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T11 IBMC 2026 2c GenProcariota OperonLac Alejandro Colman Lerner — Transcript

by Alejandro Colman-Lerner · 17,088 words · 3,089 segments · language en · Watch on YouTube

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0:00Hola.
0:03Hello.
0:08Buenos días.
0:11Empezamos.
0:14No llegaron todos, pero bueno, empecemos
0:16no se hace muy tarde. Por ahí nos
0:18pasamos un cachito de las 12:30
0:20seminario. 1:30, ¿no?
0:23Algún.
0:24Bueno, bueno, hoy eh vamos a empezar a
0:27hablar de
0:30la estructura de los genes. Vamos a
0:31empezar en la clase de hoy con los genes
0:33procariotas y a partir de mañana van a
0:37tener clase de vuelta con Alberto sobre
0:39gen eucariota. Acá vamos a ver
0:41regulación de la transcripción en
0:42procariotas y después van a ver
0:44regulación de laón en eucariotas.
0:49Empezamos
0:53con Procariotas, que es más simple,
0:56después pasamos a eucariotas que lo va a
0:57dar Alberto en las próximas tres clases.
1:03Bueno, esta es nuestra
1:09esta es nuestra digamos base. Sabemos un
1:13poco de la duplicación del ADN, sabemos
1:16de la traducción y hoy vamos a aprender,
1:19vamos a empezar a aprender un poco de la
1:20transcripción.
1:26¿Cuáles son las diferencias más
1:28evidentes entre los genes
1:33procariotas y eucariotas?
1:36Esto no me habla.
1:45Vamos a cambiar.
2:26Bien. Okay. Pasamos al láser.
2:31Bueno, acá tienen un esquemita sobre que
2:34compara procariotas con eucariotas.
2:37Los procariotas acá tienen el ADN doble
2:39cadena. Y lo que se dice, ¿qué pasa en
2:41los procariotas? es que los genes, que
2:44ahora vamos a ver exactamente qué son,
2:46son directamente del mismo tamaño que el
2:50mensajero
2:52que van a formar a partir de la
2:53transcripción y que luego se va a
2:55traducir en proteínas.
2:57En muchos casos vamos a ver que un mismo
2:59mensajero es capaz de codificar para más
3:02de una proteína.
3:04Sí.
3:07En eucariotas los genes son muchísimo
3:10más largos que el mensajero que luego se
3:12va a traducir en proteína en el
3:14citoplasma.
3:15Y lo que pasa es que entre medio de las
3:18regiones que terminan en el mensajero
3:20maduro, hay grandes trechos de ADN que
3:24luego pasan a ARN que tienen que ser
3:27procesados, eliminados para formar el
3:30ARN maduro. Sí. Estas regiones que están
3:32acá en amarillo, ¿sí? son los intrones y
3:36lo que queda en el mensajero maduro son
3:39solamente los exones que acá están
3:42representados en Celeste. Esto lo van a
3:44ver en extremo detalle con Alberto en
3:47las próximas clases. Sí, se descubrió en
3:501977
3:52que el mensajero original, el que se
3:55llama el transcripto primario, es
3:57muchísimo más largo que el mensajero
3:59maduro. El proceso que lleva a que se
4:03eliminen estos síndrones se llama slics.
4:08¿Sí?
4:10Y en el caso de eucariotas, un mensajero
4:15codifica para una única proteína. Un
4:18mensajero maduro codifica para una única
4:21proteína, digamos, casi siempre.
4:25¿Sí? En cambio, en Procariotas, como
4:27dije antes, es muy común que un mismo
4:29mensajero coifique para más de una.
4:40Vamos a ver,
4:42¿alguna pregunta? Está acá. Los genes de
4:44procayotas carecen de intronas.
4:46Los genes de procotas carecen de
4:48intronas.
4:50Los intronos son una propiedad de los
4:52eucariotos.
4:54¿Okay?
5:02Y la capacidad de codificar múltiples
5:04proteínas en un único mensajero es una
5:06propiedad de los procariotas, aunque hay
5:09algunas excepciones. Sí, pero en general
5:11podemos decir que los procariotas tienen
5:14un ADN que codifica para un mensajero
5:17más o menos del mismo tamaño que puede
5:19codificar para una o más proteínas. En
5:21los eucariotas el ADN es muchísimo más
5:24largo que el mensajero maduro. Y el
5:27proceso que lleva a convertir este
5:29tamaño muy grande en este pequeño es el
5:36que ser como secuencias no codificantes.
5:40Las los intrones son secuencias no
5:42codificantes porque no aparecen en el
5:45mensajero maduro que es el que tiene los
5:48codones para ser traducidos. Peroción
5:51del tipo o solamente está en medio
5:53los intronios lo van a ver en el detalle
5:54con el
5:55Okay.
6:02Los intrones a fines prácticos y están
6:05acá, están acá y no están más acá.
6:14Bueno, okay. Ahora entonces nos metemos
6:17en detalle en el gen Procariota.
6:22Esta slide es un poco tan poco pooco
6:25cargada y nos va a tomar un rato e
6:28explicarla, pero acá hay mucha de la
6:30información que tienen que aprender en
6:32la clase de hoy.
6:36Esta de acá es una doble hélice que es
6:38el ADN. Ven que acá está de cinco prima,
6:43¿sí? Y termina acá en tres prima y acá
6:45tiene tres primas. Va todo por acá, tres
6:47prima y termina acá el con cinco prima.
6:50Okay. Doble hélice va de cinco prima,
6:54tres primas de tres primas cinco prima,
6:55una cadena y la otra. Todos conmigo.
6:59Bien.
7:02Acá aparece el +1.
7:07Más uno es el nucleótido que en el
7:12mensajero es el primer nucleótido del
7:14mensajero.
7:16Acá empieza la transcripción.
7:19¿Quién hace la transcripción? La ARN
7:22polimerasa.
7:24En bacterias hay una única ARN
7:26polimerasa para todos los tipos de ARN
7:29que haya que transcribir.
7:32¿Sí? ¿Qué tipos de ARN conocen?
7:38mensajero y de transferencia. Después
7:41hay algunos otros pequeños mensajes que
7:44los vamos a ir viendo en la materia,
7:47¿okay? En bacterias todos los hace la
7:49ARN polimerasa bacteriana,
7:53¿okay? La ARN polimerasa se va sentar
7:56acá delante, ¿sí?, a la izquierda en
8:00este lugar, ¿sí? Y a partir de acá va a
8:02avanzar y va a transcribir.
8:06¿Cómo sabe la ARN polimerasa dónde
8:10ubicarse?
8:16Esta secuencia que está acá es una
8:18secuencia específica que es reconocida
8:21por la subunidad sigma de la ARN
8:25polimerasa. ¿Sí? Y es la que tiene
8:28afinidad por la polimerasa. Entonces, la
8:31polimeras que es este esta e proteína de
8:35cinco subunidades, ¿sí? 2 alfa, 2 beta y
8:39una sigma,
8:41se apoya en el ADN en estas secuencias
8:44que están acá.
8:46Sí, el lugar a donde se apoya la
8:48polimerasa y la zona aledina que
8:51controla cuán bien se puede unir la
8:53polimerasa ahí es lo que se llama
8:56promotor.
8:59El promotor es lo que dice dónde se va a
9:03transcribir el siguiente ejemplo.
9:06Si el promotor está acá, entonces la
9:09transcripción va a ocurrir hacia la
9:11derecha.
9:13Esa secuencia se llama secuencia
9:15promotora o
9:16Esta secuencia se llama secuencia
9:17promotora,
9:19¿sí? Y lo que transcribe es el
9:22mensajero. Y como ven acá está formado
9:25por estas secuencias que están acá.
9:28Vamos a ver esto que está acá. ¿Qué es?
9:33¿Qué es el ATG?
9:38En la clase de traducción,
9:41¿qué vieron que es el AG?
9:46El Aug. ¿Qué es el aguj?
9:51El codón de iniciación de la traducción
9:53codifica para metrionina. Cualquier
9:56metrionina va a necesitar una, pero el
9:58primero es el de iniciación. En el ADN
10:01esta U es una T.
10:03Entonces, el ATG es lo que en el ARN va
10:06a ser el codón de iniciación.
10:09¿Okay? Así que acá va a empezar la
10:11traducción en el mensajero.
10:13Para que empiece la traducción, ¿qué hay
10:16a la izquierda del auge?
10:20Un RBS. ¿Qué es el RBS?
10:26El sitio del Roson Binding, o sea, donde
10:30se une el riosoma. en bacterias.
10:33Entonces, el ribosoma se une en el RBS y
10:36empieza a traducir en la siguiente AUG
10:39que encuentre,
10:40que está a una distancia más o menos
10:42fija del RBS. ¿Correcto? Eso lo vieron
10:46con en la clase de traducción, ¿no?
10:49Pero una pregunta, esas frecuencias son
10:51para, o sea, en el ADN no tiene ninguna
10:53función, son para que cuando sean
10:55transcritas en el ADN se pueda unir.
10:58Esta está diciendo algo muy importante.
10:59Estas secuencias que hablamos del RBS y
11:01el AUG y después el UGA, que es el codón
11:04stop, tienen función en el ARN. En el
11:08ADN no tienen función, solo están. Las
11:12marco acá para tener una referencia.
11:15Como ven, acá tengo una TG y un TGA, que
11:18es un codón de stop. Después viene otro
11:20RBS con otro ATG y otro TAA. En este
11:24caso hay entonces dos
11:28regiones abiertas para traducirse. Sí.
11:32Dos open reading friends, dos marcos de
11:35lectura abiertos de acá hasta acá y de
11:38acá hasta acá, cada uno con su RDS.
11:41¿Okay? Entonces, ¿qué va a pasar cuando
11:43se hace el mensajero?
11:44El un ribosoma se pega acá, traduce esto
11:47y acá se despega y acá se pegará el
11:50mismo u otro ribosoma y traduce hasta
11:52acá, ¿no? Y se van a formar dos
11:55polipéptidos.
11:58Cada región de traducción se llama
12:01[carraspeo] cistronia.
12:05Así es acá la compañera ha dicho que los
12:08mensajeros de procariotas muchas veces
12:11son polisistrónicos porque tienen más de
12:14un sistrónico.
12:16Si tienen uno solo es monosistrónico, si
12:19tienen dos es bisistrónico.
12:24El cistrón lo podemos definir desde
12:26[carraspeo] un codón de inicio un codón
12:29de terminación,
12:30¿correcto? O sea, no hay sistemón de
12:33transación y que
12:36no hay traducción sin codón stop.
12:41Okay. Los mensajeros empiezan en un
12:43lugar y terminan, o sea, la traducción
12:45empieza en un lugar y termina en otro.
12:51Tendrían para considerar esto un
12:52Cistrón, ojo, hay que poner un RBS acá.
12:56Si no tuviera RBS, esto por más que
12:59fuera un marco de lectura abierto, no
13:01puede iniciar la traducción. Sí, no
13:04alcanza con que haya un UG y un UGA, una
13:07UG y un UGA para que sea eso un cistrón.
13:10Tiene que tener el sitio de unión del
13:12ribosoma para ser traducido. Es decir,
13:14tiene que ser una unidad traduccional.
13:17Si acá yo muto o saco directamente el
13:21RBS, esto no es más un cistrón.
13:24¿Están
13:26de acuerdo?
13:28¿Tienen una pregunta? ¿Qué es un citrón?
13:35Okay. Bien. Acá aparece esta caja negra
13:39que es una región en el ADN que en el
13:42mensajero va a tener una función que es
13:45la de terminar la transcripción. Acá hay
13:47una frecuencia que le va a decir a la
13:49polimerasa que tiene que despegarse del
13:51ADN que está transcribiendo.
13:56Entonces, ¿en dónde empieza la
13:58transcripción? En el + un. ¿Por qué
14:01empieza en el +1
14:04y no en el+2?
14:07Porque el má uno es el agujero enina.
14:11Ya nos estamos confundiendo.
14:13No nos confundamos. inicio de la
14:15traducción con inicio de la
14:17transcripción,
14:18pero o sea, loas en la traducción,
14:20pero la polimerasa no sabe que acá hay
14:22una ag unag.
14:25La polimerasa empieza a transcribir y es
14:27ignorante de todas las secuencias que
14:30haya acá que sean importantes en el
14:32mensajero, porque el mensajero todavía
14:34no existe. La polimerasia lo hace. La
14:37polimerasia no sabe que acá hay un RBS,
14:39una ATG, no sabe nada de esto, ni se da
14:42cuenta cuando transcribe la polimerasa.
14:45Lo único que hace es copia el ADN
14:48más un se referencia que es lo que viene
14:50exactamente
14:52un indica que el nucleótido que haya
14:56acá, que puede ser cualquiera de los
14:57cuatro nucleótidos posibles, si es el
15:00primero de acá.
15:08El +1 es el primer nucleótido que viene,
15:11que se transcrifiere acá. Ese es el + un
15:14pregunta es, ¿por qué ese es el +1 y no
15:16este es el +1 o este de acá es el +1?
15:18¿Cómo sabe la polimerasa? ¿Cuál es el
15:21primero que tiene que transcribir?
15:22Por el promotor.
15:23Por el promotor. La polimeraza se pega
15:26acá, queda unida acá. ¿Ven? está tocando
15:29en dos lugares estas líneas de acá.
15:33Estas líneas de acá quiere decir que no
15:34estoy escribiendo todo lo que hay ahí.
15:36Sí, entre acá y acá puede haber 100
15:40bases, 1000 bases, 200 bases, no las
15:43estoy marcando y pongo estas rayas como
15:45separadores. ¿Okay? Esto es común en los
15:47ejes cartesianos en matemática. Bueno,
15:49lo usamos acá también. Sí. Y acá también
15:51hay una distancia entre acá y acá. Este
15:53está a -10 y este está a -35.
15:57- 10 - 35 con referencia a qué?
16:00Al +1.
16:01Al +1 no hay cero. Sí, este es el +1 y
16:05el de al lado es el -1.
16:08Okay. Entonces, este está a 10
16:11nucleótidos del +1.
16:14Nosotros lo referimos al má un, pero en
16:16realidad la referencia es al revés. Esto
16:18está 10 después de este. La polimerasa
16:22se pega acá y empieza a transcribir 10
16:24nucleótidos después. haya lo que haya lo
16:28puedo cambiar y va a empezar en el mismo
16:29lugar.
16:31Okay.
16:33El promotor puede tener cualquier
16:34longitud o siempre es
16:38no. El promotor es la secuencia donde se
16:41pega la polimerasa. La polimerasa tiene
16:44un determinado tamaño.
16:46Una parte de la polimerasa agarra -35,
16:49la otra parte agarra -10 y entre medio
16:51hay un espacio que es este. Si lo
16:53agrando, ya la polimerasa no se agarra
16:56bien. O sea, siempre
16:58claro por la estructura de la polimeras.
17:12Vamos a hablar de eso a lo largo de la
17:13clase. Okay.
17:16Okay. Bien. Entonces, tenemos la RNA
17:18polimerasa bacteriana, que es un
17:20perutámero, ¿sí? Porque tiene cinco
17:22subunidades
17:24asociadas entre sí por uniones débiles.
17:27Decir que tiene o no tiene estructura
17:29cuaternaria.
17:31Bien, bien.
17:34Okay.
17:38Esto, los policistrones,
17:40el 63%
17:42de los genes en estilacoli son
17:45polisistrónicos.
17:48Eso quiere decir que todos los genes en
17:50bacterias son poliestrónicos.
17:53No. Y no. Okay. Entonces, cuando ustedes
17:56tienen que describir cómo son los pies
17:58bacterianos, pueden decir muchos son
18:00polisrónicos, pero no son todos
18:02polisónicos.
18:04¿Okay? Depende la especie, ¿cuántos hay?
18:08¿Okay?
18:10Y nadie me preguntó por qué son
18:12polisónicos.
18:15¿Por qué son polisrónicos?
18:23No, no entendía
18:27información
18:29más.
18:30Vos decís es más compacto.
18:33Claro, por eso
18:34ponerlos todos juntos
18:37si no le tengo que poner a cada uno un
18:38promotor, son un poquito más compactos.
18:42Pero un dato interesante que lo vamos a
18:44ver más adelante hoy es que los las
18:47proteínas codificadas en un policistrón
18:51están relacionadas
18:54están relacionadas funcionalmente.
18:58Por ejemplo, son las podrían ser las
19:00enzimas de la vía biosintética de la
19:03síntesis de criptofano. Para sintetizar
19:06criptofano se necesitan una serie de
19:08enzimas. No me acuerdo si eran cinco o
19:10siete enzimas.
19:11Okay, todas esas enzimas van juntas en
19:15un mismo policestrón. Entonces, cuando
19:17la célula necesita criptofano, hace un
19:20solo mensajero y de ahí salen todas las
19:23enzimas para sintetizar criptofano.
19:27Entonces se expresa coordinadamente
19:33un
19:35primer pérdido de la transcripción, pero
19:38es algo específico, es algo
19:41una proteína específico que indica que
19:43ahí empieza todo, ¿no? Sería el máu la
19:46polimeraza, como expliqué antes, la
19:49polimerasa se pone en el promotor y
19:51empieza a transcribir ahí y ahí es el
19:56distancia que hay. No puedo empezar ahí
19:59porque me queda muy lejos y tampoco acá
20:01muy cerca. Empiezo ahí y ese es el +s un
20:04queda definido por la posición de la
20:06polimeraza. Si yo esta la secuencia esta
20:09la corro para acá, el más uno va a estar
20:11acá.
20:13Okay.
20:15Pero una pregunta, la cuando la
20:18polimerta se engancha es como que ya
20:20queda para empezar a eh transcribir en+.
20:25Sí.
20:26Antes tienen que esperar una secuencia,
20:28¿no?
20:28Ah,
20:29la secuencia que reconoce es esta y
20:31empieza a transcribir a partir de donde
20:33pued
20:34y queda espacio por el tamaño de la pol
20:36por el tamaño de la polimerasa.
20:40Siempre es solo una
20:43siempre es solo una polimerasa. ¿Qué
20:45quiere decir?
20:50Ah,
20:51hay una única clase de polimeras, pero
20:54vos me estás preguntando, ¿puede empezar
20:56una polimeraza y antes que termine la
20:58otra empieza otra polimerasa?
21:01Sí,
21:02puede el A, la polimerasa empieza a
21:05transcribir y mientras empieza a
21:07transcribir este ADN ya está libre y
21:10puede unirse a otras polimeras y van en
21:13cadenas polimeras
21:15una trás de otra.
21:18Okay.
21:20Bien.
21:28Acá tenemos a la polimerasa. Sí. La
21:31polimerasa se unió en alguna parte en el
21:33promotor, ¿okay? Y empezó a transcribir.
21:38¿Qué copia la ARN polimideraza? ¿Cuál
21:42cadena copia? ¿La roja o la azul? Azul.
21:46¿Por
21:48qué?
21:49Porque la tiene información,
21:52la no tiene información,
21:53o sea, tiene el el complementario de la
21:56información, o sea, cuando copias por el
21:59complementario
22:00es debatible cuál es la información, son
22:02la misma, la una es la complementaria de
22:04la otra. La que sirve de molde es la que
22:07va de tres prima a cinco primas. Porque
22:10la RNA polimerasa, así como la ADN
22:12polimeras polimeriza de cinco prima a
22:16tres primas. Entonces el mensajero
22:17empieza en CCO prima y va hacia tres
22:19prima. Lo que tiene que copiar lo tiene
22:21que copiar entonces desde tres prima a
22:23cinco prima. ¿Estamos de acuerdo?
22:28Entonces la hebra roja se llama
22:30hebraficante,
22:32no porque tiene la información, sino
22:34porque es la que es igual al mensajero
22:36en secuencia. Obviamente una son es de
22:39oxis y la otra no es de oxi, pero las
22:42bases son las mismas.
22:45¿Están de acuerdo?
22:48La hebra roja se llama codificante, que
22:50es la que es igual al mensajero, pero la
22:52hebra que se copia es la molde.
22:56Si por alguna razón la hebra no
22:59codificante, que es la molde, tuviera
23:01una mutación que no tuviera estuviera
23:04representada en la hebra roja, entonces
23:07lo que va a copiar va a tener una
23:08mutación porque la hebra que se está
23:11copiando es la azul.
23:14Pero si hay unación en una otra también
23:17si se replicó, pero si no se replicó
23:19pues ahí no.
23:22Pero no podría estar nada de ellos.
23:25Podría tener una un un una región que no
23:28está ilidada justamente porque tiene una
23:30mutación, pero no se replicó todo.
23:34Ah, por ejemplo, le da el rayo V y hace
23:37que cambie la base y solo cambia de un
23:39lado y como
23:40todavía no se replicó, sí. ni se reparó
23:43ni nada y todavía estaba la notación muy
23:45lada.
23:46Okay.
23:48No entendí
23:50por qué copia la que va prima
23:53la r polimerasa como la en polimerasa
23:57polimeriza de cinco primas a tres
23:59primas. El siguiente nucleótido lo
24:02agarra del oxidrilo dos eh tres prima.
24:05¿Sí? Entonces,
24:08¿y qué hace? ¿Cómo sabe que copiar?
24:11porque está haciendo la base
24:12complementaria a la cadena de abajo y la
24:15cadena de abajo tiene que ser al revés
24:17antiparalela.
24:19Entonces no le queda otra que estar
24:21copiando la la azul.
24:24Okay,
24:27esto está claro para todos. Entonces,
24:30hebra codificante, hebra no codificante,
24:33¿sí? O hebra molde, ¿sí?
24:38La hebra roja también se llama la hebra
24:40consentido
24:42porque tiene el sentido, el tiene
24:45significado, tiene el sentido, ¿sí?, del
24:47mismo del mensajero. Y la hebra azul es
24:50la hebra antisentido,
24:52antisens en inglés.
24:55La hebra antisentido,
24:57¿qué propiedad tiene?
25:01es complementaria al mensajero.
25:05El mensajero podría hibridarse en la
25:08hebra antisentido porque es igual es la
25:11la versión complementaria de la azul. La
25:14polimerasa acaba de hacer la roja. Esta
25:16roja es complementaria con la azul. Si
25:19yo desnaturalizo el ADN y lo
25:22renaturalizo en presencia del ARN, el
25:24ARN podría hibridarse con la cadena
25:26azul. Correcto.
25:27Y eso represent
25:30se formaría un heteroduplex.
25:37No es una propiedad, una característica
25:39que después la vamos a tener en cuenta,
25:42¿sí? Para técnicas que vamos a ver en
25:44las clases deoría genética.
25:46Okay. Pero, ¿cómo podría hacer el ADN
25:49para la RN si la RN hay un asilo en el
25:53ADN?
25:55No hay ninguna importancia. En urasilo
25:57se invida con la desopóxida deina lo más
26:00bien.
26:02Sí. Igual que el la citina seida con la
26:06deoxiguanina
26:08las hibridaciones van perfectas.
26:13¿Esto está claro?
26:15Bien. Ahora vamos a ver otro concepto
26:19fundamental
26:20para toda la materia, es el concepto de
26:23río abajo y río arriba, que quizás ya lo
26:26saben. Sí,
26:28la posición relativa de una secuencia o
26:30un elemento genético respecto de otro.
26:33Sí,
26:35río arriba es más hacia más hacia el
26:39cinco prima
26:41y río abajo es más hacia el tres prima.
26:44Yo estoy ubicado acá. y digo, "Voy río
26:47arriba o río abajo en un gen, por
26:51ejemplo, que se está transcribiendo."
26:53Sí. Entonces, ahora lo vamos a ejercitar
26:55bastante. Se dice río arriba o upstream
26:58o aguas arriba o corrientes arriba. en
27:01inglés downstream y en y en castellano
27:05se tradujo río abajo, pero en algunos
27:07lados dicen aguas abajo o corrientes
27:09abajo. Todo quiere decir lo mismo, pero
27:12es una forma de hablar y saber en qué
27:14dirección estamos hablando.
27:18Vamos a ver acá
27:22el promotor está río arriba de el primer
27:25sistrón.
27:28¿Por qué? Porque está más hacia el CCO
27:30prima.
27:32Y el terminador está arriba o abajo de
27:34todos los cistrones
27:37porque está más hacia el tres prima.
27:40El cistrón dos está río abajo o río
27:42arriba respecto del cistrón uno.
27:45Río abajo. O sea, el río es la
27:49polimerasa fluyendo. ¿Para dónde va la
27:51polimerasa? va río abajo, es como un
27:54bote que va en el río, entonces va hacia
27:57tres primas la polimeraza, el promotor
28:01está río arriba, es donde empezó la
28:03polimeración.
28:05Okay,
28:09esto es muy importante entender porque
28:11vamos a empezar a hablar directamente de
28:13esa manera y ustedes tienen que entender
28:15qué es lo que decimos.
28:16Y bueno,
28:19una secuencia,
28:20no te la explique todavía.
28:21Ah.
28:25Okay, ahora vamos a ver cómo va la cómo
28:29es la transpción.
28:32Bueno,
28:35en la polimerasa, el ciclo de la ARN
28:37polimerasa bacteriana. Okay. La
28:42el tentámero se llama la holoenzima,
28:46¿sí? La enzima completa se une al ADN
28:50con baja afinidad, pero por cualquier
28:52ADN.
28:54En general se une al ADN y se mueve, se
28:57desliza, se va deslizando por el ADN
29:00unidimensionalmente, o sea, va para allá
29:02o va para allá hasta que se encuentra
29:05con la secuencia promotora
29:08que era esa -35 y -10. ¿Okay?
29:13Eso es lo que reconoce la seguridad
29:15sigma. La subunidad sigma, la función de
29:18la subunidad sigma es reconocer la
29:21secuencia -35 -10 y posicionar al
29:25tetrámero que es la polimerasa en sí
29:27misma.
29:29¿Okay?
29:30Esto son procariotas.
29:32Todo lo que estoy hablando es en
29:33procariotas. Sí. La transcripción es
29:37también de cinco prima tres prima en
29:38eucariotas, pero el mecanismo, la
29:40polinasa es distinta, los promotores son
29:42distintos, pero los conceptos están más
29:45o menos compartidos.
29:48¿Okay? Entonces se despega el factor
29:51sigma y cuando se despega lidera a la
29:54polimerasa para que empiece a
29:55transcribir. ¿Qué hace la polimerasa?
29:58Tiene que abrir el ADN. Sí, porque si no
30:01no puede transcribir.
30:03Y agarra una de las cadenas y la empieza
30:05a copiar. La va copiando y empieza a
30:08salir en rojo acá el mensajeo desde
30:11cinco primas hacia tres primas,
30:13obviamente. ¿Correcto?
30:16Va avanzando, va avanzando y a medida
30:17que avanza
30:19tiene que abrir, desenrollar el ADN y
30:21atrás el ADN se empieza a enrollar de
30:23vuelta porque ya pasó la polimeraza.
30:26Eh, perdón, la ADN polimerasa, ¿cómo
30:31cómo reconoce ese sector en el que se
30:33tiene que engancharse?
30:34¿Cómo reconoce
30:35al al sector en el que se tiene que
30:37enganchar de la secuencia
30:38la sigma? Sí, pero ¿con qué
30:41interacciones? débiles entre las bases
30:44con la secuencia esa que yo puse antes.
30:46Ahora vamos a hablar más de la secuencia
30:48de base [carraspeo]
30:49con la secuencia que el promotor,
30:51o sea, que también la
30:52acá está el promotor.
30:54Sí, pero mi pregunta es
30:57si la RN polimerasa también tiene partes
31:00de de ácido nucleico que hace que se
31:03unan por
31:04Ah,
31:06estas son interacciones débiles entre
31:07aminoácidos y nucleóidos. Okay. Y antes
31:11del promotor, ¿cómo reconoce el AN para
31:13comenzar a deslizar su?
31:15Porque la subunidad sigma se une
31:18específicamente estas secuencias, pero
31:20menos fuerte a cualquier
31:23del ADN.
31:24Okay. Se comienza a unir.
31:25Le gusta unirse al ADN general.
31:27Okay.
31:30Está transcribiendo. Sigue
31:31transcribiendo. Sigue transcribiendo
31:33hasta que termina de transcribir con la
31:35secuencia a determinación que no les
31:37conté todavía. Sí. y se despega. Cuando
31:40se despega, ¿qué pasa? Termino de
31:42transcribir. Suelta el ARN que está
31:44listo para ser traducido.
31:48Entre paréntesis. ¿Dónde ocurre la
31:50traducción en Procarietas?
31:54Eh,
31:56en donde está. Entonces, la traducción
31:59puede haber empezado acá. Ya no tiene
32:01que esperar a que termine la traducción.
32:04Eso ya lo sabían. La traducción es
32:06cotranscripcional.
32:08Sí. Entonces, acá ya se viene
32:09transcribiendo y vienen los ribosomas y
32:12acá también se traduce hasta que el RNA
32:15se degrada. Los RNA tienen una vida
32:17media en general corta. Sí se degradan
32:20apenas se termina la transcripción, al
32:22ratito el mensajero desaparece.
32:27Varía. Algunos mensajeros dura más,
32:29algunos mensajeros dura menos. Bueno, la
32:31polimerasa se despega. Cuando se despega
32:34se le une otra subunidad sigma y empieza
32:36todo de vuelta. se vuelven a unir al ADN
32:38y buscan promotores.
32:40O sea, que la enzima es reutilizable.
32:43La enzima. Las enzimas son siempre
32:46reutilizables. Todas las enzimas son
32:48reutilizables. Parte de la definición de
32:50enzima es ser reutilizable.
32:54Okay. Por ahí seguro lo dijo Alejandra,
32:56pero por ahí se olvidaron.
32:58Eh, ¿quiénes tienen que la
33:02seiera para poder transcribir que está
33:06buscando la que está necesitando?
33:09Cualquier cosa se une a cualquier cosa,
33:11pero solo se une fuertemente a la región
33:14del promotor.
33:16Acá tiene afinidad para unirse acá.
33:20Pero, ¿cómo hace para adherirse al
33:22promotor que está necesitando? No,
33:24cualquier otro. Se une a todos. está
33:28transfiriendo, está
33:29hay muchas polimeras. Hay muchas
33:31polimeras en la célula. Algunas se pegan
33:33en un promotor, algunas otras a otra.
33:36Okay. Estás lleno de polimerazas.
33:39Estás sintetizando todo el tiempo todo
33:41la célula está todo el tiempo
33:44sintetizando mensajeros. Todos los
33:46mensajeros posibles, ¿no? ¿Por qué?
33:49Porque hay regulación de la expresión.
33:51Los genes no se transcriben todos el
33:54tiempo. Hay algunos que se transcriben
33:56todo el tiempo y hay otros que se
33:58transcriben solo en determinadas
34:00circunstancias. En el ejemplo que te di
34:02antes de un triptofano, solo se
34:04sintetiza triptofano cuando la célula no
34:06tiene de afuera triptofano para comer,
34:09¿okay?
34:12Y eso es justamente lo que vamos a ver
34:13inmediatamente después.
34:16Entonces tenemos una polimeraza que va
34:20unida al ADN por todos lados. El la
34:22subunidad sigma reconoce los promotores
34:26y empieza a transcribir si puede.
34:30Okay, ahora vamos a ver qué condiciones
34:32tiene que tener para transcribir. Y
34:33cuando transcribe pasa esto de acá, abre
34:35el ADN, polimeriza y llega el terminador
34:38y se despega. Okay. Hay muchas
34:41subunidades sigma
34:43distintas.
34:45Cada una tiene afinidad por distintos
34:49tipo de promotor.
34:51En la subunidad de los genes
34:54constitutivos. ¿Saben lo que son los
34:56genes constitutivos?
34:58Constitutivos son los genes que la
35:01célula hace siempre. De las cosas
35:03necesarias para hacer para funcionar,
35:06¿sí? Son los genes constitutivos o
35:08houseeping.
35:10Housekeeping son los genes que
35:12necesitamos para mantener la casa.
35:15Okay. Entonces, esos genes se
35:18transcriben todo el tiempo y son los
35:20genes reconocidos por la sumunidad sigma
35:2370.
35:25Después hay otros tipos de genes que son
35:26solamente reconocidos, tienen promotores
35:28distintos que son reconocidos por otra
35:30sigma.
35:32¿Okay?
35:34Entonces, la sigma es la que le da la
35:37especificidad de qué promotores va a
35:39transcribir la poligrasa. Pero el
35:41tetrámero este es el mismo para todos.
35:45Okay.
35:46Los genes, el nombre español
35:49constitutivos,
35:51que son los que constituyen a la
35:53células.
35:55Cuando escuchen, van a escuchar en la
35:57materia esta bastante hablar de genes
35:59constitutivos. Son los que se
36:01transcriben todo el tiempo.
36:05A diferencia de los genes inducibles,
36:08que son los que se inducen en alguna
36:10condición. Inducir quiere decir iniciar
36:13la transcripción,
36:15¿sí? Que son necesarios solo en algunas
36:18condiciones y se transcriben entonces en
36:21esas condiciones.
36:22Son los regulables que pueden ser
36:24inducibles o reprimibles. Reprimibles es
36:28que se vienen haciendo y yo hay una
36:30condición en la cual la tengo que
36:31apagar.
36:33inducibles son los que no se hacen nunca
36:35hasta que aparece la condición que tengo
36:37que empezar a transcribir. Okay.
36:42Entonces están los constitutivos y los
36:44inducibles
36:45y los cuales
36:47inducibles o regulables
36:51que puede ser inducibles o reprimibles.
37:00Okay.
37:03Entonces, ya que hablamos de la sigma
37:0570, la sigma 70
37:09sí reconoce, habíamos puesto este
37:12promotor, ¿sí?
37:15Este promotor tiene esta determinada
37:17secuencia.
37:20¿Saben lo que es una secuencia consenso?
37:23Bueno, otra cosa que hay que aprender
37:25hoy, las secuencias consenso
37:29aparecen cuando en realidad una proteína
37:32o alguna entidad reconoce una variedad
37:36de secuencias similares.
37:39No es necesario que sea exactamente t a
37:42ac
37:44gt para que se pegue la subunidad sigma
37:4770.
37:49Por ahí se pega igual si cambiamos esta
37:52C por una A, pero mientras se preserve
37:55todo lo demás. Sí, es decir, que hay una
37:58variedad de secuencias parecidas que son
38:02todas reconocidas con distinta afinidad
38:05porque los puentes de hidrógeno que van
38:06a poder hacer no van a ser idénticos.
38:09¿Si? Y conforman las secuencias
38:11consenso. La palabra consenso viene de
38:14que es
38:17la más común. La secuencia consenso es
38:20la secuencia de todas las posibles la
38:22más frecuente.
38:24Ahora vamos a ver en detalle cómo puede
38:26ser eso.
38:29Entonces, si yo me fijo, por ejemplo,
38:32300 promotores de coli, todos
38:34controlados por Sigma 70, ¿qué quiere
38:37decir? Agar agarro 300 promotores que yo
38:40sé que son todos transcritos
38:42por la polimerasa cuando está unida a la
38:44sigma 70 y me fijo sus secuencias en -35
38:48y -10.
38:50Veo que hay una cosa es muy común.
38:52La mayor parte, el casi el 75% en la
38:55primera posición tiene una T,
38:58en la segunda posición una T, en la
39:01tercera posición una G,
39:03después una A, una C, una A y después
39:06hay unas secuencias variables estas que
39:08están acá que son entre 15 y 19
39:11nucleótidos, que es eso que decíamos de
39:13cuán separada está de una pata de la
39:15otra.
39:17Y después viene la secuencia de la
39:19segunda parte, que la más común es una
39:22T, después una una A, una T, una A, una
39:26A y una T. Es decir, ¿entienden este
39:30gráfico?
39:31De los 300, me fijo la primera base,
39:34¿cuál es? Y la mayor parte T. Y después
39:36vienen estas otras bases que quedaron
39:38acá mucho menos representadas.
39:40Y con esto me armo la secuencia
39:42consenso. Sí. Si todos los promotores
39:46votaran, ¿qué van a votar en la primera
39:48base? Bueno, votante T y se forma un
39:51consenso entre todos los promotores.
39:56Sí quiere decir que la secuencia no
39:58tiene que ser perfecta,
40:01no tiene que ser el consenso,
40:02evidentemente, porque en algunos casos
40:03los promotores usan otras bases.
40:07Eso, ¿qué va a cambiar? va a cambiar con
40:09qué afinidad se va a unir a cada una de
40:12los promotores. Entonces, va a haber
40:13promotores más fuertes y promotores más
40:17débiles.
40:18Entonces, estoy introduciendo otro
40:21concepto más. Los promotores pueden ser
40:23fuertes o débiles o directamente ser tan
40:28malos que no los consideramos
40:29promotores.
40:32¿Qué quiere decir eso? que si la
40:34polimerasa
40:36se puede unir bien, va a poder
40:38transcribir bien. Sí, va a ser más
40:42frecuente que el los genes que vienen
40:45después, el policistrón, se haga o no se
40:49haga, se transcriba o no se transcriba.
40:54Si la secuencia es muy a fin, va a haber
40:56mucha transcripción, se va a decir que
40:58el promotor es fuerte. Si la secuencia
41:01es poco a fin, va a haber poca
41:02transcripción y entonces el promotor es
41:04débil.
41:08Ahora
41:10sí, esto es parecido a
41:17al que la proteínas eso de que eh
41:23códigos genéticos pueden variar
41:27una letra eh
41:29Sí. Es parecido,
41:32¿se acuerdan que hay varios codones para
41:34el mismo el transfer? Un mismo transfer
41:37puede unirse a más de un codón. Sí, la
41:40tercera base
41:43puede cambiar.
41:44Es parecido, no es lo mismo, pero es
41:46parecido.
41:49Hay una
41:52Sí, les voy a decir esto. Casi en todos
41:56los casos de proteínas que se unen a al
41:59ADN reconocen una secuencia que puede
42:03variar un poco. Siempre hay una
42:05secuencia con senso. Vamos a ver cuando
42:08veamos ingeniería genética, las enzimas
42:11de restricción no son así. reconocen una
42:14secuencia fija, esa, esa y ninguna otra.
42:19¿Okay? Pero todas las proteínas que se
42:22unen al ADN reconocen una secuencia con
42:25senso más o menos estricta. En algunos
42:28casos es poco estricta, acepta mucha
42:31variabilidad y en otros casos es más
42:33estricta y tiene que ser algunas y no
42:36pueden cambiar.
42:37Sí, la solución no necesariamente la
42:40masa.
42:42Acá me preguntan, la secuencia consenso
42:45no necesariamente es la masa F, ¿no?
42:49¿Qué opinan?
42:53La secuencia cono es una, en este caso
42:56es esta que está acá abajo.
42:59Esa secuencia es la masa fin,
43:03pero más o menos.
43:04Sí. O sea, no depende según la subilidad
43:07sigma.
43:08Para esta subunidad sigma, esta
43:10secuencia es la masa fino
43:13fuerte.
43:14Yo les dije, no sabemos si ese producto
43:16es fuerte. ¿Qué sabemos de esto? ¿Qué
43:18qué quiere decir que la T acá está en
43:2073%?
43:23Que de 300 promotores, el 73% tenían una
43:26T. Quiere decir que es la mása
43:30es la más común.
43:32La más común puede ser la más fácil o
43:34puede no ser la más fácil. Por ejemplo,
43:36no necesariamente incluso los promotores
43:38más fuertes son los más afines.
43:42Okay. Yo obviamente si no se puede unir
43:44no se puede transcribir. Estamos de
43:45acuerdo ahí. Si la polimerasa no se
43:48puede unir no va a funcionar el
43:50promotor.
43:52Ahora se puede unir, se puede unir eso
43:54más o fuerte o menos fuerte. Si se une
43:57demasiado fuerte, podría pasar que no
43:59pueda empezar porque queda unida de tan
44:02fuerte que está. Sí, la sigma se tiene
44:06que despegar para poder transcribir, ¿se
44:08acuerdan?
44:10Se tiene que despegar la sigma. Si tiene
44:13excesiva afinidad, por ahí no se puede
44:15despegar bien y entonces la
44:17transcripción no puede pensar.
44:19Esto es como un ejemplo en general para
44:21decirles no necesariamente lo más afí es
44:25el consenso. El consenso es el más
44:28común. Si lo más común es que sea muy
44:31afil, entonces será lo más afil.
44:35Pero existen consensos según los tipo
44:38deidad.
44:40Cada proteína o cada molécula que se une
44:43a otra hace fuentes de hidrógeno.
44:45¿Cuáles son los que mejor vienen?
44:48Eso va a determinar cuál es el consenso.
44:51Consenso varía según
44:54la subunidad sigma. La subunidad sigma
44:5654 tiene otro consenso justamente porque
45:01son promotores que tienen que ser
45:03reconocidos por la Sigma 54 y no por la
45:06Sigma 70.
45:08¿Say
45:10entienden? concepto de consenso. El
45:13consenso no tiene por qué ser el más
45:15afín ni el mejor, sino que es el más
45:18común.
45:21Debe haber alguna secuencia que es la
45:22más afí, pero por ahí no es el consenso
45:25o por ahí sí es el consenso. Yo no lo
45:27sé. Se supone que el consenso conviene
45:29para loses construtivos. Este es el
45:32consenso de sigma 70 para los genes
45:35constructivos. Los genes, los genes que
45:38son regulables de otra manera tienen
45:41otro consenso.
45:43El consenso es una propiedad de la
45:45interacción.
45:47Si una proteína, en este caso que se une
45:50al ADN, sí se une 300 lugares, bueno, ¿a
45:54qué lugares se une? ¿Qué es lo más
45:55común? Y eso decir consenso. El consenso
45:59también se puede aplicar entre
46:00proteínas. Una proteína reconoce a otra
46:02o a una variedad de proteínas. ¿A dónde
46:06se une? Y se unen unas secuencias
46:07consensos. ¿Cuál es el consenso?
46:10Necesitamos el consenso haciendo la
46:12estadística.
46:13Si un conductor que es muy afí y
46:17entonces no dice que la dice a
46:20transcribir eh no podemos llamarlo
46:23promotor fuerte, pero tampoco lo
46:25podríamos llamar
46:26llamar por motor medio veremos.
46:30Igual no te no es necesariamente de más
46:33fácil travel a la a la salida. Hay que
46:36ver
46:45las uniones
46:48acá la sigma reconoce el promotor. Para
46:51que empiece la se tiene que despegar.
46:53Despegar quiere decir romper esas
46:56uniones débiles. Si son muy fuertes le
46:58va a costar más.
47:03Si el si es muy así y no se produce la
47:07transigue llamando promotor.
47:11Si no funciona de promotor no es
47:13promotor.
47:14El promotor es algo que yo lo pongo
47:17adelante de una de un policist y sale la
47:21polinas. Si no pasa, no es un promotor.
47:23Claro. O sea, que los ninguno de los
47:25extremos va a resultar en un promotor.
47:28Ninguno de los Yo no te dije igual que
47:30el más fin no funciona. Dije que por ahí
47:32no funciona.
47:35Pero si no se puede desenganchar sigma,
47:37no se puede.
47:38Si no se pudiera desenganchar nunca.
47:40Exacto. Si se puede desenganchar menos
47:42va a andar igual.
47:43Claro.
47:44Bien, seguimos.
47:56Okay. Bueno, los consensos se pueden
47:59representar con esto que se llama logo,
48:02¿okay? Que tiene el tamaño de la letra
48:05proporcional a la frecuencia con la que
48:06aparece.
48:08Entonces, cuando ustedes ven un logo de
48:10un consenso, ya pueden saber qué, cuál
48:13serían las nucleótidos que tendríamos
48:15que poner si queremos poner un promotor
48:18que sea como el consenso.
48:20Okay.
48:26Bueno, este en particular es el promotor
48:30del Operón L que vamos a ver en un rato.
48:34Ah, lo que no les dije, estaba escrito
48:35en un slide, pero no los dije. La
48:37combinación de promotor y policistrón,
48:41todo junto se llama Operón.
48:47Operón, que sería el promotor con todos
48:49los genes que controla del poestrón.
48:53Okay. Este es el promotor en particular
48:56del del operón lac. Sí, que fíjense no
49:00es consenso.
49:01¿Se dieron cuenta? TT AC no es TT. Acá
49:07tiene una G, debería ser una G, pero hay
49:10una T.
49:13Quiere decir que no es el consenso
49:16perfecto. Lo mismo acá. T GTT T GTT. No
49:21hay AAT. Estas secuencias no son
49:23perfectas. ¿Qué quiere decir? ¿Que la
49:25polimerasa acá se va a unir muy bien o
49:29no tan tan bien?
49:32H bueno, ido diciendo, no tan tamb tan
49:34también.
49:37Okay.
49:40Acá tenemos un esquema que representa a
49:43la polimerasa con sus sitios de
49:46distintas tipos de actividad. Sí,
49:49esta la polimeraza acá está en gris y
49:52vemos qué está haciendo. Acá está la
49:54cadena que está siendo transcripta. Sí,
49:59rojo. Acá está.
50:01el lugar [carraspeo] donde está
50:03desenrollada la doble hélice. Acá viene
50:06la polimeras, entonces copiando.
50:08Okay,
50:11este es el sitio desenrollado. Acá hay
50:13una reión corta donde está hibridado,
50:16fíjense, RNA con ADN. Acá se está, hay
50:19un heterodufflex cortito, como hablamos
50:22antes. ¿Sí? ¿Por qué? Porque el ARN es
50:25complementario con el ADN que acaba de
50:27ser transisto. Por algo fue transisto.
50:30Sí. Y después se separa y acá se
50:33reenrolla la doble, se atrás de la
50:35polimeraza, desenrolla, polimeriza,
50:39heteroduplex, se reenrolla.
50:43Una pregunta sobre eso. Eh, laa es capaz
50:47de abrir la doble,
50:49¿no? Eh, pero necesitaba de algún tipo
50:52de para atrás para que no se rompe.
50:57No, esta no.
50:59No
50:59me parece que no.
51:00¿Y cómo liber la tensón?
51:04Me parece que es con la misma energía de
51:07la polimerización, pero no estoy seguro.
51:16Okay.
51:20A ver si puede ser más chiquito.
51:54para Okay.
52:03Bueno, acá tenemos el promotor, ¿sí? Con
52:06las secuencias -10 y -10 y -35. Acá está
52:10marcado el sitio +s1 de transcripción.
52:13¿Sí? Entonces, la transcripción va a ir
52:14para allá. Y acá tenemos al sigue el
52:17ADN. Raya, raya. Y este es el final del
52:21genas
52:22secuencias que estaban marcadas en el
52:24anterior en negro, que son las
52:26secuencias de terminación.
52:28Okay,
52:31vamos a ver cómo funcionan.
52:35Se transcribe y aparece el ARN. Okay.
52:40Estas secuencias de acá
52:42tienen
52:46repeticiones
52:48invertidas. Fíjense que esta G y esta C
52:51se pueden hibridar. Esta C G G G G U U A
52:57G C. Estas secuencias son
53:01complementarias
53:04y estas secuencias de acá también son
53:06complementarias.
53:08Como el ARN es simple cadena,
53:11¿qué va a pasar?
53:14Se van a hibridar. Van a formar estas
53:17horquillas.
53:20con un loop. Esto está hibridado acá,
53:22tiene un lazo y acá hay otro. Estas
53:25secuencias de acá son las que hacen que
53:28la polimerasa se despegue.
53:30Dependiendo de cada gen pueden tener una
53:33sola o dos o tres de estas secuencias
53:37que van a hacer que la polimerasa se
53:38despegue. Si yo saco esto de acá, la
53:42polimerasa va a seguir transcribiendo
53:44hasta que encuentre algún otro look que
53:47lo haga despedarse.
53:49¿Okay? Entonces, cuando yo construyo, si
53:52quiero construirme un gen bacteriano, le
53:55tengo que poner el promotor, le tengo
53:57que poner un RBS en algún lado para que
53:59empiece a traducir en el ATG, en el AUG,
54:02digamos, ¿no? En la
54:05en el ARN tengo que poner los marcos de
54:07lectura abiertos y al final tengo que
54:10poner un terminador de la transcripción
54:11para que la polerasa se dese
54:16aunque el terminador de transcripción se
54:18supone,
54:19o sea, el terminador de transpción que
54:21terminador de estado porque si no no
54:27el terminador de transcripción solamente
54:29termina la transcripción el terminador
54:32de La transcripción termina la
54:33transcripción.
54:34CL por eso, porque me refiero si
54:36sobrevive, o sea, digo, si pasa del ADN
54:39al mensajero significa que la polimerasa
54:42de todas formas no interactúa con eso de
54:46esto interactúa con la polimerasa y la
54:49despega.
54:50Claro,
54:52hermadas.
54:53La hermidad por tiene que leerlo y
54:55cuando termine
54:56no le lee le molesta esto y se despega.
55:00Claro,
55:01claro.
55:02Lo transcribe, lo forma,
55:05está adelante y atrás se forma el y eso
55:08es lo que la def. Claro, cuál es mismo,
55:09o sea, sí o sí lo va a terminar de leer,
55:12no es que apenas se lo encuentra,
55:15tiene que transcribirlo
55:16y ahí
55:17porque si no no existe. Esto solo existe
55:20luego de que la polimerasa lo hizo. La
55:23polimerasa sintetiza esto,
55:26o sea, el hecho de que la enzima se
55:28suelte es la tensión que genera la
55:30confundariedad de la transición.
55:32Sí, esto de alguna manera expulsa la
55:34poligrafis.
55:38Okay.
55:45No puede ser una, dos, a veces hay tres,
55:48depende del gén. No tiene por qué hacer
55:49dos. En este caso, en este dibujo, que
55:52es el caso del mensajero del operón la
55:55tiene dos, pero puede ser uno solo.
55:59Entonces lo copias de lado cuando se for
56:02sea.
56:03Sí.
56:04Cuando hay más unador, después ya eh se
56:08vuelve a unir y vuelve a terminar el
56:10No, no, no. Acá se despega y listo.
56:13Ah, okay.
56:13Le están pasamos acá. Acá se despega
56:18hasta que no se le una a otro sigma no
56:20puede empezarle vuelta.
56:23Estamos hablando de este paso de acá.
56:25Ahora se despega, se tiene que unir otro
56:28sigma y vuelve al ciclo. Okay.
56:48El codón de terminación no tiene nada
56:50que ver con esto. Obviamente tiene que
56:51estar antes porque si la polincia se
56:53despega antes de que esté el codón de
56:55terminación
56:58no no andar la está bien. El codón de
57:01terminación es de la traducción, estará
57:03por acá. Y como dijimos, si es un
57:06policistr a tres codones de terminación
57:09y esto pasa después.
57:18A ver, escúchenme.
57:23Esta zona de acá es la zona traducida,
57:27¿correcto?
57:29La zona que está río arriba del primer
57:33ATG.
57:35¿Cómo se llama?
57:37Zona CCO prima no traducida. Cinco prima
57:41UTR.
57:43Untranslated region. Sí. Entonces,
57:47hay una región CCO prima UTR que, ¿dónde
57:50empieza,
57:54dónde empieza?
57:58C prima UTR
58:01en elo un en el más un
58:06antes no hay nada.
58:09Correcto.
58:12Pero no
58:14acá un no es el principio de la zona
58:17codificada de
58:22Okay. El uno es este de acá, como
58:25empezamos al principio de la clase.
58:27Y el primer el aminoácido es el AUG.
58:32El más uno es este. Este es el primer
58:34aminoácido, se pone acá. Sí,
58:36pero el más uno del mensajero es este.
58:39Sí,
58:41pero de la zona no
58:42la zona no traducida es esta de acá para
58:46allá.
58:48Esto de acá es el 5 prima UTR, la zona
58:52CCO prima no traducida.
58:57O sea, es antes del ribosoma.
59:00No, el ribosoma B inside no está
59:02traducido, es parte del UTR. Todo esto,
59:04todo lo que está río arriba de la a de
59:08la UG es el C prima.
59:12Entiend
59:18río abajo del de la A o del último
59:21nucleótido de el último codón stop es la
59:25zona tres prima UTR.
59:28La zona tres prima no traducida.
59:32parte de la zona.
59:36¿Cómo
59:38este que está acá?
59:40Esta es la zona traducida.
59:41Claro.
59:45Esto es arriba, arriba. ¿Qué tien?
59:48Cuando uno dice arriba, arriba, tienes
59:49que decir de algo. Es una cosa relativa.
59:52Esto está arriba arriba de lo que está
59:54arriba abajo.
1:00:00Rajero.
1:00:03Todo esto es el ARN mensajero. El ARN
1:00:06mensajero tiene una zona cinco prima no
1:00:09traducida y una zona tres prima no
1:00:11traducida.
1:00:13Eso es lo que quería decir.
1:00:15La zona 5 prima no traducida es ru
1:00:20y la zona tres prima no traducida es la
1:00:23lo que viene después del último sol.
1:00:30No, en la zona no traducida también
1:00:32porque esto de acá tampoco se traduce,
1:00:35pero no es la cinco prima.
1:00:37Okay,
1:00:44todo hasta el último nucleótio.
1:00:48Okay.
1:00:59¿Con quién
1:01:01se puede
1:01:03complementar?
1:01:05Eso es lo que hace desplegar a la
1:01:06poligra
1:01:18después nada.
1:01:20Se despega la polimerasa y listo. Están
1:01:23ahí,
1:01:25siguen ahí.
1:01:27Y acá está el mensajero este que se va a
1:01:28traducir con la proteín, con el
1:01:30ribosoma.
1:01:32No hay nada más que entender por ahora.
1:01:38Bueno, acá tenemos, supongamos que
1:01:42tenemos este genoma
1:01:44circular de una bacteria.
1:01:49Esto va interesar.
1:01:51Me parece que interesar.
1:01:54Okay. DNA circular. Y acá tenemos tres
1:01:57genes, por ejemplo, ¿no? Una bacteria
1:01:59por ahí tiene 4000 genes. Acá tenemos
1:02:02tres.
1:02:04Tenemos el gen
1:02:06que la flecha esta me indica, está
1:02:09puesta en el+ un y apunta para allá.
1:02:11¿Qué quiere decir?
1:02:16¿Para dónde se transcribe? Para allá.
1:02:18Entonces, ¿dónde está el promotor?
1:02:21Acá arriba. Esta zona de acá es el
1:02:24promotor del Gen1.
1:02:27Está bien.
1:02:29Y este
1:02:31la zona está acá. Acá tiene el
1:02:33terminador del gen 1 y acá está el
1:02:34promotor de el gen 2 que va para allá
1:02:38y tiene su secuencia terminadora.
1:02:40Fíjense el Gen 3. El Gen 3 tiene va para
1:02:43allá,
1:02:45tiene el promotor entonces acá.
1:02:48Entonces se transcribe para allá. ¿Está
1:02:50bien? Y el Gen4 tiene el promotor para
1:02:53allá.
1:02:56Okay. Entonces, el promotor depende de
1:02:59cómo está puesto, dónde está el 35, está
1:03:02así o está así, para dónde va a
1:03:04transcribir.
1:03:06Entonces, si el promotor está para allá,
1:03:08la hebra codificante es esta. Si el
1:03:11promotor está para allá, la hebra
1:03:12codificante es esta. Si el promotor está
1:03:14para allá, la hebra codificante es esta.
1:03:17Es decir, que lo que para un gen una
1:03:20hebra es la hebra codificante, para otro
1:03:22puede ser la hebra molde.
1:03:25Los promotores pueden estar puestos para
1:03:27allá o pueden estar puestos para allá.
1:03:29No es que siempre la cadena de arriba es
1:03:32la que es la codificante. Depende para
1:03:34dónde apunta el promotor,
1:03:35pero el promotor no está presente en
1:03:38lamb cadenas cadenas,
1:03:41pero tiene direccionalidad.
1:03:43Claro, pero me refiero
1:03:45no es que un gen tiene una hebra queica,
1:03:48sino que puede ser cualquiera de las
1:03:49fotos que el promotor técnicamente
1:03:53no no está mal.
1:03:56El promotor tiene -35 y -10, entonces va
1:04:00para transcribir para allá. La pola se
1:04:02pone así.
1:04:04Si se pone así transcribe para allá.
1:04:06Ah,
1:04:09okay. Entonces, la hebra de abajo va a
1:04:11ser la hebra molde y la hebra de arriba
1:04:12la codificante. Ahora, si me pongo así,
1:04:15la otra va a ser la hebra codificante y
1:04:17el otro mol. Sí, voy para el otro lado.
1:04:22¿Está bien?
1:04:24Bien,
1:04:26bien. Ahora vamos a hablar sobre
1:04:28regulación de la expresión génica en
1:04:30procariotas.
1:04:31¿Okay? Vamos a empezar hablando del
1:04:33operon lap y vamos a ver cuán lejos
1:04:35llegamos en esta clase. Lo que quieren
1:04:37recordar lo daré en otra clase si no
1:04:39tenemos tiempo.
1:04:43Okay. Entonces vamos a hablar de el
1:04:47operón lac que involucra a estas dos
1:04:49personas, a Jacob y a Monod, sí, que
1:04:53trabajaban con Andrés Wolf, que hizo
1:04:56otras cosas también relacionadas. Esta
1:04:58gente en 1965
1:05:01recibieron el premio Nobel por
1:05:03regulación de la expresión génica. Son
1:05:05los que descubrieron que los genes se
1:05:08podían inducir y cómo pasaba eso.
1:05:12Sí, ellos eh lo vamos a ver ahora es lo
1:05:16que se llamó la inducción enzimática.
1:05:18¿Cómo hacemos para que se sinteticen
1:05:19enzimas
1:05:21que no estaban presentes?
1:05:24Y después ellos dos a su vez recibieron
1:05:26en simultáneo el Premio Nobel por los
1:05:28estudios sobre el bacteriófago lambda,
1:05:31un fago, un bacteriófago de escritos que
1:05:35no vamos a ver ahora.
1:05:39Bueno, los tres trabajaban en el
1:05:41Instituto Pascer de París en Francia.
1:05:44Sí.
1:05:50Jacob, eh Monod, empezó sus trabajos en
1:05:54durante la Segunda Guerra Mundial. Sí,
1:05:58él participaba en la resistencia contra
1:06:01los nazis y cuando tenía tiempo iba al
1:06:05Instituto Paster de París para alargar
1:06:07cultivos de bacterias y estudiar, hacía
1:06:09su tesis doctoral en ese momento. Sí. Él
1:06:13después eh tuvo un cargo eh creo que fue
1:06:17el jefe de la resistencia francesa. Sí.
1:06:21Y después eh participó en los el
1:06:24planeamiento del desembarco Normandía en
1:06:261944,
1:06:28¿sí? Cuando los aliados volvieron a
1:06:31Francia, ¿sí? Para luchar contra los
1:06:34nazis. Y eh Jacob era más joven y estaba
1:06:38en el ejército también en la resistencia
1:06:41y fue herido en África.
1:06:46Él quería ser cirujano, pero por las
1:06:47heridas que tuvo no lo podía hacer.
1:06:49Después trató de ser periodista
1:06:51y finalmente decidió que por ahí podía
1:06:54ser científico. Y bueno, ahí fue donde
1:06:58se conocieron en el instituto de en los
1:07:0150 y algo en el Instituto Paster de
1:07:03París y hicieron estos trabajos que
1:07:05vamos a hablar un poco ahora, son los
1:07:07que abrieron el camino para entender
1:07:09cómo funcionaba una expresión enativas.
1:07:15Entonces, ¿qué hacía Monod? Monod lo que
1:07:18hacía era cultivar bacterias. ¿Se
1:07:20acuerdan que la primera clase hablamos
1:07:22de que se podía medir la densidad óptica
1:07:24de cuántas bacterias hay en un cultivo,
1:07:28¿sí? Y a lo largo del tiempo las crecía
1:07:31con distintas mezclas de azúcares.
1:07:34¿Okay? Las mezclaba, por ejemplo,
1:07:37glucosa y manosa, que son dos azúcaras.
1:07:40¿Qué va a pasar? que veía que crece,
1:07:41crece, crece y acá arriba se detiene.
1:07:44¿Por qué dijimos que se detenía el
1:07:46crecimiento acá?
1:07:49Porque se acabó el alimento. Okay. Se le
1:07:52acabó el azúcar, listo. Cuando mezclaba
1:07:54glucosa y fructosa, lo mismo. Cuando
1:07:58mezclaba glucosa y galactosa, empezaba a
1:08:00aparecer algo raro. Fíjense en el
1:08:03detalle en el que estaba prestando
1:08:04atención.
1:08:06aparecía este hombrito.
1:08:11Cuando ponía glucosa i xilosa aparecía
1:08:15no solo un hombrito, sino que había una
1:08:16especie de región donde no crecía nada y
1:08:20recién después empezaba a crecer.
1:08:23Entluosa arabinosa, otro glucosa
1:08:25ramnosa. Y acá tenemos lo que vamos a
1:08:28estudiar ahora, lo que vamos a ver
1:08:29ahora. Cuando mezclaban glucosa y
1:08:31lactosa, aparecía esta fase que se llama
1:08:34fase lago, ¿sí? Que está separando las
1:08:38dos zonas de crecimiento. Acá se usa la
1:08:41glucosa y recién acá se usa la lactosa.
1:08:45¿Por qué pasa esto? ¿Por qué la bacteria
1:08:48prefiere al principio usar la glucosa y
1:08:50después la?
1:08:52¿Por qué le parece mejor fuente de
1:08:53carbono? Okay. ¿Cómo? ¿Y qué es lo que
1:08:56explica esta fase larga? ¿Qué está
1:08:58pasando? Eso fue lo que él estudió,
1:09:00terminó su tesis doctoral y después se
1:09:03dedicó a estudiar por qué pasaba esto y
1:09:06lo que vamos a ver ahora. ¿Okay?
1:09:09¿Qué les parece que pasa acá en esta
1:09:11fase? ¿Por qué no hay crecimiento acá?
1:09:17Tiempo para adaptarse.
1:09:19¿Cómo?
1:09:19Necesitarse.
1:09:21Adaptarse, ¿qué quiere decir?
1:09:27tiene que resignarse a que se acabó la
1:09:29glucosa, psicológicamente prepararse
1:09:31para digerir la lactosa y finalmente
1:09:34digerirla. Eso, ¿qué quiere decir? Que
1:09:36tiene que sintetizar las enzimas para
1:09:38degradar la lactosa que no las tenía
1:09:41acá. Entonces, ¿qué es lo que está
1:09:42pasando acá?
1:09:44¿Qué pasa acá? Y entonces, ¿qué pasa
1:09:46acá? Eso es lo que vamos a ver ahora.
1:09:49Okay.
1:09:52Bueno, para eso tenemos que entender qué
1:09:55hace, qué es la, cuál es la enzima clave
1:09:58para utilizar la lactosa en esqueritia
1:10:00cólica. La enzima se llama
1:10:02betagalactocidasa.
1:10:04Van a tener un TP, ¿sí? El TP de
1:10:07betagalactocosida, inducción enzimática.
1:10:09Se trata de eso. ¿Okay?
1:10:13Y si no tenemos ningún inconveniente, va
1:10:14a haber un paper que van a leer el
1:10:16primer seminario después del parcial,
1:10:18que se trata del operón, que es lo que
1:10:20vamos a ver ahora.
1:10:22La beta galactocidasa es la enzima que
1:10:25degrada la lactosa, corta acá y la
1:10:28transforma en galactosa y glucosa.
1:10:31Y esto es lo que come la bacteria.
1:10:36Sí, esto después hace la glucólisis, ¿se
1:10:39acuerdan de la glucólisis?
1:10:42La beta galactocidasa también hace esta
1:10:44reacción. En vez de cortar cambia de
1:10:46lugar la unión beta14
1:10:49la hace beta 16. ¿Ven la diferencia?
1:10:52Está uniéndose con el carbono 4 y acá
1:10:54está uniéndose con el carbono 6. Esto
1:10:57también lo hace la betagaltoidaza.
1:10:59Esto se llama alolactosa.
1:11:02La alolactosa también después la puede
1:11:04cortar la betagalactocidaza para que se
1:11:06la puedan comer.
1:11:08¿Okay? Entonces recuerden estas dos
1:11:10reacciones,
1:11:12esta y esta, ¿bien? Y esto lo que decía
1:11:16antes, es la fuente de carbono y de
1:11:18energía de la bacteria.
1:11:22Okay. Y ahora vamos al operón la
1:11:27el operón la tiene el promotor con su
1:11:30secuencia -10 - 35, que es la misma que
1:11:32habíamos usado en las diapositivas
1:11:34anteriores, la secuencia. Sí.
1:11:39Acá está el +1. ¿Qué era el má un?
1:11:44Donde comienza la transcripción. ¿Sí? ¿Y
1:11:47qué se va a transcribir? Un mensajero
1:11:49largo que va a tener tres marcos de
1:11:52lectura abiertos para los genes. LAC Z,
1:11:56LAAC I y LAAC A.
1:11:58El lac Z codifica para la enzima de cada
1:12:01lactocidada, el lac y codifica para la
1:12:04permeasa de la lactosa
1:12:06y la laca a la acetil transcerasa, de la
1:12:09cual no vamos a volver a hablar, pero
1:12:11está ahí.
1:12:15Esto representa una bacteria
1:12:18con su cromosoma.
1:12:21Estas figuras geométricas son las
1:12:22enzimas. Fíjense que para que la
1:12:25betagalactocidasa
1:12:27pueda cortar a la lactosa en dos, es
1:12:30necesario que entre al citoplasma.
1:12:33Para entrar al citoplasma se necesita la
1:12:36función de la permeaza, que es una
1:12:38proteína de membrana que tiene agarra la
1:12:41lactosa y la mete dentro de la célula.
1:12:44Si no hay permeasa, no se puede comer
1:12:46lactosa.
1:12:48Okay. Y si no hay deal lactosida,
1:12:50tampoco.
1:12:55Okay.
1:12:58Este entonces es el promotor LC, que
1:13:00tiene esta región celeste que vamos a
1:13:02ver más tarde, que es parte del promotor
1:13:05y tiene esta región verde de acá. Hay
1:13:07tres regiones verdes, O1, O2 y O3 que se
1:13:11llaman operadores.
1:13:15¿Okay? Las regiones verdes y azules son
1:13:19las que permiten regular la actividad
1:13:23del promotor. Vamos a ver que el
1:13:25promotor funciona o no funciona
1:13:28dependiendo de lo que le pase a las
1:13:30regiones celestes cigares.
1:13:33Okay.
1:13:35Río arriba. del promotor
1:13:39hay otro gen que se llama LA I latina en
1:13:43vez de LAAC I.
1:13:46El LAC I latina tiene su promotor del
1:13:49promotor LAC I, un -35 y -10 apuntando
1:13:53también en esta dirección. Okay,
1:13:56ahora vamos a ver qué función tiene cada
1:13:58uno de estos.
1:14:01¿Alguna pregunta?
1:14:07no dije,
1:14:10[carraspeo]
1:14:12pero es una secuencia de la
1:14:14cuando
1:14:17que son en este caso
1:14:20ser no sería que decirón
1:14:25marco de lectura es una palabra que dice
1:14:28que hay un una y
1:14:32Cistrón lo pone en el contexto de una
1:14:34bacteria. Estamos hablando de un cistrón
1:14:37porque son tres cistrones. Es un operón
1:14:40trisistrónico el operón loro.
1:14:45Y perdón, ¿y qué habíamos dicho que
1:14:47hacían las secuencias celeste y las
1:14:49verdes?
1:14:49No, lo dijimos en general, son las
1:14:52secuencias regulatorias,
1:14:54son las que van a controlar si se
1:14:56expresa o no se expresa el polisis
1:14:59crónicos. Pero no te expliqué todavía
1:15:01cómo.
1:15:03Y la uno es otro gel. La i es otro gen
1:15:07que ahora te voy a explicar si me das un
1:15:09segundo.
1:15:13Okay. Si no hay lactosa,
1:15:19el operón está reprimido.
1:15:22Ahora vamos a ver por qué, cómo
1:15:27la polimerasa no se puede unir. ¿Por
1:15:30qué?
1:15:32Porque el lac i tiene un mensajero
1:15:35monosstrónico, el lac i que codifica
1:15:39para una proteína que es un tetrámero
1:15:42que se llama represor L.
1:15:48¿Okay?
1:15:50Este tetrámero,
1:15:52homotetrámero,
1:15:53porque son cuatro subunidades idénticas
1:15:56todas de la traducción de este
1:15:58mensajero.
1:15:59¿Okay?
1:16:03se va a unir al O1, tiene afinidad por
1:16:08el O1, se agarra con dos subunidades del
1:16:12O1, ¿okay? Estas dos patitas de acá y le
1:16:16quedan estas dos de acá, ¿para qué? Para
1:16:19unirse al O3.
1:16:23El ADN, ¿se acuerdan que es flexible? Ya
1:16:25lo vimos eso.
1:16:28Entonces, como esto es flexible, el
1:16:30tetrámero este se une a O1 y a O3 y ¿qué
1:16:34pasa? Cierra acá este bucle y entonces
1:16:37la zona de -10 y -35 no son accesibles a
1:16:40la polinidad.
1:16:49¿Qué secuencia lo que
1:16:51los de aquí?
1:16:55El Genla aquí tiene un mensajero que
1:16:59codifica al represor. El represor va y
1:17:02se une ahí.
1:17:04Como tiene sitios de unión de un lado y
1:17:06del otro, cierra este bucle y hace que
1:17:08el represor, no, en la polimeraza, no se
1:17:11pueda unir al promotor.
1:17:13Okay.
1:17:21Able la doble,
1:17:23pero no puede unirse acá porque está
1:17:25cerrado todo. Está cerrado
1:17:30que
1:17:32no te escucho que cómo hace la proteína
1:17:36si está cerrada y no ha llegado todavía.
1:17:41No entiendo tu pregunta.
1:17:44La polimerasa no se puede unir acá
1:17:46porque esto está cerrado.
1:17:51Sí, pero el R había la función.
1:17:55La R de polimerasa. Sí, pero para eso de
1:17:57unirse.
1:18:00No está unido. V que está acá. No está
1:18:03unido. Tiene que unirse acá y no está
1:18:04acá. Está acá.
1:18:07Está cerrada de la puerta.
1:18:10Una doble cadena o una sola cadena.
1:18:12Esto es una doble cadena.
1:18:14Ah, okay.
1:18:16Este es el ADN doble cadena.
1:18:18Okay,
1:18:23entonces está reprimido, no hay
1:18:25transcridición.
1:18:27Eloras
1:18:28débiles.
1:18:29Débiles,
1:18:30pero muchas
1:18:31sí,
1:18:33muchas débiles hacen fuertes.
1:18:37Y el regresor, o sea, el regresor pasa
1:18:40si no no hay lactosa.
1:18:45Si hay lactosa no hay regisor,
1:18:48caemos la ansiedad
1:18:51y lo vamos a
1:18:55Okay. Entonces tenemos esto que se dobla
1:18:57el ADN, el DNA looping. Se puede hacer,
1:19:00yo lo dibujé el 13, pero también puede
1:19:02ser el 1
1:19:04también se forma. Okay.
1:19:09Bien, esta esencial para la represión
1:19:13poderosa para que reprima bien. Okay. Si
1:19:16este no está, funciona mal la represión,
1:19:19pero funciona todavía con uno solo
1:19:21funciona porque impide que se una la
1:19:23polimeraza porque está ahí. ocupando el
1:19:26lugar, pero esto es lo principal. Se
1:19:28cierra, se cierra el ADN
1:19:32con lactosa se induce. ¿Cómo se induce?
1:19:38Bueno, lo que pasa es que la lactosa que
1:19:41entró a la célula es convertida por la
1:19:44betagal en alolactosa y la alolactosa se
1:19:49une al represor y le cambia la
1:19:51conformación.
1:19:55El receptor con la alolactosa unida, uno
1:19:58aparcada su unidad, no puede unirse al
1:20:01O1.
1:20:05Como no puede unirse al O1, ¿qué pasa?
1:20:13La polimerasa se une
1:20:18y transcribe,
1:20:22o sea, el represor siempre está siendo
1:20:24sintetizado, pero en presencia de
1:20:26lactosa se modifica.
1:20:29La alolactosa es el inductor.
1:20:32La alolactosa se une, produce un cambio
1:20:35conformacional en el represor que le
1:20:37impide unirse al operador. El represor
1:20:40tiene dos sitios, uno para el inductor y
1:20:43otro para el ADN.
1:20:45¿Ven? Se une acá el inductor y estas son
1:20:48las regiones de unión al ADN. No es el
1:20:50mismo lugar, no es que se une y no deja
1:20:52que se una aln porque se unió ahí. Se
1:20:55une en un lugar y tiene un efecto en
1:20:57otro lugar.
1:20:59Sí, es una proteína alostérica el
1:21:02represor. Vieron la palabra alférica
1:21:06en las enzimas Alejandra. Bueno, no se
1:21:08está no hace falta que sea una enzima
1:21:10para que sea una molécula alosférica.
1:21:13Alostérica quiere decir que tiene un
1:21:14sitio de unión para una cosa y se
1:21:16transmite a través de su estructura al
1:21:19sitio activo, a otro lugar.
1:21:21En el caso del represor tiene un sitio
1:21:24alostérico para la unión de la
1:21:25alolactosa que le cambia la conformación
1:21:28en el sitio de unión al ADN.
1:21:37Okay.
1:21:39Vieron, hasta el terminador dice
1:21:43que siempre va
1:21:48el LI es constitutivo.
1:21:50Ah.
1:21:53Eh, entonces siempre tiene que haber un
1:21:55poco deosa.
1:22:00Ella dice, "Entonces tiene que haber
1:22:02siempre un poquito de betagalactosida,
1:22:04¿sabes? ¿Por qué? Porque si no nunca
1:22:07podría inducirse lo que hablar,
1:22:11siempre estaría cerrado, tiene que
1:22:14hablar un poco
1:22:15por esto.
1:22:16Sí,
1:22:18notaron que para que se desreprima el
1:22:21represor hay que hacer alolactosa, pero
1:22:24la alolactosa la hace la
1:22:26betagalactocidasa. Pero si estaba
1:22:28reprimido, ¿cómo hay detalla de laidasa?
1:22:32Tiene que haber un poquitito de
1:22:33detallectosidza
1:22:35para que se pase esta reacción. Lo vamos
1:22:38a ver más adelante hoy. ¿Entendieron la
1:22:42pregunta de ella?
1:22:44también un poquito de termeaza para que
1:22:46entre la cosa.
1:22:59Bien,
1:23:02¿alguna otra pregunta de esta slide?
1:23:08E
1:23:11no te olvid entender muy bien. El
1:23:14inductor. En este caso sería la
1:23:17presencia, la molécula que se llama
1:23:20inductor es la alolactosa,
1:23:25porque es la que induce la expresión del
1:23:28operón lucere
1:23:31decir que inicia causa que se inicie la
1:23:35transcripción.
1:23:38En el caso anterior no teníamos ningún
1:23:40inductor. La el, o sea,
1:23:43no antes del intervalo,
1:23:45¿no? No, en cuando tenías el represor
1:23:48que se modificaba en el
1:23:49no había inductor, por eso estaba
1:23:52reprimido.
1:23:53Claro. Ah,
1:23:55la vamos a ver ahora.
1:23:57No la vamos a ver más a la
1:24:02no tiene una función obvia conocida.
1:24:09Ya tienen la estructura de el represor
1:24:12LC. En este caso vamos de a poco. Acá
1:24:15hay un sitio de unión. El medio
1:24:17operador, el O1, es tiene un pedazo para
1:24:21una pata y otro pedazo para la otra
1:24:23pata. Okay. Acá hay un monómero del
1:24:27represor, ¿ven? Que está, esta es la
1:24:29pata que está agarrándose acá.
1:24:32Sí. Y por acá está el sitio de unión al
1:24:35inductor.
1:24:38[resoplido]
1:24:38Sitio de unión al inductor. Este es el
1:24:40dominio de tetramerización
1:24:43y acá está unido al DN. Ven,
1:24:48ahí está otro monómero.
1:24:51Ahí están unidos por el dominio de
1:24:52tetramerización. Y ahora van a aparecer
1:24:55los otros dos. Este está unido acá, este
1:24:58está unido acá, el rojo está unido acá y
1:25:01el naranja unido acá.
1:25:03Este es un dímero. Este es otro dímero.
1:25:05Están tetramerizados por esas y esto es
1:25:08flexible. Voy a agarrar así. Sí. Y hace
1:25:13el look.
1:25:16Eso no.
1:25:20y no puede,
1:25:20o sea, esto no es esto es una
1:25:22representación de la estructura
1:25:23tridimensional verdadera, ¿no? Esto es
1:25:25un hay un cristal de esto.
1:25:29No puede venir eh la polimerasa
1:25:33por el lado de afuera del
1:25:36es imposible.
1:25:37No se puede meter
1:25:41otra representación.
1:25:50Very good.
1:25:55Okay, listo. Okay.
1:26:00IPTG.
1:26:03Estos tipos honor encontraron moléculas
1:26:08que se parecen a la lactosa,
1:26:11pero que tienen a la alactosa, pero que
1:26:14tienen la propiedad de que no son un
1:26:16azúcar que la bacteria pueda comer, solo
1:26:19se parecen. Entonces, se pueden unir al
1:26:23represor,
1:26:25causar el cambio conformacional,
1:26:27pero no sirven para comer.
1:26:30Por eso se llaman inductores gratuitos.
1:26:35¿Okay? Los inductores gratuitos son
1:26:38moléculas que hacen eso. Funcionan de
1:26:41inductores, pero no son metabolizables
1:26:43por la célula. Entonces, yo pongo una
1:26:46cantidad de isopropil fiocalactó
1:26:50que se parece a lactosa y induzco lo que
1:26:54la
1:26:56Sí. Voy a tener que dar de comer algo
1:26:58que no sea lactosa para que pueda vivir
1:27:01la bacteria, porque eso no sirve para
1:27:03comer.
1:27:06Okay.
1:27:07Bueno, entonces el IPTG hace lo mismo
1:27:09que el la aloastoso,
1:27:11pero no sería medo con un gastadero de
1:27:13energía para la bacteria.
1:27:16¿Qué es? Una molécula sintética, no es
1:27:18una molécula natural.
1:27:19Ah, okay.
1:27:20Okay. Los químicos hicieron una molécula
1:27:23parecida, la probaron y funcionó.
1:27:27Vos, un montón con distintas
1:27:29propiedades. Este es el más común que se
1:27:31usa ahora.
1:27:33Okay.
1:27:36El DT.
1:27:46Yes.
1:27:48Muy bien.
1:27:51Okay. ¿Qué pasa si tengo una bacteria
1:27:54mutante?
1:27:56que tiene una mutación en el gen del lac
1:28:01i de forma tal de que no se puede unir
1:28:04al operador.
1:28:09¿Qué le va a pasar a esa bacteria?
1:28:14va a ser todo el tiempo,
1:28:17va a tener activo todo el tiempo el
1:28:19teron lag, ¿no?
1:28:26¿Qué pasa? ¿Qué eso no representaría
1:28:30o yo me retiró? es un mutante.
1:28:32Claro. Digo, el hecho de que te que
1:28:35puede sintetizar los productos del del
1:28:38porque no hay un operón que viva.
1:28:42Digo que no hay un operón, que no hay
1:28:44una opción que viva a la al
1:28:50No, digo, no esentajoso.
1:28:53Es de tentajoso, pero es un mutante que
1:28:56encontraron en el laboratorio.
1:28:58No es una cosa natural.
1:29:00Pero mi pregunta es, ¿cuál sería esta
1:29:02desventaja? Porque solamente tiene
1:29:04presencia de algo.
1:29:05¿Cuál es la desventaja?
1:29:07Porque está cajando
1:29:10Yo no te dije que era una desventaja.
1:29:13Pero vos decís que es una desventaja. La
1:29:15desventaja es que se está haciendo una
1:29:17proteína que no que no tiene utilidad.
1:29:20Claro.
1:29:21Es un gasto de energía. Si yo pongo a
1:29:23competir bacterias normales con estas
1:29:25bacterias mutantes en un mendo sin
1:29:27lactosa, estas van a perder, van a
1:29:29crecer más desácil.
1:29:31¿Correcto? Pero yo ahora me explicaste
1:29:33otra cosa.
1:29:36¿Qué pasa si yo agrego un gen en un
1:29:40plásmido con el gen Lucky W type?
1:29:45¿Qué le va a pasar a la bacteria esta
1:29:49en el genoma? tiene mutante la de forma
1:29:52tal de que no puede hundirse al operador
1:29:54y transformo a las bacterias con un
1:29:57plásmido que tiene la normal.
1:29:59Normalmente
1:30:00va a funcionar normal.
1:30:01Sí, porque el plmido va a generar
1:30:05Porque el plásmido va a generar el
1:30:07represor y el represor se va a poder
1:30:09unir.
1:30:10Okay. Voy a complementar
1:30:14la mutación,
1:30:15¿sí? en el genoma con una con una con un
1:30:20plasmo, con el gen wp lo complemento.
1:30:25Esa la palabra técnica es que la
1:30:27complemento.
1:30:29Sí. Y el efecto
1:30:32es que ahora que se pega, no se puede
1:30:34pegar más la polimerasa.
1:30:37El represor actúa en trans.
1:30:41Otra palabra que tienen que aprender hoy
1:30:44en trans. ¿Por qué? Porque no importa
1:30:47dónde está puesto, como se hace una
1:30:50proteína que viaja por el citoplasma, se
1:30:54une al operador. No importa si está en
1:30:56el mismo en el mismo genoma o si está en
1:30:59un plasma.
1:31:00Correcto. Actúan.
1:31:12Okay. ¿Qué pasa si yo tengo una mutación
1:31:16que en vez de no unirse al represor, al
1:31:19operador, es una mutación que no se une
1:31:22al inductor?
1:31:28No pasa. Claro, la le pongo a lo lactosa
1:31:30en presencia de lactosa no pasa nada.
1:31:32con TPC no pasa nada, está todo el
1:31:34tiempo pegado al operador,
1:31:36nunca va a andar el operón largo.
1:31:40Ese se llama super represor.
1:31:45[carraspeo]
1:31:48¿Qué pasa si ahora pongo un plásmido con
1:31:51el gen
1:32:02qué va a pasar? Si no hay lactosa se va
1:32:05a unir. Si hay lactosa se va a despegar
1:32:07y este se va a unir.
1:32:10Okay. No puede complementar. El
1:32:13superrepresor es dominante,
1:32:18¿se acuerdan de dominante y recesivo?
1:32:21El superrepresor es dominante con
1:32:23respecto a al represor Walp.
1:32:33¿Qué pasa si ahora pongo un operón lag
1:32:38completo acá?
1:32:43En el plástico recupero,
1:32:47¿se va a expresar este este este operón
1:32:51o no?
1:32:52El delido no se va.
1:32:54El de pláido no se va a expresar. El del
1:32:56genoma no se va a expresar. Ninguno se
1:32:58va a expresar
1:33:00porque el superrepresor lo va a
1:33:01reprimir.
1:33:07Sí. Acá estoy simplificando el dibujito.
1:33:11Okay.
1:33:16La única forma sería una encima que
1:33:18corte esa
1:33:20que destruya el superfor.
1:33:22Claro. O que lo o que lo saque del
1:33:25operador.
1:33:27¿Cómo
1:33:29que destruir? Lo tenes que destruir.
1:33:31Una.
1:33:34Okay. Bien.
1:33:40Ahora, ¿qué pasa si pongo el
1:33:43superrepresor en un plástmido
1:33:46en vez de en el genoma? No me está lo
1:33:47más bien, lo pongo en un plácido.
1:33:52Puedo unir
1:33:53Se va a unir porque actúa en trans.
1:33:58Okay.
1:34:04Bien. Ahora, ¿qué pasa si tengo una
1:34:08bacteria que tiene el operador uno
1:34:12constitutivo?
1:34:15El operador C no une al represor,
1:34:19transforma al promotor en un promotor
1:34:21constitutivo
1:34:24que se expresa todo el tiempo porque no
1:34:26une el represor. ¿Qué va a pasar? Se
1:34:28expresa todo el tiempo.
1:34:32Correcto.
1:34:36¿Qué pasa si ahora agrego en un plásmido
1:34:38un operón lag normal?
1:34:43El plásmido se va air
1:34:46el del plásmido se va a reprimir y el
1:34:48del fenoma no. ¿Por qué?
1:34:55Pero como el como el del genoma no se va
1:34:58a transcribir y EOC es dominante. El
1:35:01fenotipo de la bacteria es que tiene
1:35:04desregulado lo que la le anda todo el
1:35:07tiempo. No importa que yo ponga uno acá
1:35:09que funcione porque este de acá no
1:35:11funciona.
1:35:12Sí, pero este no afecta.
1:35:17Este actúa en sis, no en trans.
1:35:22El operador solo afecta a su operón, no
1:35:27afecta al otro operón. Este funciona, se
1:35:30reprime. Este no funciona, esto se
1:35:33expresa, pero no afecta a que le pasa al
1:35:35otro. Actúa en siss. En sis es de este
1:35:38lado. Actúo al lado de donde estoy.
1:35:42Sí. Las mutaciones en el ADN, los ADN
1:35:45regulatorios, entonces actúan en sí del
1:35:48lugar a donde regulan. En cambio, las
1:35:50mutaciones que afectan a las proteínas
1:35:53actúan en trans, tienen efecto en otros
1:35:56lados, porque su mensaje de mutación se
1:36:00manifiesta a través de moléculas
1:36:02difusibles
1:36:04que pueden difundir y ir de un lugar a
1:36:06otro.
1:36:08¿Entendieron la diferencia entre sis y
1:36:10trans?
1:36:16Bien.
1:36:19Okay.
1:36:23Esto entonces sin lactosa
1:36:26está reprimido.
1:36:44¿Qué es esto?
1:36:48Sin lactosa,
1:36:51cada tanto se despega el represor.
1:36:56¿Por qué?
1:36:59Porque como está unido por uniones
1:37:01débiles, no son eternas, respiran las
1:37:04uniones.
1:37:06Las uniones covalentes están todo el
1:37:07tiempo. Las uniones débiles se despegan
1:37:10y se pegan. Se despegan y se pegan. Cada
1:37:12tanto esto se despega y en ese momento
1:37:15se mete una polimerasa, transcribe y
1:37:18hace unas pocas moléculas de
1:37:21betagalactocidasa y de perilasa y de
1:37:22transacetilasa.
1:37:30Eso genera una expresión muy baja que se
1:37:35llama expresión basal o expresión líqui
1:37:37en inglés, ¿sí?
1:37:40que hace que haya unas pocas moléculas
1:37:43de betalactocidasa y de permeasa al en
1:37:46todo momento en las bacterias
1:37:49suficientes para que si yo agregue
1:37:51lactosa
1:37:52sean suficientes para meter alguna
1:37:54molécula de lactos de adentro de la
1:37:57célula que se pueda convertir al lactosa
1:38:00y desprimir a lo
1:38:03Eso es lo que me estaban preguntando
1:38:04antes. ¿Cómo es que se forma la
1:38:07alolactosa
1:38:08que es el inductor? Si para formarse la
1:38:12alolactosa necesito que haya ventana
1:38:14lactocidasa y necesito que haya un poco
1:38:17de lactosa dentro de la célula. Es
1:38:19decir, que necesito que haya permeasa.
1:38:22alguna molécula de permeasa y alguna
1:38:23molécula de betagocidaza tienen que
1:38:26estar aún cuando el operón está
1:38:28reprimido.
1:38:31Eso ocurre gracias a que las uniones
1:38:35débiles son reversibles
1:38:37y respira, cada tanto se despegan y en
1:38:40ese momento se mete una polimeraza.
1:38:44Perfecto. Todo lo que se transcribe se
1:38:47traduce.
1:38:50Todo lo que se transcribe se traduce.
1:38:55¿Qué quiere decir eso?
1:38:57No sé, porque capaz este ejer se
1:38:58transcribe, pero si no se te rosó no vas
1:39:01a traer
1:39:03Exactamente.
1:39:05Todo en la biología es probabil.
1:39:09Nada es siempre pasa o nunca pasa. Sí,
1:39:13se hace un mensajero y existe una
1:39:15probabilidad alta de que se le una
1:39:17ribosoma y lo traduzca, pero podría ser
1:39:20degrade antes de que un ribosoma se le
1:39:23pueda pegar. Entonces, podría haber
1:39:25alguna transcripción basal o de escape
1:39:29que no lleve a que se sintetice nada.
1:39:32Puede pasar.
1:39:35Sí.
1:39:40La expresión esta, la expresión de
1:39:42escape, permite que entren las primeras
1:39:44moléculas de lactosa, que entonces se
1:39:46generen las primeras moléculas del
1:39:47inductor.
1:39:49¿Sí? ¿Cuán frecuente les parece a
1:39:52ustedes
1:39:54que es esto en la vida de una bacteria?
1:39:57La expresión de
1:40:00ni idea. Una vez por minuto, una vez por
1:40:04hora. ¿De
1:40:07qué dependerá?
1:40:10¿Cómo?
1:40:10De la
1:40:13Sí, de las condiciones lasones de las
1:40:17condiciones
1:40:17de las condiciones de cuntivas de la
1:40:19batería. Pero y además de eso, ¿de qué
1:40:22depende?
1:40:24Depende de la afinidad, de cuántos
1:40:26puentes de hidrógeno son, de cuánt
1:40:29cuántas de cuántos subes de cuál es la
1:40:32probabilidad de que se despegue solo. Si
1:40:35es muy afín, poco probable. Si es poco
1:40:38afín, muy probable.
1:40:40En el caso de la bacteria
1:40:44ocurre aproximadamente una vez por hora
1:40:49y la bacteria se divide depende de las
1:40:51condiciones, cada 20 minutos, cada 30
1:40:53minutos se duplica. Es decir, que una
1:40:56vez por generación o una vez cada dos
1:40:58generaciones aparecen esta transcripción
1:41:02de escape. Sí. Y se sintetizan unas
1:41:04pocas moléculas de betagal y de
1:41:07permeasa.
1:41:10por cada mensaje. Esto pasa una vez y
1:41:13cada vez que pasa lo más probable es que
1:41:16haya un solo mensajero
1:41:18se
1:41:21y con ese mensajero se hacen alrededor
1:41:23de cuatro moléculas,
1:41:27cuatro o cinco moléculas de bet deago de
1:41:29permeaza. Y eso es lo poquitito que hay,
1:41:32que cuando aparece la tosa afuera se
1:41:35induce el
1:41:37podría ser que haya otro cistrón que
1:41:39codifique para la o para la
1:41:43y que también haya por presencia de que
1:41:46que se codifican a los
1:41:50o sea como en vez de tener
1:41:52pero no es una duda
1:41:54después me preguntas si hay otra copia
1:41:58no porque digo porque capaz Si tenés
1:42:00otro que te codifica las mismas
1:42:02proteínas, no hace falta que esperar a
1:42:04que no hace es el único.
1:42:07Sí, sí,
1:42:11¿entienden entonces expresión de escape
1:42:13y para qué sirve?
1:42:18Okay. Bueno, entonces ahora entendemos
1:42:22por qué ocurren las dos fases de
1:42:25crecimiento. Las dos fases de
1:42:27crecimiento es lo que se llama diáxia. Y
1:42:29es lo que le llamó la atención
1:42:32originalmente
1:42:34a Monod. Sí.
1:42:37Lo que hizo su tesis doctoral y después
1:42:39se dieron cuenta de que esto estaba
1:42:41mostrando que se inducen genes y
1:42:43estudiando esto descubrieron cómo se
1:42:45inducen y que existe el represor y que
1:42:47existe el operador y el promotor. ¿Sí?
1:42:51Entonces, en la fase es cuando se está
1:42:54sintetizando la beca lactosida, para
1:42:56poder la permeaza, para poder comer la
1:42:59lactosa.
1:43:02Una pregunta sobre eso. Antes no había
1:43:06ya habido preferencia gracias a que
1:43:09estas que se producen eh por expresión
1:43:12fai ya había eh de la laa
1:43:18en la célula. Entonces, si ya había
1:43:20lactosa en el medio, ¿no podría ya haber
1:43:23inducido que el operón funcione antes de
1:43:26que se acabe la glucosa?
1:43:28A ver, escuchen
1:43:30la pregunta de ella, que justo nos va a
1:43:32llevar a lo que viene ahora.
1:43:34Acá hay glucosa y lactosa.
1:43:37Desde el principio hay lactosa. ¿Por qué
1:43:40no se induce elenolón la lata acá? Sería
1:43:42la pregunta. Ahora vamos a ver.
1:43:54Existe un proceso muy importante que se
1:43:57llama represión catagólica.
1:44:02Cuando hay glucosa
1:44:05no se expresan montones de operones de
1:44:08utilización de azúcares alternativos.
1:44:11La glucosa tiene un efecto
1:44:14sobre esos promotores para que no se
1:44:16puedan inducir a pesar de que esté el
1:44:20azúcar que lo debería inducir. En el
1:44:22caso de operon lac, a pesar de que hay
1:44:25gastosa, no se expresa lo peron lac
1:44:28porque la glucosa quiere ser ella la
1:44:32primera en ser metabolizada.
1:44:36Okay,
1:44:38para eso está la región celeste que les
1:44:40mostré antes. [resoplido] La región
1:44:43verde es la de los represores. La región
1:44:45celeste es la que es controlada por la
1:44:48glucosa.
1:44:51En una bacteria donde no hay glucosa,
1:44:54sí está pasando esto todo el tiempo. Hay
1:44:57una una enzima en la membrana de la
1:45:00bacteria que se llama adelirla.
1:45:05Okay. ¿Qué hace con ATP?
1:45:09Hace AMP cíclico.
1:45:11Acá está el AMP. AMP es como la APP,
1:45:15pero con uno solo, un fosfato solo. Y
1:45:18como es cíclico, fíjense que el fosfato
1:45:21está unido a este acá, a este carbono y
1:45:24a este carbono.
1:45:26Está unido al cinco y al tr.
1:45:31Este molécula AMP cíclica lo hace la
1:45:34denil ciclasa.
1:45:37¿Entendieron todos lo que es el MP
1:45:38cíclico? Un derivado del ATP, ¿sí?
1:45:43De la AMP.
1:45:45se sintetiza el MP cíclico que está este
1:45:47circulito amarillo que se une a esta
1:45:49proteína CRP
1:45:52y el CRP con el AMP cíclico se unen a la
1:45:56región celeste.
1:45:59se unen a la región celeste y eso es lo
1:46:02que permite que se una la polimeraz.
1:46:06No alcanza
1:46:09las regiones -10 y -35 del operón LA
1:46:12para que se pueda unir la polimeraza.
1:46:15Necesitan la ayuda de el CRP
1:46:19unido al principio.
1:46:24Ustedes me tienen que preguntar por qué
1:46:26no alcanza
1:46:29si está el promotor.
1:46:36¿Quién preguntó?
1:46:38Muy bien. ¿Por qué no alcanza? No
1:46:40alcanza. ¿Se acuerdan que la secuencia
1:46:42no era la consenso perfecta?
1:46:46No es suficientemente a fin que se pueda
1:46:49unir eficientemente
1:46:51al promotor. L. necesita la ayuda de el
1:46:54CRPM específico. Es decir, que esa es
1:46:57una función de que la secuencia no sea
1:46:59la perfecta del consenso que hablamos
1:47:02antes, ¿se acuerdan?
1:47:06Como no es perfecta, sola no se puede
1:47:08unir y entonces puedo ayudarla con una
1:47:11molécula que es esta CRPA me especifico.
1:47:15Si fuese la frecuencia más afil, no
1:47:17haría falta esto.
1:47:18No haría falta.
1:47:28Ahí
1:47:30con la ayuda de estos fuentes de
1:47:32hidrógeno extra o interacciones,
1:47:34interacciones que sean débiles, entonces
1:47:36se puede unir y transcribir.
1:47:41Okay.
1:47:46Es el sitio de unión del CRP.
1:47:57Okay.
1:47:59Fíjense que el ane cíclico se degrada
1:48:02con una enzima que está presente también
1:48:04en la bacteria que se llama
1:48:06fosfodiesterasa.
1:48:08Rompe esto de acá, el ciclo lo rompe y
1:48:11lo transforma en AMP.
1:48:15Es decir, que se tiene que estar
1:48:16sintetizando todo el tiempo.
1:48:20Si yo paro de sintetizar a mi cíclico,
1:48:23se degrada todo lo que había y ¿qué va a
1:48:26pasar? Esto se va a despegar y la
1:48:29polimerasa no va a poder transcribir.
1:48:32Es decir, que si yo controlo a esta
1:48:34enzima, controlo a lo que la
1:48:38o no.
1:48:46¿Qué hace la glucosa?
1:48:49Inhibe a lail ciclasa.
1:48:53Cuando hay glucosa se inhibe la
1:48:55producción del matecíclico.
1:48:57El anito cíclico que había rápidamente
1:48:59se degrada y se apaga el operón la.
1:49:09Okay.
1:49:16Entre 200 y 350 promotores están
1:49:19regulados por el CRPMP Cic.
1:49:23Positivamente. ¿Qué quiere decir eso?
1:49:25que necesitan CR RPMP cíclico para poder
1:49:28andar.
1:49:32Okay. Todos esos se apagan en presencia
1:49:35de glucosa.
1:49:39Tremenda la glucosa
1:49:41es supergoísta.
1:49:44Okay. Cuando hay glucosa no quiere que
1:49:46se coma nada.
1:49:48Algunas cosas sí.
1:49:51rutas catabólicas [risas] accesorias a
1:49:52la utilización de glucosa y el
1:49:54catabolismo en general. O sea, todo lo
1:49:56que no es necesario la glucosa lo apaga
1:50:01la célula. Entonces, hay un montón de
1:50:02cosas que deja de hacer. Si yo arruino
1:50:05este sistema, se empiezan a sintetizar.
1:50:07Si yo arruino, digo, la inición está, se
1:50:10empiezan a sintetizar un montón de
1:50:11operones que no se están, no se
1:50:13necesitan para nada.
1:50:16Okay. En presencia de glucosa,
1:50:18el metabolismo de glucosa es es más
1:50:21barato energéticamente para la célula.
1:50:26Por eso
1:50:27es más, bueno, alguno tiene que tendrías
1:50:29que elegir tenes que elegir uno.
1:50:31Ah,
1:50:32alg un par que no se van a reprimir y
1:50:34esos haces esos te dedicas a esos. Si
1:50:37falta el azúcar esos azúcares, empezas a
1:50:38hacer los otros.
1:50:41Sí.
1:50:43El metabolismo de la glucosa es más
1:50:46favorable, ¿no? Es el que evolucionó
1:50:48así. Por alguna razón las bacterias
1:50:52evolucionaron para utilizar
1:50:54preferentemente la glucosa. No hay una
1:50:56razón eh física en que sea la glucosa y
1:51:00no otra. Es solo lo que hay.
1:51:07puede pasar por ejemplo que una
1:51:08sustancia puede aunque no sea la glorosa
1:51:11o aunque no sea la que se supone que
1:51:14invecismo de
1:51:20cómo o sea la glucosa en este caso, por
1:51:23ejemplo, todo eso.
1:51:26Puede que haya otra sustancia, por
1:51:27ejemplo, similar a la glucosa que ahora
1:51:30podría,
1:51:30o sea, puede ser como un mecanismo
1:51:32antibiótico también. Sí, uno puede
1:51:35actuar sobre las ví sobre la vía de la
1:51:38glucosa de por otras maneras. Sí.
1:51:43Eh, a pesar de que
1:51:46presencia y todo el opero
1:51:51se sigue produciendo el represor a
1:51:53partir del
1:51:55Sí,
1:51:56el represor no es no no está reprimido,
1:51:59por que eso sepa por el por el sistema
1:52:01de
1:52:04está el represor también que es
1:52:07que hubiera sido másente que hubiera
1:52:12El reflexor lo tenés que tener puesto,
1:52:14listo, para que no haya eh transcripción
1:52:19si no hay lactosa.
1:52:21Pero en caso de que se termine la
1:52:23glucosa,
1:52:24cuando termine la glucosa
1:52:27tenés que tener el refresor listo porque
1:52:29si no te arranca la transpción.
1:52:32Okay. Los represores los necesitas
1:52:35aparte del control de G. Entonces se
1:52:37produce todo el tiempo hasta que sea
1:52:41Sí,
1:52:48sí,
1:52:49no
1:52:51se rompe la
1:52:58El es el mismo. El AMP cíclico no es el
1:53:00mismo. El cíclico es este, el que te
1:53:02conté recién, que lo ves por primera vez
1:53:04acá.
1:53:07Okay. Bueno, entonces la inducción del
1:53:10operón lac con represión catabólica,
1:53:13teniéndola en cuenta, entonces requiere
1:53:16que
1:53:17con glucosa y con lactosa, ¿qué pasa? Si
1:53:20hay las dos cosas,
1:53:24si hay glucosa y hay lactosa, ¿qué va a
1:53:26pasar? ¿Se transcribe?
1:53:28No. ¿Por qué? Porque si bien el represor
1:53:31no está unido, como no se une el CRP, no
1:53:34se puede unir la polimeraza.
1:53:37¿Okay? Necesitas las dos cosas, que no
1:53:40haya glucosa y que haya lactosa
1:53:43para que se transfiga.
1:53:47Y en ese caso, por ejemplo, el organismo
1:53:49capaz de sintetizar,
1:53:51o sea, debe tener como una vida para
1:53:53poder sintetizar de catabolizar
1:53:57a glucosa.
1:53:59Catabolizan la glucosa porque hay
1:54:00glucosa.
1:54:03Pero la presencia de lactosa,
1:54:05la presencia de lactosa hace que el
1:54:07represor se despegue, pero no se puede
1:54:09usar.
1:54:11Claro, por el CRP,
1:54:13porque no está unido el CRP porque hay
1:54:15glucosa.
1:54:17Okay. Acá les digo algo, a veces el CRP
1:54:19aparece como cap. CRP quiere decir cclic
1:54:22receptor protein y cap quiere decir
1:54:24cataboliz activator protein. Es lo
1:54:27mismo, dos nombres para la misma
1:54:28proteína.
1:54:31Okay.
1:54:35Y como ven, el AM cíclico que se une acá
1:54:38es una un regulador alosférico del CRP
1:54:42porque se une en un lugar y afecta la
1:54:45capacidad del CRP de unirse el ADN en
1:54:47otra parte.
1:54:48Okay.
1:54:53Bueno, entonces resumen de lo que en la
1:54:59esta es la secuencia regulatoria.
1:55:02Tiene el O1, falta el O3 que está por
1:55:04acá -10 - 35 y la secuencia de unión de
1:55:08C, ¿ven que dice CAP acá? VRP es la
1:55:11misma proteína.
1:55:14Cuando hay glucosa y lactosa no hay nada
1:55:17unido y no hay transfusión. Ya sabemos
1:55:20por qué, ¿verdad?
1:55:22Porque hay lactosa, no está unido el
1:55:25represor,
1:55:27hay glucosa, no está unido el CRP, no
1:55:31hay transcripción con glucosa, sin
1:55:33lactosa,
1:55:35como es sin lactosa, está unido el
1:55:36represor, como es con glucosa, no está
1:55:38unido el CRP.
1:55:42Sin glucosa, sin lactosa,
1:55:44está unido el CRP, pero está unido el
1:55:47reprodor. Tampoco hay transcripción.
1:55:50Solo hay transcripción cuando no hay
1:55:52glucosa y hay lactosa porque está unido
1:55:54el CRP con este triangulito que es el
1:55:56cíclico y el represor no está. Entonces,
1:55:58se puede unir la polimerasa. Acá está
1:56:00bien dibujada la polimeras. ¿Ven que
1:56:02ocupan el mismo lugar? No, represor no
1:56:05deja que se unan la polimeraza, aunque
1:56:08no haya luz.
1:56:10Igual no se puede unir.
1:56:13Okay. El look ayuda como 20 veces más a
1:56:17la
1:56:19look también pueden estar al inicio.
1:56:23Al inicio.
1:56:24Pensé que eran solo para la secuencia de
1:56:26terminación.
1:56:27No, no, no. El loop de N con el represor
1:56:29unido.
1:56:30Ah, perdón. Nada que ver con elinador.
1:56:33Ah, okay.
1:56:35Okay.
1:56:38Y entonces esto explica qué es lo que
1:56:41pasaba acá, que suaba solo la glucosa
1:56:44porque el operón la que está apagado
1:56:46acá, recién acá se enciende y puedo
1:56:48comerla la cosa.
1:56:50¿Okay? Y el mismo tipo de lógica es lo
1:56:53que ocurre en todos los otros hoteles
1:56:57de la utilización de azúcares.
1:57:03¿Alguna pregunta?
1:57:08siguiente
1:57:10realizado
1:57:11eh rápida e
1:57:15para probar lación
1:57:19de la lactosa,
1:57:21o sea, alargas
1:57:27crecen más rápido con glucosa que con
1:57:29lactosa.
1:57:30Esa es tu pregunta. Parece que no.
1:57:36Son que usa la glucosa. Fíjate que la
1:57:38lactosa va a glucosa porque se degrada
1:57:40en lactosa y en glucosa. La glucosa
1:57:43glucosa y la galactosa se insomeriza a
1:57:46glucosa y se usa la glucólis. O sea, un
1:57:49par de reacciones más.
1:57:53Sí, los azúcares terminan entrando en la
1:57:55glucólis igual, solo que tienen que
1:57:57transformarse en los componentes
1:58:00necesarios.
1:58:03de catalizador acelerador de reacción.
1:58:07Pero la glucosa no es un catalizador, es
1:58:09una un azúcar.
1:58:12Los catalizadores son las enzimas.
1:58:14Ah, pero tiene actividad catalica,
1:58:16¿no? La glucosa es un azúcar, no tiene
1:58:19actividad catalítica.
1:58:21En el caso en el que no hay ni glucosa
1:58:23ni lactosa, ahí se podría dar igual a
1:58:29¿En dónde? Acá.
1:58:31Acá es donde hay Sí,
1:58:35tal cual.
1:58:38Eh, con cosas puede haber un poco de
1:58:41expresión pasal
1:58:42también un poquito.
1:58:44Y otra pregunta, eh, no llega a confiar
1:58:47en la parte que dijo donde era la del
1:58:51CRP.
1:58:51Sí, el CRP tiene un sitio para m cíclico
1:58:53y un sitio para unirse al ADN. Necesita
1:58:56MP cíclico para unirse al ADN. Quiere
1:58:58decir que su secuencia de unirse ADN
1:59:00cambia cuando se le cíclico, cambia la
1:59:02forma.
1:59:04Eso quiere decir que es alén.
1:59:06Es como eso de la no se une porque sí o
1:59:10sí se referente a
1:59:13y entonces
1:59:16la secuencia
1:59:18de cono no
1:59:22por eso de pero si es
1:59:34no entiendo la pregunta Habíamos
1:59:37hablado,
1:59:37¿no? No, decime la última parte de la
1:59:39pregunta.
1:59:53Si no se puede dar. Obviamente que hay
1:59:55montones de promotores que no necesitan.
1:59:58Claro.
1:59:59Sí, se puede dar.
2:00:01Claro, este es el caso en que necesita
2:00:03el CRP,
2:00:04pero hay casos de otros genes que no
2:00:06necesitan el CRP.
2:00:08No es siempre, no necesitan todos los
2:00:10genes del CRP,
2:00:13todos los genes, por ejemplo, del
2:00:14metabolismo de la glucosa no necesitan.
2:00:18Si no, no sé si necesarían.
2:00:25Okay. Bueno, entonces miremos al operón
2:00:28L completo.
2:00:31Tenemos,
2:00:33prestan atención, acá está el operón LAC
2:00:36con el represor, su promotor, la Z y A.
2:00:40Ya vimos que la beta galactocidasa es la
2:00:42que convierte la lactosa enolactosa y
2:00:45también las convierte. Estas flechas
2:00:46quiere decir que las convierten en
2:00:48glucosa y galactosa para comer, ¿okay? Y
2:00:51está la aquí que es la permeaza, que es
2:00:53la que permite que la lactosa entre. Sí,
2:00:56la lactosa entra a la célula gracias a
2:00:59la K. Se transforma en lactosa, inhibe
2:01:02al represor y entonces el represor no se
2:01:05puede unir, se hace la hace que entre
2:01:07más lactosa. Sí. y se induce lo
2:01:12glucosa inhibe la producción de mio
2:01:14cíclico que hace que el cíclico era
2:01:17necesario para unirse CRP, para unirse
2:01:19al promotor para que se transcriba el
2:01:21otro.
2:01:24¿Se entienden el tema?
2:01:29Ninguna pregunta.
2:01:31El que llega a
2:01:33la permeaza.
2:01:34Ah,
2:01:35la permeasa es fundamental. Si no hay
2:01:38permeaza, no entra la lactosa. No es
2:01:41permeable.
2:01:43La membrana plasmática no deja pasar la
2:01:45cosa.
2:01:49Bueno, acá tienen la tapa de science
2:01:52cuando salió en el año 96 la estructura
2:01:56cristalográfica del represor unido
2:02:01al ADN del operón LA que está formando
2:02:03el loop. Está unido al O1 y al O3.
2:02:07Okay, viene el loop del ADN y acá está
2:02:10unido el CRP.
2:02:14El CRP se se unió acá, está unido al al
2:02:17O1, al O3 y este es el tetrámo del
2:02:25cuando
2:02:27hay opciones de la corenteón
2:02:32es en ellosmente.
2:02:36También se lee elón de Z, es el que
2:02:41digamos favorece lación delor,
2:02:45hay una retroalimentación ahí de la
2:02:49cuando pasa qué,
2:02:52eh, cuando no era
2:02:55entonces ya Z es es leído, se sintetiza
2:03:00correspondiente y eso hace que se
2:03:04obtenga la resposa y que incita a que se
2:03:06siga
2:03:08teniendo el promotor
2:03:10cuando no hay cuando no hay lactosa.
2:03:12Cuando no hay lastos.
2:03:13Claro. Digo e el hecho de que
2:03:14cuando hay lastos o cuando no hay
2:03:15lactosa.
2:03:16Cuando no hay lactosa,
2:03:18eso no hace que no hay como una
2:03:20retroalimentación con la lectura de
2:03:22accesa cuando no hay lactosa dentro de
2:03:25la célula, pero sí afuera.
2:03:28Cuando
2:03:28si no hay lactosa no se forma lactosa.
2:03:34Cuando se estáendo
2:03:36porque está en las condiciones
2:03:37se hace betid.
2:03:38Claro.
2:03:40Eso no hace que se retroalimente el
2:03:42mecanismo porque estás consiguiendo más
2:03:44alcosa.
2:03:46Pero, ¿de dónde sale la lactosa? ¿Hay
2:03:48hay o no hay lactosa fuera?
2:03:52Bueno, no. ¿En qué condiciones estás
2:03:53hablando vos?
2:03:55Si hay lactosa fuera.
2:03:58Sí.
2:03:59Y entonces, ¿qué es?
2:04:01Entran unas pocas moléculas porque hay
2:04:03un poquitito de permeasa por la exesión
2:04:05de escape.
2:04:06Sí.
2:04:06Se convierte la lactosa y aquí y se une
2:04:09más al represor,
2:04:10claro.
2:04:10Que se despega. Entonces, hay más
2:04:12betagalactocidaza y más permeaza, entra
2:04:14más lactosa, se convierte más a lactosa,
2:04:17se une más al represor, se despega el
2:04:19represor y hay más permeaza, más lactosa
2:04:22entra, más se sintetiza. Eso es un look
2:04:25de retroalimentación positiva.
2:04:27Claro, mi pregunta era eso, o sea,
2:04:28existe una retroalimentación
2:04:30positiva.
2:04:31Claro,
2:04:31exactamente. Sí, hay un feedback
2:04:33positivo o un ciclo de retroalimentación
2:04:35positivo cuando hay lactose.
2:04:38Claro. Y ahí es simplemente que se acabe
2:04:39la lactosa. Cuando se acaba la lactosa
2:04:41se apaga.
2:04:42Claro. No hay otro factor que pueda
2:04:44reparar
2:04:45la glucosa.
2:04:49¿Entendieron lo de el retroalimentación
2:04:52positiva?
2:04:55Levanten la mano los que no entendieron.
2:05:05Eh, yón los dos contribluyen al promotor
2:05:08y a la secuencia de determinación o hay
2:05:10uno que no tiene
2:05:12la definición de qué?
2:05:13De operón y g
2:05:15el genuencia que puede ser transcrpta
2:05:18sin el promotor ni la secuencia
2:05:20para ser transcrita tiene que tener el
2:05:21promotor,
2:05:22¿okay? Pero no es el productor este si
2:05:24no tiene productor, eso no es su gente.
2:05:26Y el operón
2:05:28también es un múltiple gen porque es un
2:05:32policistrón,
2:05:33pero puedes tener un opón de un
2:05:35también.
2:05:36Y entonces en este caso porque el gen
2:05:39es el gen, este es un gen.
2:05:41Okay. O sea,
2:05:42el policistrón son como tres o un
2:05:44policistrón.
2:05:45Okay. Okay. Entonces, un operón puede
2:05:47ser un monosterrón o un policistón.
2:05:50lo mismo que
2:06:03Okay,
2:06:05okay. Bueno,
2:06:09voy a avanzar un poco más. ¿Tienen
2:06:11todavía?
2:06:13Bien.
2:06:17Losores
2:06:19estánados por
2:06:22todos eso
2:06:24no ya lo dije entre 150 y 200 y 300
2:06:29operones están regulados por el CRP en
2:06:32todos de utilización de azúcares
2:06:35alternativos o de procesos catabólicos
2:06:37que no son necesarios cuando hay
2:06:39glucosa.
2:06:42Okay. Bueno, acá vamos a ver la lógica.
2:06:48¿Se acuerdan que les hablé del operón
2:06:49triptojano?
2:06:51Así como hay opón triptojano, hay
2:06:52operónina, operón de distintas cosas
2:06:55para sintetizar montones de cosas, en
2:06:57especial todos los aminoácidos.
2:07:00¿Okay?
2:07:02Para sintetizar triptofano necesitamos
2:07:04los genes Trip E, D, C, D, A, ¿okay? que
2:07:08sintetizan todas estas enzimas que son
2:07:11necesarias para hacer criptófano. La
2:07:14célula no necesita criptofano si yo le
2:07:17doy criptofano.
2:07:20Si hay en el ambiente criptofano no lo
2:07:22va a necesitar activar al promotor, al
2:07:25al operón triptofano. Fíjense entonces
2:07:27cómo está hecho el promotor. Tiene el
2:07:30sitio -10 -35 y en el medio tiene una
2:07:33región verde que es el operador.
2:07:36Es otro operador, no es el del opero
2:07:38enlace. Okay. Este operador,
2:07:42¿para qué servirá?
2:07:44Para el represor delón,
2:07:46va a ver el represor del operón
2:07:48fistofano se va a unir a la región
2:07:51verde, ¿no? Y va a impedir que la
2:07:53polimerasa se una.
2:07:56¿Cuándo va a estar unido el perón el
2:07:58refresor? cuando haya crifano.
2:08:00Cuando haya criptofano,
2:08:02okay,
2:08:04se va a despegar cuando
2:08:08cuando no haya crifan.
2:08:10El operador es pura región dentro de su
2:08:12motor.
2:08:14Sí. No es todo el,
2:08:16no. El operador es la región donde se
2:08:18une el represor.
2:08:22Cuando no hay criptofano, la polimerasa
2:08:25se une y transcribe
2:08:28cuando hay triptofano.
2:08:30El criptofano se une al represor,
2:08:33que ahora puede unirse a la región verde
2:08:36y impide que se una poligrasa.
2:08:40también
2:08:44todos, todos, ¿no? Todo
2:08:48es alostérico, sí se une y no se puede
2:08:51unir la poligrasa. O sea, funciona al
2:08:54revés el operón l [resoplido] Este es un
2:08:59eh un operón inducible
2:09:04reprimible por criptofal.
2:09:07Sí, el operón la es inducible por
2:09:11alolactó y este es un promotor, un
2:09:15operón reprimible por criptofanato. Es
2:09:19muy común que las vías biosintéticas,
2:09:22como la de síntesis de criptofana, el
2:09:24producto de la vía biosintética
2:09:27reprima la síntesis de las enzimas.
2:09:33Esto es un ciclo de retroalimentación
2:09:35negativo, un feedback negativo por
2:09:38producto. El producto inhibe la síntesis
2:09:41de las enzimas.
2:09:43En muchos otros casos sí el producto
2:09:46puede ser que inhibal enzima en vez de
2:09:49diminuir la síntesis, depende de el
2:09:51organismo.
2:09:55Entonces la bacteria se ahorra la
2:09:58energía de sintetizar todas estas
2:10:00enzimas cuando hay criptofáis.
2:10:06¿Alguna pregunta?
2:10:09Entonces también eh lo propio producido
2:10:11por la célula se autoinhive.
2:10:14Exacto.
2:10:14Para regular que no haya tanto. Se tiene
2:10:16que acabar antes de que pueda volver a
2:10:20Lo que pasa que la bacteria cuando hace
2:10:22triptofano no va a limpir la síntesis
2:10:24triptofano porque lo va a usar para
2:10:25hacer proteínas. Es difícil de que sobre
2:10:28el triptofano.
2:10:34Preguntas.
2:10:43Acá entonces, eh el represor solo puede
2:10:46unirse al operador cuando está unido al
2:10:48correpresor.
2:10:50En este caso, el correpresor es el
2:10:52triptofano.
2:10:56En otras vías puede ser que sea el
2:10:57producto o justo la molécula antes del
2:10:59producto o algo. Sí.
2:11:05Operón arabinosa.
2:11:08Acá
2:11:10se lee Operón ainosa. La arabinosa es
2:11:13este azúcar, es una pentosa. Cinco
2:11:16azúcares. También la célula le gusta
2:11:20comerlo, pero no le gusta comerlo si hay
2:11:22glucosa.
2:11:24¿Okay? Te lo doy acá porque es un
2:11:27ejemplo de una lógica de regulación un
2:11:29poquitito más complicada y aparte en el
2:11:33práctico de plásmido van a transformar
2:11:35un plásmido que tiene el promotor
2:11:37arabinosa
2:11:39y lo van a hacer inducir ustedes para
2:11:42que se exprese una proteína fluorescente
2:11:44y lo van a ver. Entonces, yo les explico
2:11:46cómo funciona ese productor.
2:11:50¿Okay? Los genes estructurales, no le
2:11:53pusimos ese nombre. Los genes
2:11:55estructurales son los genes de lo que
2:11:57quiero hacer. Las enzimas para degradar
2:12:00a la lactosa, las enzimas para
2:12:02sintetizar criptófano o las enzimas para
2:12:05degradar la arabinosa. Ara A, ara B y
2:12:08ara B. Esos genes son los genes
2:12:11estructurales, los del operón, los del
2:12:14policistrón.
2:12:17Okay. Entonces, este es el policistrón y
2:12:19este es el promotor de el arabinosa. Sí,
2:12:24promotor Arabad se llama
2:12:29BAD Bad, promotor de Arab.
2:12:34Okay.
2:12:35Y acá tienen al represor, al regulador
2:12:39en este caso, si del operón que se llama
2:12:42ARA C.
2:12:45Arac, un mensajero y se hace el monómero
2:12:48Arac.
2:12:51Okay,
2:12:54me siguen
2:12:56bien. A el promotor de Arac va para allá
2:13:00y el promotor de Ara va para allá.
2:13:03Okay, quiere decir que son hebras,
2:13:05distinta hebra es la hebra molde y la
2:13:07hebra cuificante
2:13:12y tiene sitio de unión cap. Cap es el
2:13:16CRP.
2:13:18Acá, ¿quién se va a unir?
2:13:20El CRP con el cíclico. Es decir, que
2:13:23cuando haya glucosa esto no se va a unir
2:13:26y él no va a poder andar el promotor.
2:13:28Okay. Y acá tienen los sitios para el
2:13:32regulador. Ara uno, ara dos y y ara O2.
2:13:37Ahora vamos a ver cómo funciona esto.
2:13:38O1, o dos y A1, I1 y 2.
2:13:43Okay. Cuatro sitios de unión.
2:13:47[carraspeo]
2:13:48Cuando no hay aravinosa
2:13:50funciona parecido al del operón la ¿Qué
2:13:52pasa? Se forma un dimero
2:13:56que se une a ara I1,
2:14:00que hace un loop, impide que la
2:14:02polimerasa se una.
2:14:05Okay.
2:14:10Este este digamos, ¿no?
2:14:13Este loop hace que la polimeraza no se
2:14:14puede unir y para allá no hay
2:14:15transcripción.
2:14:21Pero es como que la caca del lado
2:14:23contrario tiene que transcribir o no
2:14:28es que acá está el cap. sin el cap no
2:14:30anda y esta zona de acá es donde se
2:14:31tiene que unir la polimeraza. La
2:14:33polimeraza no se puede unir acá y no
2:14:35puede ser ayudado por el cap. Entonces
2:14:37acá ni está el cap. Acá falta la lo de
2:14:40la glucosa, ¿no? Pero con esto cerrado
2:14:42acá, la colerasa acá no se puede unir y
2:14:44no anda el productor
2:14:51con arabinosa. Fíjense lo que pasa con
2:14:54este dimero. Cambia de forma. Sí. Se
2:14:56transforma en esto de acá.
2:14:59se da vuelta, la arabinosa se une a este
2:15:01a este lugar acá y acá forman esta
2:15:05estructura y permite que el dimero se
2:15:07doble. En vez de estar así, se dobla así
2:15:10y ahora se puede unir a estos otros
2:15:12lugares.
2:15:14Sí, se une ara I1 y Ara I2. No hace más
2:15:17el loop, deja que se une el cap con el
2:15:20cíclico y ahora esto permite que la
2:15:23polimerasa se una y transcriba.
2:15:26Esta
2:15:36slide obviamente ustedes la van a tener,
2:15:38la pueden leer en su casa tranquilos.
2:15:40Sí, lo que pasa es algo parecido a lo
2:15:43que vimos del operón LAAC. En el operón
2:15:44LAC lo que pasaba era que sin lactosa
2:15:47formaba el looping, impedía que se unga
2:15:48la polimerasa y con el inductor se
2:15:51despegaba.
2:15:53Ahora, en vez de despegarse se une en
2:15:55otro lado y ayuda a la prostricción. El
2:15:58represor se transforma en inductor.
2:16:02En vez de ser un represor que se
2:16:04inactiva por el inductor, como en el
2:16:06caso del otro lado, ahora el represor
2:16:10cambia de forma y se transforma en algo
2:16:13que impedía la transcripción, en algo
2:16:15que ayuda a la transcripción.
2:16:19¿Okay? Es decir, que una molécula que
2:16:21tenía un efecto negativo,
2:16:23agrego el inductor y se transforma en
2:16:25una molécula que tiene un efecto
2:16:27positivo.
2:16:30Esto es lo que va a estar pasando en las
2:16:31bacterias en el TP que hagan ustedes
2:16:35cuando le pongan la ravinosa y le saquen
2:16:38la glucosa,
2:16:39¿no? ¿Para qué? Para que sacarle la
2:16:42glucosa para que se pueda unir el CRP
2:16:46AMP cíclico que acá dice KP cíclico.
2:16:48¿Está bien?
2:16:55Eso, el represor se hace inductor.
2:17:00Okay,
2:17:03ahora vamos a hacer unos ejercicios de
2:17:05lo que no.
2:17:09Tenemos que ver el fenotipo, es decir,
2:17:12la actividad de betagal con estos
2:17:15genotipos.
2:17:17El genotipo es lo que tengo en el genoma
2:17:21más lo que tengo en el plácido.
2:17:26Y me tengo que decir si va a estar
2:17:27inducido,
2:17:29si va, si está no inducido o está
2:17:31inducido. Es decir, si le pongo el
2:17:33inductor, ¿sí? si va a haber actividad
2:17:37de betagal, si no hay plásmido o sí hay
2:17:40plásmido.
2:17:43¿Se entiende?
2:17:47A ver, el primero, ¿qué tiene el
2:17:50cromosoma?
2:17:52La Q más. ¿Qué quiere decir eso?
2:17:54O sea, que está es vuelta.
2:17:56La Q es el represor, está normal más
2:18:01quiere decir que está normal. El
2:18:02promotor está normal.
2:18:05Pero tiene el operador constitutivo, ¿se
2:18:08acuerdan del operador constitutivo? El
2:18:09que no une represor
2:18:13y Z-. ¿Qué quiere decir Z-? Betagalactos
2:18:17mutante no funcional. Si voy a medir
2:18:20actividad de Tagal, esta va a servir,
2:18:23no va a servir.
2:18:25Ya en el plásmido pongo un plásmido que
2:18:28tiene mutado el represor, promotor
2:18:32normal, operador normal y betagal
2:18:34normal.
2:18:36La pregunta es, sin plástmido, sin IPT,
2:18:40¿va a haber actividad de betagal?
2:18:43No.
2:18:44¿Por qué?
2:18:46Betagal. Porque no hay betagal, pero se
2:18:48va a transcribir.
2:18:51Se va a transcribir,
2:18:53pero no va a haber actividad.
2:18:57Con plasmido
2:19:01va a haber o no va a haber.
2:19:10¿Por qué
2:19:11el negativo?
2:19:13Este tiene el lag negativo. ¿Cuál? T la
2:19:16negativo
2:19:17y entonces
2:19:22la negativo quiere decir que no le anda
2:19:24al represor,
2:19:26no tiene represor el plácido,
2:19:30pero tiene betagal normal.
2:19:32Se va a transcribir este operón.
2:19:34Ah, pero está el represor del otro.
2:19:36Está el represor del otro.
2:19:38Se va a transcribir,
2:19:39¿no?
2:19:40¿Por qué no? Porque está el represor
2:19:42actual
2:19:43y y no hay inductor.
2:19:45[carraspeo]
2:19:47No hay inductor. Ahora con inductor
2:19:51sin pláido,
2:19:53¿no? Porque la betagal está mutada.
2:19:56Entonces tienen que supon supóng que
2:19:58tienen que resolver este problema el
2:20:00parcial.
2:20:01Lo que tienen que hacer es justificar
2:20:04en cada un no y sí que digan por qué.
2:20:08Si no justifican, no vale nada la
2:20:10respuesta, aunque sea correcta, porque
2:20:12nosotros no sabemos si ustedes la saben
2:20:14o no.
2:20:15Okay. Entonces, tienen que justificar.
2:20:18Acá no hay actividad porque sin plásmido
2:20:20la única betagal que hay es mutante. Sí.
2:20:24[carraspeo] Y aparte el operador está
2:20:26constitutivo, se transcide todo el
2:20:27tiempo, pero algo que no tiene
2:20:29actividad. Ahora, cuando pongo plásmido,
2:20:32¿qué va a pasar?
2:20:34El promotor anda bien, el operador anda
2:20:36bien y como está inducido se despega el
2:20:38represor y como la beta gal es normal
2:20:40hay actividad de carga.
2:20:45Hacemos uno más.
2:20:48Tengo una duda respecto a a lo a lo que
2:20:51no
2:20:53entiendo el juego. En este caso,
2:20:56si no te dice nada quiere decir que está
2:20:59hecho sin glucosa.
2:21:01Ahora, si yo te digo esto tenía glucosa,
2:21:04bueno, no va a haber nada de nada.
2:21:06El para detectar glucosa. En ese caso,
2:21:09todo.
2:21:11Claro.
2:21:12Ah,
2:21:12pero no te lo estoy diciendo nada acá
2:21:13sobre el tema del CRP. No dice nada. No
2:21:16dice nada. Quiere decir que el sitio de
2:21:18unión de CRP está normal. Para entender,
2:21:21había entendido de el cap es para la de
2:21:24la mucosis.
2:21:27Acá en este, ¿qué pasa acá?
2:21:31¿Por qué no hay betagalla?
2:21:34¿Qué tengo la K promotor w typ? Este
2:21:36está todo normal
2:21:39y este tiene el represor super represor
2:21:43y una betagal que no funciona.
2:21:46Entonces va a haber actividades,
2:21:52pero el superpresor está en el plasmo.
2:21:56Solo el superrepresor importa acá y acá.
2:22:03eh
2:22:06no está inducido, entonces está
2:22:08reprimido, entonces no hay actividad
2:22:10porque el operador está bien. Como el
2:22:13operador está bien y no está inducido y
2:22:15hay un represor tanto normal como
2:22:16superrepresor,
2:22:19¿okay? No va a haber nada. En cambio acá
2:22:21sin plásmido, como el operón la que está
2:22:23normal, sí va a haber actividad,
2:22:25pero con el represor presente, ¿cómo es
2:22:28que logra haber actividad? no está
2:22:30presente porque es sin plásmido.
2:22:33En cambio, con plásmido, como está el
2:22:35superrepresor, no hay espí.
2:22:39Pero, ¿por qué del plasmido inhibe?
2:22:44Seosoma. Ah, porque se actúa en el
2:22:47trans.
2:22:48Porque actúa en el trans. Sí. Acá el
2:22:51superrepresor
2:22:52actúa sobre este operador y no importa
2:22:54si está inducido, lo va a reprimir
2:22:56igual.
2:22:57Okay.
2:23:01Bueno, e acá dice, ¿ven que dice ZCRM?
2:23:07Es una mutante de la betagalactocidasa
2:23:08que no tiene actividad, pero la proteína
2:23:11está, entonces puede ser detectada por
2:23:12anticuerpos, ¿se acuerdan el western?
2:23:16Entonces, si yo en vez de medir
2:23:17actividad miera por western,
2:23:21sí podría ver si se expresa la proteína.
2:23:25En la anticuerpo reconoce tanto la CRM
2:23:27como la Z = Pero, ¿cuál es la diferencia
2:23:31entre la Z- y la Z?
2:23:33La Z- es un mutante que no se sintetiza
2:23:35la proteína. Ah,
2:23:37por ejemplo, tiene un codón stop al
2:23:39principio de la proteína.
2:23:42En cambio, este es tiene mutado el sitio
2:23:45activo, pero la proteína se hace igual.
2:23:50Entonces ustedes pueden ser que le
2:23:52pregunten, bueno, ahora no vamos a
2:23:54detectar actividad, vamos a detectar la
2:23:56proteína. En este caso, ¿se detecta la
2:23:58proteína? En algún caso,
2:24:01actividad, ¿no? Pero proteína.
2:24:04¿En qué caso de acá hay proteína
2:24:06detectable?
2:24:10Empecemos
2:24:14por este.
2:24:17Este tiene superrepresor, promotor
2:24:19normal, operador constitutivo y ZCRM.
2:24:24¿Qué quiere decir superrepresor?
2:24:30siempre va a estar unido a los
2:24:32operadores a menos que sean operadores
2:24:36que no reconocen al al represor.
2:24:40El OC no reconoce al represor, ni al
2:24:43normal ni al superrepresor.
2:24:46Entonces, hay transcripción,
2:24:48¿no? Eh, sí, sí.
2:24:50Cuando está inducido,
2:24:52siempre,
2:24:53siempre. Entonces, acá voy a detectar
2:24:55proteína por Western block.
2:24:57Sí. En todos los casos
2:25:01todos lo ven.
2:25:07El superrepresor no une aluctor,
2:25:11pero lo demás es normal. Claro,
2:25:13constitutivo
2:25:14se une al represo.
2:25:16No se une al represor,
2:25:17ningún tipo represor.
2:25:18No, el operador constitutivo quiere
2:25:19decir eso.
2:25:20Okay.
2:25:25Porque la proteína de esta CRM e no
2:25:29tiene actividad.
2:25:34es una mutante que no tiene actividad,
2:25:36pero el anticuerpo la detecta porque
2:25:38está la anticuerpo la reconoce, solo que
2:25:41no se activa,
2:25:46¿entienden este caso entonces? Y este
2:25:51la Q menos
2:25:54promotor normal, operador normal, ZCRM.
2:25:59Sí. Laqu promotor normal, operador
2:26:02normal. ¿Qué pasa acá? Sin pláido hay
2:26:06proteína.
2:26:08Sí.
2:26:08¿Por qué?
2:26:10Porque no funciona el
2:26:18Entonces se sintetiza
2:26:20todo el tiempo constitutivamente. CR.
2:26:22Entonces sí, cuando pongo el plásmido,
2:26:25¿qué pasa?
2:26:28No hay. ¿Por qué? Porque el represor
2:26:31reprime acá y reprime acá porque actúa
2:26:32en trans.
2:26:36¿Cómo?
2:26:37Y que no está inducido.
2:26:39Bien. Entonces, acá no va a haber
2:26:40proteína y acá está inducido,
2:26:43va a haber proteína igual y acá a ver
2:26:47también va a estar inducido porque el
2:26:49represor es normal, se despega y hay
2:26:52transcripciones.
2:26:54Okay.
2:26:57Bueno,
2:26:59perfecto. dejamos acá.

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