando con eso. Pero el
2:38:59concepto que yo quería se los cuento
2:39:01ahora porque es recopado para para
2:39:04terminar la clase, todo el bloque de las
2:39:06clases de proteínas, pensar en la
2:39:08relevancia enorme que tiene esto y que
2:39:10tanto que condujo al Premio Nobel de
2:39:12estos tres investigadores y todo lo que
2:39:14se está haciendo que ahora les cuento y
2:39:15les va a volar la cabeza. No tengo mucho
2:39:17tiempo, así que tengo 2 minutos para me
2:39:19bancan. 5 o 10 minutos más. Les cuento
2:39:22esta última parte que es muy linda.
2:39:23Trato de contársela rapidito.
2:39:25Bueno, para el otro lado, David Baker,
2:39:29que también otro el tercer va uno de los
2:39:32tres premios Nobel, eh, en este mismo
2:39:35que les estaba contando, hace lo
2:39:38contrario. Él dice, "Yo quiero una
2:39:41proteína que se enganche con esto, que
2:39:44entre perfecto acá." Ahora les voy a
2:39:46contar para qué podemos querer esas
2:39:47cosas. O sea, me quiero inventar una
2:39:50proteína porque la necesito para tal
2:39:53cosa, por ejemplo, para inactivar un una
2:39:57toxina de un veneno. Quiero una proteína
2:40:00que tú se puede encontrar con una toxina
2:40:01en veneno y la inactive. Y bueno,
2:40:03entonces esa proteína tendría que tener
2:40:04una forma más o menos así. Dale, la
2:40:06diseño. Entonces tienen una serie de
2:40:10programitas donde dicen, "Bueno, vos
2:40:12querés esta forma, entonces necesit
2:40:14querés enganchar en esta forma, tendrías
2:40:15que tener una proteína que tenga más o
2:40:17menos esta estructura." Y para tener
2:40:19esta estructura, bueno, vamos a empezar
2:40:20a probar qué aminoácidos tendría que
2:40:22tener. Y entonces va probando distintas
2:40:24secuencias primarias, todo con la info
2:40:26que ya les conté antes, pero como yendo
2:40:29por el otro lado, hasta que sale una
2:40:31combinación que le da que puede ser. Y
2:40:34entonces, okay, esos aminoácidos
2:40:37necesito. Bueno, sabiendo los
2:40:38aminoácidos que necesito, sé qué
2:40:40secuencia de ADN necesito para fabricar
2:40:43ese polipéptido. Lo hago, lo hago, lo
2:40:46meto en alguna célula, hago que esa
2:40:48célula produzca la proteína y me fijo,
2:40:52me fijo si esa proteína tiene la
2:40:53estructura que está bien. Si va todo
2:40:55bien, listo, la pruebo y empiezo a hacer
2:40:57cosas. Y ahí está la página del
2:40:59laboratorio de Baker que lo googlean y
2:41:02entran y hay cosas recopadas
2:41:05y nos cuentan todas las cosas que están
2:41:06haciendo y están probando, por ejemplo,
2:41:08sintetizando proteínas para neutralizar
2:41:11toxinas eh que de
2:41:16serpientes.
2:41:17Y ahí está el paper, que está buenísimo,
2:41:20un paper, eh, bueno, no para que se lo
2:41:23pongan a leer, pero pueden ahí leer el
2:41:25abstract. Y yo les resalté acá un
2:41:27pedacito, que justamente diseñaron
2:41:30proteínas que se las inventaron ellos y
2:41:32que efectivamente neutralizan
2:41:34eh
2:41:36distintas eh familias de de de toxinas y
2:41:40que les funcionaron en un modelo, en un
2:41:42ratón. A un ratón probaron, pobrecito,
2:41:45pero lo probaron. Ponerle la toxina y
2:41:47anduvo. O sea, están fabricando cosas
2:41:50que pueden funcionar y que son cuando
2:41:52esto se pueda lograr hacer a gran
2:41:53escala. Está buenísimo y es mucho más
2:41:56accesible que usar los sueros que se
2:41:58fabrican ahora eh, antiofídicos, que se
2:42:01us se fabrican en animales y son mucho
2:42:03más costosos y laboriosos. O sea, cuando
2:42:05esto ande está buenísimo cómo se puede
2:42:08escalar. Y un montón de aplicaciones que
2:42:11no se pueden imaginar. Por ejemplo,
2:42:13diseñar anticuerpos. ¿Vieron que yo le
2:42:15dije, "Bueno, no tenemos anticuerpos
2:42:16disponibles para todas las proteínas que
2:42:18uno quiere mirar."
2:42:20Bueno, podemos diseñarlos con eh con
2:42:24este sistema y no solo para nosotros
2:42:26para estudiar en el laboratorio, sino
2:42:28para un montón de otras aplicaciones. Y
2:42:31ellos, justamente acá les fui dejando,
2:42:34se los paso muy rapidito para no
2:42:35aburrirlos, pero cada uno después se
2:42:37mete donde le interesa más. Eh,
2:42:40diseñaron anticuerpos que funcionan re
2:42:42bien y que los probaron y con mucha
2:42:45precisión. anticuerpos que reconocen s
2:42:48super específicamente.
2:42:49Incluso están haciendo también esos mini
2:42:52anticuerpos que son solo esa parte de la
2:42:54región variable que es esa parte que les
2:42:56contaba que reconoce lo que uno
2:42:58necesita, pero en vez de ser un
2:43:00anticuerpo enorme uno lo puede fusionar
2:43:01a una proteína fluorescente. Entonces,
2:43:03lo podría hacer expresar a células y
2:43:07mirar proteínas endógenas sin matarlas,
2:43:09sin matar a las células, haciendo que
2:43:11expresen un anticuerpo muy chiquitito
2:43:14fusionado una proteína fluorescente.
2:43:16Bueno, y ellos se los están inventando.
2:43:19diseñaron eh
2:43:23como receptores
2:43:25de de distintas moléculas, como
2:43:27receptores de olfato, pero que se
2:43:28podrían llegar a usar eh para detectar
2:43:33diferentes compuestos en algún lugar y
2:43:34entonces podrían ser biosensores s
2:43:37sensibles.
2:43:39Y dice que bueno que está buenísimo
2:43:41porque este proyecto combina muy de
2:43:44cerca la biología con la electrónica,
2:43:46porque podrían hacer biosensores con
2:43:48estas moléculas que detecten con muy
2:43:51alta afinidad la molécula que uno quiera
2:43:53y entonces, bueno, es infinidad de
2:43:56aplicaciones podrían llegar a tener.
2:43:58Bueno, y así un montón de cosas.
2:44:02Perdón, ¿alguien me preguntaba algo?
2:44:03Eh, sí, tengo una pregunta. O sea, v e
2:44:07esto de las de las proteínas para poder
2:44:09estudiar proteínas en vivo, o sea, eh,
2:44:12para poder estudiar proteínas sin vivo,
2:44:14e o sea, se tiene en cuenta que, no sé,
2:44:18es mi pregunta, pero digo, puede ser que
2:44:20todo eso que se introduzca la célula
2:44:22para estudiarla como que genere como un
2:44:25cambio en la en el metabolismo normal de
2:44:28la, o sea, eso también este se tiene en
2:44:29cuenta
2:44:30totalmente. Eso no solo, no solo cuando
2:44:32le metés a la célula algo como este mini
2:44:34anticuerpo fusionado a una proteína
2:44:36fluorescente, sino cualquier cosa que
2:44:37uno le introduzca la célula para mirar
2:44:40algo, uno tiene que estar atento porque
2:44:43puede afectarla. Y entonces siempre hay
2:44:46una serie de controles que uno hace
2:44:48donde dice, "Bueno, yo voy a estudiar el
2:44:50efecto. Yo voy a estudiar qué le pasa a
2:44:52mi proteína ante tal estímulo. Para eso
2:44:55le tengo que meter un plásmido que le
2:44:57haga expresar tal cosa. Bueno, pero
2:44:59primero lo voy a mirar si cuando le
2:45:00pongo ese plásmido antes de ponerle el
2:45:02estímulo no le pasa nada terrible a la
2:45:03célula y después recién podés empezar a
2:45:06hacer tus experimentos siempre con la
2:45:08condición control donde no le haces el
2:45:10estímulo, no le das el estímulo, pero le
2:45:11metiste esa misma proteína. Sí. O sea,
2:45:14esa pregunta tiene mucho sentido y no es
2:45:17solo
2:45:18restringido a esto de ponerle, por
2:45:20ejemplo, mini anticuerpos acoplados a
2:45:22proteínas fluorescentes, sino eh
2:45:25cualquier otra cosa que uno le
2:45:26introduzca la célula para ver. Está
2:45:29bien, está muy bien esa pregunta.
2:45:32Gracias, profe.
2:45:33No, de nada. Y bueno, un montón de
2:45:35cosas, un montón de otras aplicaciones.
2:45:37Yo les dejo acá varios ejemplos de los
2:45:39papers, eh, pero acá en este caso eh
2:45:43proteínas que pueden estimular vías de
2:45:45señalización que pueden dirigir la
2:45:48diferenciación de una célula madre, que
2:45:50bueno, justo es el tema con el que yo
2:45:52trabajo, eh, pero esto es como para uno
2:45:54puede a una célula madre hacerla que se
2:45:56diferencie a un tipo celular o a otro y
2:45:59eso se podría llegar a usar para generar
2:46:01tejidos que sirvan para hacer un
2:46:03tratamiento de alguna enfermedad y está
2:46:05buenísimo entonces tener algún una
2:46:07herramienta para poder diferenciar de
2:46:09manera dirigida algo o aumentar esa
2:46:11eficiencia de diferenciación. Bueno, se
2:46:13están diseñando proteínas para hacer eso
2:46:16también. Eh, bueno, este es el paper.
2:46:20Hay un montón de otras cosas. Se
2:46:21inventan enzimas, inventaron enzimas que
2:46:24a lo mejor tengan un sitio activo que
2:46:25haga cosas que antes se necesitaban
2:46:28varias enzimas para hacerlo. Eh,
2:46:31entonces las diseñan y dicen, "Bueno,
2:46:33ahora voy a hacer una super enzima que
2:46:35me haga. Yo necesitaba hacer de acá para
2:46:37acá, para acá, para acá, pasando por
2:46:39varias para un proceso que quiero hacer
2:46:41en vitro, me diseño una encima que me lo
2:46:43haga todo en un solo paso y se lo está
2:46:46están funcionando y teniendo unos
2:46:47resultados muy geniales. Así que el
2:46:50potencial es enorme. Podemos pensar en
2:46:54aplicarlo para generar vacunas, para
2:46:56tratar otras para tratar un montón de
2:46:58enfermedades para el medio ambiente como
2:47:00para atacar el efecto invernadero,
2:47:03eh para detectar toxinas con esto de los
2:47:06sensores que les contaba, para fabricar
2:47:08cosas para poder degradar residuos que
2:47:10no se degradan con nada, para poder
2:47:13aprovechar al máximo la energía solar o
2:47:15otras fuentes de energía. Chicos, el
2:47:17futuro es hoy y tenemos un potencial
2:47:20enorme, así que muchas gracias, muchas
2:47:24gracias por estar acá allá desde el otro
2:47:27lado, por toda este feedback y
2:47:30acompañamiento, aunque sea en esta clase
2:47:31así tan atípica, estando simil pandemia.
2:47:36Así que bueno, muchas gracias, chicos.
2:47:47Gracias, profe.
2:47:50Bueno, voy a cortar la grabación. Voy a
2:47:53dejar de
2:47:56corto la grabación. M.

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This page contains the full transcript of T6 IBMC_2026_1c_Proteinas 3 Alejandra Guberman (virtual) by Alejandro Colman-Lerner, generated from the public captions YouTube serves with the video. The transcript has 26,818 words across 4,270 segments, with the original timestamps preserved so you can click any line to jump to that moment in the embedded player.

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