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Seminario 5 Regulación de la expresión génica II - Sebastian Giusti — Transcript

by Biología Molecular y Genética FMED - UBA · 6,786 words · 1,237 segments · language en · Watch on YouTube

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0:02En la clase de hoy vamos a analizar la
0:04segunda parte de la unidad conceptual
0:07que trata sobre la regulación de la
0:09expresión génica. Y en esta clase nos
0:11focalizaremos en los niveles
0:13postranscripcional, traduccional y
0:17posttraduccional. Para comprender mejor
0:20cuál es el foco de la clase y qué es lo
0:22que suma esta clase número cinco a la
0:27clase
0:28anterior, hagamos una breve
0:30recapitulación de lo que hemos visto
0:32respecto de la regulación de la
0:34expresión génica. En la clase anterior
0:37nos focalizamos en aquellos pasos
0:41iniciales de la expresión
0:44génica. En particular vimos como el
0:48grado de condensación de la cromatina
0:50regula la accesibilidad de la maquinaria
0:53transcripcional y a esta a los
0:56mecanismos que controlan el grado de
0:58condensación de la cromatina. Los
0:59denominamos en su conjunto regulaciones
1:02pretranscripcionales y también vimos los
1:05mecanismos que regulan el inicio y la
1:08frecuencia de la transcripción
1:13misma. Estos
1:15mecanismos eh los explicamos en términos
1:20moleculares mediante un conjunto de
1:22elementos entre los cuales se destacan
1:25el rol de los factores específicos de la
1:27transcripción.
1:29Estas proteínas que tienen la capacidad
1:31de unirse al ADN en conjunto con otras
1:35proteínas que se unen a ellos
1:37denominados
1:39correguladores, pueden reclutar a sitios
1:41específicos del genoma a modificadores
1:44epigenéticos, por ejemplo, complejos
1:47modificadores de histonas que las pueden
1:50acetilar, desacetilar, metilar o
1:53desmetilar y complejos remodeladores de
1:55la cromatina que pueden movilizar
1:57algunos núcleos
1:59exponiendo segmentos específicos del
2:01ADN.
2:03Dependiendo de si el sitio a donde se
2:05unieron estos factores específicos de la
2:07transcripción, sean potenciadores o
2:10enhancers por un lado o silenciadores
2:13por otro, tendrán un efecto positivo o
2:16negativo sobre la formación del complejo
2:19del inicio de la transcripción y
2:21aumentarán o disminuirán respectivamente
2:24la
2:25frecuencia de inicio de la
2:28transcripción. Recordemos que la RN
2:30polimerasa
2:322 no solo necesita reconocer
2:35molecularmente el promotor
2:38teniendo la zona de la cromatina laxa en
2:41el sitio del promotor de un gen
2:43determinado, sino que necesita de
2:46señales moleculares adicionales para
2:49pasar de ese estado inactivo, aunque
2:52posicionado en el promotor, a un estado
2:55activo. En síntesis, estos procesos que
2:58analizamos la clase anterior nos
3:01permitían pensar en un aspecto
3:04particular de la regulación de la
3:06expresión
3:07génica, aquel en donde lo que se está
3:10regulando es el nivel, es decir, la
3:14cantidad de un producto
3:16génico. El resultado de esos procesos
3:19era si un gen se iba a expresar o no y
3:21cuál era
3:22la frecuencia con la que ese gen iba a
3:26transcribirse, impactando en la cantidad
3:28del producto
3:30génico. A diferencia de eso, vamos a
3:33complejizar algunas cuestiones en el
3:36seminario de hoy. En primer lugar, vamos
3:40a analizar algunos puntos diferentes de
3:43la regulación de la expresión génica
3:45posteriores a la producción.
3:48Eh, al inicio de la
3:50transcripción, por ejemplo, vamos a
3:53analizar los mecanismos de procesamiento
3:56de la RN y su exportación al citosol.
3:59Vamos a estudiar con cierto detalle los
4:01mecanismos que regulan la
4:03estabilidad del RN y finalmente vamos a
4:07estudiar mecanismos que regulan la
4:09estabilidad y la actividad de las
4:12proteínas. Esta clase va a estar
4:15focalizada
4:17en aquellos genes que codifican para
4:20proteínas. Es decir, que los ARN cuyo
4:23procesamiento y regulación vamos a
4:25analizar son fundamentalmente ARNs
4:29mensajeros.
4:34Me gustaría subrayar, ya que vamos a
4:37analizar con bastante detalle algunos
4:41mecanismos centrados en las moléculas de
4:43ARN, algunas propiedades biológicas de
4:47estas moléculas que las distinguen de
4:49otras biomoléculas de las células como
4:50las proteínas y el ADN.
4:54En primer lugar, a diferencia de la
4:57molécula de de las moléculas de ADN, que
4:59son muy estables, las moléculas de ARN
5:02son lábiles. Esto significa que se
5:05degradan con
5:06facilidad, tanto dentro de la célula
5:09como por fuera cuando se hace un
5:11procedimiento experimental de extracción
5:13de ARN de las células.
5:16Por fuera de las células, las moléculas
5:18de ARN son muy sensibles, se degradan
5:21con facilidad ante cambios en el pH y la
5:23temperatura, por ejemplo. Y dentro del
5:26interior de las
5:28células son sustrato de un conjunto
5:32amplio de enzimas dentro de las células
5:35que se
5:36denominan eh nucleasas de ARN. Estas
5:40nucleas pueden ser exonucleas, es decir,
5:44pueden degradar a las moléculas de RN a
5:47partir de sus extremos. Hm.
5:50despolimerizando los ribonucleótidos que
5:53las
5:54constituyen. Y estas son las enzimas más
5:57abundantes, pero también hay algunas
5:59endonucleas, es decir, enzimas que
6:01pueden romper los enlaces entre los
6:06nucleótidos, los enlaces fosfodiéster
6:08entre los
6:09nucleótidos, aún por fuera de los
6:11extremos de las moléculas.
6:15Otra propiedad de las moléculas de ARN
6:18es que si bien en los libros de texto
6:21tendemos a
6:23eh tienden a ser representadas de manera
6:26lineal
6:30huciones acuosas y dentro de las
6:32células, las moléculas de RN adoptan
6:35conformaciones tridimensionales
6:37complejas. Y esta aquí vemos en esta
6:40diapositiva un ejemplo de un ARN lineal.
6:44pero que ha adoptado esta configuración
6:46tridimensional compleja, formando, por
6:49ejemplo, enlaces
6:52complementarios hm en intracatenarios,
6:56en aquellos sectores en donde se forman
6:58esos enlaces intracatenarios. Hm. Por
7:01ejemplo, las adeninas eh de una molécula
7:05de ARN lineal pueden formar enlaces
7:08complementarios con uracilos presentes
7:11en otra parte de la molécula y así
7:14sucesivamente. Y aquellos tractos en
7:17donde se forman estas enlaces
7:19complementarios tienden a adoptar una
7:21forma
7:22hiloidal. Esta propiedad de adoptar una
7:25forma tridimensional compleja nos
7:28permite comprender cómo dentro de la
7:30célula se produce un reconocimiento
7:32específico entre las moléculas de ARN y
7:36las de otras proteínas. Hm. Recordemos,
7:39por ejemplo, que el reconocimiento
7:40molecular proteína a proteína se basa en
7:43la complementariedad de formas
7:46tridimensionales. Hm. Un ejemplo es la
7:49complementaridad que existe entre muchas
7:51enzimas y su sustrato. Algo análogo,
7:54esta complementaridad tridimensional
7:56también se da entre proteínas que tienen
7:58la capacidad de unirse a determinados
8:01ARNs y la forma tridimensional
8:03particular de estos.
8:06Pero no solo las moléculas de ARN tienen
8:09la capacidad de unirse a proteínas
8:12específicas gracias a esta forma
8:14tridimensional que poseen, sino que
8:18también pueden unirse a otros ARNs o a
8:23moléculas de ADN mediante
8:25complementariedad de bases. Es decir,
8:28dos principios físicoquímicos distintos
8:31permiten a las moléculas de RN reconocer
8:35molecularmente, por un lado, las
8:37proteínas y, por otro lado, a otros
8:40ácidos
8:41nucleicos. Analicemos en primer lugar el
8:44procesamiento del ARN mensajero
8:47eucariota.
8:48Se denomina procesamiento o maduración
8:51de la RN al conjunto de modificaciones
8:53que sufre el transcripto primario, el
8:56producto de la transcripción de la RN
8:58polimerasa 2, hasta convertirse en el
9:00transcripto maduro, que es el ARN
9:03mensajero, listo para ser exportado al
9:05citosol.
9:07Este procesamiento consta de tres pasos
9:11moleculares. La modificación del extremo
9:145 prima de la RN. El extremo CCO prima
9:18es está ubicado en el primer nucleótido
9:22que introduce la RN polimerasa en el
9:26transcripto en producción.
9:31Luego el corte y empalme de exones, un
9:34proceso conocido por su nombre en inglés
9:36splicing y el y la modificación
9:39covalente del extremo 3 prima, que es el
9:43extremo final del ARN.
9:48A pesar de mencionarlos de manera
9:51secuencial, estos tres pasos moleculares
9:54del procesamiento de la RN eucariota no
9:57son posteriores a la producción del
10:00transcripto primario, sino que los
10:04hallazgos durante la década de los 80 y
10:08de los 90 en el ámbito de la
10:10investigación permitieron determinar que
10:13todos estos pasos moleculares de
10:14procesamiento sonranscripcional.
10:17ionales ocurren al mismo tiempo que la
10:19RN polimerasa 2 está transcribiendo
10:22activamente el transcripto primario. En
10:26este esquema podemos observar el
10:29resultado de manera esquemática, el
10:32resultado de muchos años de
10:34investigación en donde pudo
10:35determinarse, por ejemplo, que las
10:37enzimas y proteínas que catalizan cada
10:40uno de estos pasos del procesamiento se
10:44encuentran asociadas efectivamente a
10:48sectores de la RN polimerasa, por
10:50ejemplo, las enzimas. Aquí podemos ver a
10:53las enzimas que van a realizar el
10:54proceso de capping y a las enzimas que
10:58van a ser eh el procesamiento de
11:03splicing y a las que van a modificar al
11:05extremo tres prima asociadas al dominio
11:08carboxiterminal fosforilado, que era
11:10característico de una RN polimerasa en
11:14activa transcripción.
11:17Comencemos entonces con el primero de
11:19estos procesos, la modificación del
11:21extremo 5 prima que se denomina capping
11:24en inglés o agregado de la caperusa en
11:27español. Es una modificación covalente
11:30de uno de los extremos de la
11:32RN. Observamos en el sector izquierdo de
11:35la diapositiva la representación
11:37molecular en vertical y en celeste de un
11:40ARN mensajero. Hm.
11:43El primer nucleótido, el extremo 5
11:48prima, resultará ser modificado por el
11:50agregado, por la unión covalente de un
11:52nucleótido modificado, pero que a
11:54diferencia del resto de los nucleótidos
11:56que se unen en un sentido 5 prima, tres
11:59prima, es decir, con una vinculación
12:03entre carbonos particulares de los
12:06azúcares de los ribos nucleótidos.
12:10En el caso del CAP, la unión es 5 prima
12:14a CCO prima. Hm. Y otra alteración
12:18respecto de los nucleótidos usuales es
12:20que este nucleótido, que es una
12:21guancina, se encuentra metilada en una
12:24posición particular de su anillo
12:26nitrogenado. Hm.
12:31Los
12:35transcript de siete metil guanoina
12:38pueden ser reconocidos molecularmente
12:40por un conjunto de proteínas denominadas
12:43complejos de unión a la caperusa. CBC
12:47por sus siglas en inglés, cap binding
12:49complex.
12:51Y el efecto que tiene el agregado de
12:54esta armazón proteico en el extremo
12:57cinco prima del mensajero es proteger
13:00ese extremo de la degradación por las
13:02abundantes exonucleas dentro de la
13:05célula y también, como veremos en breve,
13:09permitirá la correcta exportación del
13:11ARN a través de los poros nucleares y
13:15posteriormente también participará del
13:17reconocimiento de la maquinaria de la
13:19traducción.
13:24H analicemos la modificación del otro
13:27extremo del transcripto primario, del
13:30extremo final.
13:33H dentro de la secuencia génica que está
13:36transcribiendo la RN polimerasa, aquí
13:39podemos ver en celeste el transcripto
13:43primario que está siendo producido por
13:45la RN
13:47polimerasa utilizando como molde las
13:50secuencias génicas. Dentro de la
13:52secuencia génica que va a transcribir la
13:54RN polimerasa, hay una secuencia que
13:56quedará plasmada en el
13:59ARN del transcripto, que es A a Aa U a A
14:05a
14:05Aa. Esta secuencia de
14:10ribonucleótidos es una señal de corte y
14:14poliadenilación que será reconocido por
14:16enzimas que estaban viajando en el
14:18dominio CTD fosforilado de la RNA
14:21polimerasa y van a catalizar un
14:25corte un clivaje del transcripto
14:29primario que está siendo producido por
14:31la RN polimerasa.
14:34La RN polimerasa seguirá transcribiendo
14:37algunos eh cientos de nucleótidos más,
14:40pero ese ARN adicional que genere la
14:42polimerasa es frecuentemente
14:45degradado. Ahora bien, luego que se
14:48produce el corte o clivaje justo por
14:50debajo de esta secuencia de clivaje y
14:54poladenilación, otra enzima
14:57denominada eh
14:59poliapolimerasa va a adicionar cientos
15:03de nucleótidos de adenina en este
15:05extremo final del transcripto. Notemos
15:09entonces que esta cola de polia, este
15:11tracto de adeninas, no estaba codificada
15:14en el genoma, sino que es agregado por
15:16una enzima que polimeriza en ausencia de
15:19molde.
15:22Está tracto de cientos de moléculas de
15:25adenina es reconocido por un conjunto de
15:27proteínas denominadas proteínas de unión
15:30a la poli o polie binding proteins que
15:34nuevamente protegen ahora el extremo
15:37tres prima de la acción de
15:40exonucleas y van a permitir la correcta
15:43exportación y el reconocimiento de la
15:45maquinaria transduccional, es decir,
15:48tanto la modificación del extremo 5
15:50prima como del extremo 3 prima convergen
15:53en las funciones que cumplen, aunque los
15:55mecanismos moleculares que las producen
15:58sean distintos.
16:01Analicemos ahora la última de
16:04las modificaciones eh de procesamiento
16:08que sufre el transcripto
16:11primario, el corte y empalme de exones o
16:16como se lo conoce en inglés splicing del
16:19RN
16:20mensajero. Para comprender este último
16:22tipo de procesamiento, debemos advertir
16:27que los genes eucariotas son
16:31discontinuos. Este hallazgo producido en
16:33la década de los 70 sorprendió a la
16:36comunidad científica que venía
16:38trabajando hasta ahora para comprender
16:40los mecanismos de expresión génica con
16:43sistemas procariotas en donde los genes
16:45son continuos. ¿Qué significa
16:48exactamente que los genes eucariotas
16:50sean discontinuos?
16:53Significa que las
16:55secuencias que están presentes en el
17:00transcripto maduro, en aquel que va a
17:02ser exportado el citosol, no se
17:04encuentran de manera continua y lineal
17:07en el genoma a partir del cual se
17:09produce el transcripto primario, sino
17:12que esas secuencias se encuentran
17:14fragmentadas y dispersas, interrumpidas,
17:17si se quiere, por otras
17:19secuencias de ADN. que no van a estar
17:23presentes en el transcripto final que va
17:26a ser exportado al
17:27citosol. Por convención, aquellas
17:30secuencias del ADN que finalmente
17:33estarán representadas en el transcripto
17:35maduro se las denomina exones. Y a las
17:39secuencias entre los exones que serán
17:42removidas durante el procesamiento y por
17:45ende estarán presentes en el transcripto
17:48maduro final, se las denomina intrones.
17:54Algo notable es que los exones suelen
17:58ser en general mucho más pequeños que
18:01los intrones. Hm. De modo tal que los
18:03exones representan una proporción
18:05minoritaria en la secuencia total de
18:11ADN. ¿Cómo es este proceso de remoción
18:15de intrones?
18:18Es un proceso molecular que también fue
18:21comenzado que se comenzó a comprender
18:23durante la década de los 70, pero
18:25avanzaron las investigaciones a la
18:27década posterior para lograr descifrarlo
18:29de una manera más
18:31completa y debemos tener en cuenta para
18:34comprender lo que es un proceso
18:36altamente preciso en términos
18:38moleculares. Notemos que
18:41implica el clivaje, el corte de eh los
18:46enlaces covalentes en dos puntos de la
18:50secuencia del transcripto primario y la
18:53unión posteriormente de dos exones que
18:57estaban separados antes por un intrón.
19:01Notemos que si este proceso se
19:03produjera, por ejemplo, por un error
19:05molecular de un único nuucleótido, esto
19:08tendría
19:10consecuencias negativas para la célula,
19:12porque esto probablemente produciría una
19:15alteración en cómo se leen los codones
19:18en el proceso de la traducción, luego en
19:20el transcripto primario. Por eso, una
19:24pregunta que se hacía la comunidad
19:25científica durante los años 70 y 80 es,
19:29¿cuál es el proceso molecular que
19:31permite remover los intrones y unir los
19:34exones con tanta exactitud?
19:37Y parte de la respuesta es que se han
19:39encontrado que secuencias en el
19:43transcripto primario,
19:46hm, denominadas secuencias con senso del
19:48splicing, van a guiar a la maquinaria
19:51molecular que va a ejecutar estos pasos
19:53de corte y empalme. Estas secuencias con
19:57senso del splicing se ubican
19:59fundamentalmente en tres sectores.
20:06en aquella región que está en la
20:08interfaz entre el exón y el
20:11intrón, un sitio que está hacia el
20:14extremo 5 prima del
20:17transcripto. Lo llamaremos sitio dador
20:20del splicing o sitio 5 prima. Otra
20:23secuencia que está también en la
20:26interfaz entre el intron y el exón
20:29posterior, que denominaremos sitio
20:32aceptor del splicing o sitio 3 prima y
20:36nucleótidos que están en el interior del
20:38exón que se denominan sitio de
20:41ramificación. Hm.
20:44Estas secuencias, como yo les decía, van
20:47a reclutar a la maquinaria molecular que
20:50va a ejecutar los pasos de ruptura y
20:54formación de nuevos enlaces covalentes
20:57característicos del
21:00splicing. Justamente lo que se descubrió
21:03en los años 80 fue que esta maquinaria
21:06puede hacer este trabajo con enorme
21:08precisión por su composición molecular.
21:13Estamos hablando de un conjunto de
21:16proteínas asociadas a RN pequeños que en
21:20conjunto se denomina el
21:24spliciosoma. A las moléculas que se
21:26componen por ARNs y proteínas que forman
21:29un complejo funcional entre ARns y
21:32proteínas, se las conoce como
21:35ribonucleoproteínas y es un conjunto de
21:37ribonucleoproteínas las que conforman el
21:40spliciosoma.
21:42Hay un total de cinco
21:44ribonucleoproteínas. Cada una de ellas
21:47va a estar unida a un pequeño RN
21:50denominado ARN pequeño nuclear.
21:55Sns, por sus siglas en inglés, small
21:58nuclear arns. H.
22:03Aquí observamos, por ejemplo, una de
22:06estas
22:08ribonucleoproteínas h que por estar
22:12asociadas a RN pequeños se las denomina
22:15en inglés SN RNPs, small nuclear
22:19ribonucleo proteins. Y en la jerga de la
22:22investigación científica, como es una
22:24palabra difícil de leer porque no tiene
22:26vocalas, se la llama
22:30snorps. Entonces, podemos decir que el
22:32espliciosoma está compuesto de cinco
22:35snurps, cada uno de ellos compuesto por
22:38sub unidades proteicas y uno de estos
22:40cinco ARN pequeños
22:45nucleares. El
22:47reconocimiento entonces de la secuencia
22:49consenso que está entre los exones y los
22:52intrones y del sitio de ramificación es
22:55producido por complementariedad de bases
22:57entre los ARNs pequeños que forman parte
23:01de las subunidades del
23:03espliciosoma. Y también veremos que la
23:05interacción entre las subunidades del
23:08esplayosoma entre sí también van a estar
23:10mediadas por reconocimiento, por
23:12complementariedad de bases de los ARN
23:15pequeños. entre
23:18sí. Analicemos un poco más en detalle
23:21cuáles son los mecanismos moleculares
23:23que ejecutan estas ribonucleos
23:26proteínas, es decir, el
23:28spliciosoma. Cada evento de splicing,
23:31como hemos conceptualizado, remueve un
23:34intrón e involucra dos reacciones
23:37secuenciales de corte eh y formación de
23:41nuevos enlaces covalentes conocidas como
23:44transesterificaciones. Hm.
23:46En un primer momento, distintas
23:49subunidades del pladiciosoma, distintas
23:53ribonucleoproteínas reconocen los
23:55distintos sitios con censo, uno el sitio
23:58dador del splicing, otro el sitio de
24:01ramificación y la primera ruptura y
24:04formación de enlaces covalentes se da
24:06aquí, en
24:08donde un nucleótido particular en el
24:11sitio de ramificación forma un enlace
24:13covalente con el nucleótido que estaba
24:17en la transición entre un exón y un
24:19intrón en el sitio dador de splicing.
24:22Esto involucrará una ruptura previa de
24:25este enlace y la formación de un enlace
24:27covalente. Un segundo. Esto generará
24:30esta esta primera reacción genera un
24:32pequeño
24:34lazo en el punto de ramificación. Luego,
24:38la segunda transestificación se dará
24:41entre el extremo hidroxilo libre que
24:43quedó en el
24:44exón eh anterior y el límite exxón
24:50intrón posterior. Esta es la segunda
24:53transestificación que produce el
24:55splazoma. Estas reacciones están
24:58catalizadas
24:59enzimáticamente y algo notable es que
25:02esa actividad enzimática no es no está
25:05producida por las proteínas del
25:08esplicosoma, sino que está catalizada
25:10por los ARN pequeños
25:13mismos. Y esta fue una de las primeros
25:15descubrimientos de que los moléculas de
25:18ARN también pueden funcionar como
25:20catalizadores biológicos o ribocimas.
25:24Finalmente, entonces, como consecuencia
25:26de la remoción de este intron, eh el
25:29intrón queda en forma de lazo y luego se
25:31degradará en el interior del núcleo y en
25:34el sitio en donde se produjo el empalme
25:37de los dos hexones que antes estaban
25:39separados por un intrón y ahora quedaron
25:43continuos, queda un residuo proteico,
25:45¿si? una modificación proteica alrededor
25:48de ese sitio en donde se produjo el
25:49splicing, aquí representado en el
25:51esquema con un pequeño cuadrado rojo que
25:53se denomina complejo de unión a exones.
25:57Hm. Recordemos a este componente
25:59molecular porque cumplirá una función
26:02que analizaremos
26:06posteriormente. Si bien el splicing se
26:09produce cada vez que se transcribe
26:12cualquier
26:13ARN eucariota y en particular cualquier
26:16ARN
26:18humano, se ha podido identificar que
26:20este proceso no ocurre exactamente del
26:23mismo modo para el mismo transcripto en
26:26distintos tejidos en los que este gen se
26:29exprese o en distintos momentos del
26:32desarrollo. Por ejemplo, se ha visto que
26:36ciertas secuencias que, por ejemplo,
26:39pensemos en esta representación en donde
26:43tenemos un gen eucariota discontinuo
26:46compuesto por cinco hexones. Y
26:49focalicémonos en el exon número tres. Lo
26:52que se ha observado es que este gen
26:55cuando se expresa en ciertos
26:57tejidos, esta secuencia que denominamos
27:00exón se comporta como tal y está
27:02presente en ARN mensajero maduro y
27:06contribuye, por ejemplo, con sus
27:09secuencias a la codificación de los
27:12aminoácidos que finalmente van a ser
27:14traducidos a partir de la misma. En
27:17tanto que cuando estos cuando este gen
27:20se expresa en otros tejidos, este
27:23secuencia ya no se comporta como un
27:25exón, sino que se comporta como un
27:27intrón y es removido. Hm. Y está ausente
27:31del transcripto primario. H el efecto
27:34final es que distintos tejidos generan
27:38isoformas de una misma proteína,
27:41variantes funcionales de una misma
27:44proteína.
27:46Veámoslo con un poco más de
27:52detalle. En el caso del gen de la
27:54tropimioina, como para poner un ejemplo,
27:56que seguramente es una proteína que
27:58seguramente quienes estén haciendo
28:00histología ya la han analizado porque
28:04cumple un rol en la contracción
28:06muscular.
28:09Sin embargo, este gen de la
28:10tropomicioina no se expresa únicamente
28:13en el músculo estriado, hm, sino que se
28:17expresa en otros tejidos. Y si uno
28:20compara cuáles son las secuencias que se
28:24comportan como exones en el músculo
28:27estriado, cuando uno compara con la
28:30secuencia del transcripto primario,
28:32notará que hay diferencias respecto de
28:34cuáles son las secuencias que se
28:35comportaron como exones en
28:37comparación con los transcriptos que se
28:40generan cuando este gen se expresa en el
28:44cerebro. Hm.
28:46Es decir, por un
28:50lado, el concepto de splicing
28:53alternativo nos ayuda a pensar en un
28:57mecanismo mediante el cual se aumenta la
28:59capacidad codificante del genoma, porque
29:02a partir de un mismo segmento de ADN
29:05pueden
29:06generarse distintos transcriptos
29:08primarios, seguramente en tejidos
29:10distintos o en distintos momentos del
29:12desarrollo que generarán isoforas de una
29:15misma
29:16proteína, pero también nos permite
29:20relativizar de alguna manera la
29:22definición de exón o intrón, h, ya que
29:26algunas secuencias se comportan como
29:29exones en algunos tejidos y en algunos
29:31contextos particulares del desarrollo,
29:33pero no se comportan como exones en
29:38otros. ¿Cómo se regula este splicing
29:42alternativo?
29:47Este splicing alternativo, primero antes
29:49de ver los mecanismos de
29:52regulación, me gustaría mencionar en qué
29:54consiste. No toda alteración del
29:56mecanismo de splicing ha sido observada
29:59empíricamente. La más lo más frecuente
30:02es que una secuencia que se comporta
30:04como un exón en ciertos tejidos se
30:07comporte como un intrón en otros. Y a
30:09este mecanismo se lo denomina salteo de
30:11exones. Hm.
30:13También se puede producir la retención
30:15de un intron, es decir, una secuencia
30:17que usualmente se comporta con como un
30:19intron, no sea removida en algunos
30:22tejidos. Hm. Y hay otros mecanismos
30:25adicionales que también han sido
30:27descrptos. La pregunta sería ahora,
30:30¿cuáles son los mecanismos moleculares
30:32que
30:33permiten que en distintos tejidos o en
30:36distintos momentos del
30:38desarrollo, a partir de la expresión del
30:40mismo gen, se generen estas formas
30:42alternativas de splicing?
30:46Para comprender estos mecanismos
30:49moleculares, volvamos a un concepto que
30:51hemos visto hace algunos
30:53minutos, la idea de las secuencias
30:56consenso del
30:58splicing. Que las secuencias sean
31:01consenso. Este nombre particular que le
31:04damos significa que no todas las
31:07secuencias que encontramos los límites
31:09entre los exones e intrones y las
31:12secuencias de los puntos de ramificación
31:14son exactamente idénticas en todos los
31:19exones e intrones en los distintos genes
31:21humanos, sino que hay un alto grado de
31:24similitud.
31:27Entonces, esto
31:29hace o ha podido observarse que algunas
31:33secuencias
31:34particulares tengan mayor capacidad para
31:37reclutar a la maquinaria del splicing,
31:40para reclutar a ese sitio al
31:43spliciosoma.
31:44A esas secuencias que tienen alta
31:46afinidad por el splicosoma, las
31:48denominados las denominamos secuencias
31:51fuertes de
31:53splicing. En tanto que variantes de
31:55estas secuencias consenso que tienen una
31:58menor capacidad para reclutar al
32:00pliciosoma y que necesitan de proteínas
32:03adicionales para producir efectivamente
32:05este reclutamiento, las denominamos
32:07secuencias débiles del
32:11splicing. Con esta
32:14consideración, veamos otro aspecto de
32:17este mecanismo de regulación, la
32:19existencia de proteínas reguladoras del
32:23splicing.
32:25Imaginemos e dos tejidos
32:27inicialmente en donde se expresa un
32:29mismo gen. Podríamos pensar en el
32:31ejemplo del gen de la
32:33tropomiosina en el músculo estriado
32:36esquelético, una célula del músculo
32:38estriado esquelético y una célula del
32:41tejido
32:42nervioso. Imaginemos que para un intrón
32:46particular, aquí representado en
32:48amarillo, posee secuencias fuertes de
32:51splicing, es decir, que por sí misma
32:55puede reclutar de manera efectiva al
32:57spliciosoma.
32:59Si en el primer tejido no hay ninguna
33:02proteína adicional que bloquee el
33:05reconocimiento de estos sitios fuertes
33:07de splicin, el splicosoma removerá el
33:10intron y este intrón se comportará como
33:12tal y no estará representado en el
33:15transcripto maduro. Pero si en un
33:17segundo tejido en donde este mismo gen
33:20se está expresando está presente una
33:23proteína que se une a uno de los sitios
33:25consensos del splicing,
33:27ocultándolo de su reconocimiento por el
33:30spliciosoma, este intrón no podrá ser
33:33removido y pasará a comportarse como un
33:36exón, es decir, estará presente en el
33:39transcripto primario final.
33:43Algo similar pero complementario,
33:45podemos pensar en otro ejemplo en donde
33:47tenemos un intron con secuencias débiles
33:50de splicing. Habíamos dicho que si hay
33:53secuencias con senso
33:55débiles, ellas mismas no pueden reclutar
33:58por sí mismas a la maquinaria de
33:59splicing y en ausencia en un tejido
34:02particular de proteínas adicionales que
34:04ayuden a este reclutamiento, este
34:06intrón no será removido y se comportará
34:09como un exón. estará presente en el
34:11transcripto maduro. En tanto que en un
34:14segundo tejido que contenga estas
34:15proteínas activadoras que permitan
34:18reclutar al espliciosoma, efectivamente
34:21se producirá el splicing. Hm. En otras
34:25palabras, la existencia del splicing
34:28alternativo se debe a que distintas
34:30células de distintos tejidos o en
34:33distintos momentos del desarrollo, el
34:35repertorio de proteínas reguladoras del
34:38splicing que hay en cada uno de estos
34:40tipos celulares difiere entre sí.
34:47Entonces, como consecuencia de estos
34:50tres pasos de procesamiento, la
34:53modificación del extremo 3 prima, del
34:55extremo 5 prima y el corte y empalme de
34:59exones, las secuencias que quedan
35:02presentes en el ARN mensajero maduro son
35:05las siguientes. En el extremo cinco
35:08prima estará el CAP o la
35:10caperusa, pero el primer
35:13nucleótido luego de la Caperusa, no es
35:17el nucleótido en donde la traducción va
35:21a comenzar, sino que hay una secuencia
35:23de nucleótidos previas al inicio de la
35:26traducción y a ese segmento que está
35:29presente en el ARN maduro y por
35:31endexónico se lo denomina región cinco
35:35prima no traducida.
35:37por sus siglas en inglés, región 5 prima
35:40UTR, untranslated
35:44region. Luego del codón que inicia la
35:48traducción, que es el codón AUG, que
35:51codifica para meteonina, está la
35:54secuencia codificante, la secuencia de
35:56codones que serán efectivamente
35:58traducidos hasta llegar a un codón stop.
36:03Pero luego del codon stop, el ARN
36:05mensajero maduro continúa y hay una
36:08secuencia no traducida, pero en el otro
36:11extremo que se que se la denomina región
36:153 prima
36:16UTR y que es previa al agregado de la
36:19cola de polía que fue producto de uno de
36:22los pasos de procesamiento. Son entonces
36:25estas secuencias las que están presentes
36:27en el ARN maduro. Y déjenme adelantarles
36:30que las regiones 5 prima UTR y 3 prima
36:34UTR cumplirán un rol fundamental en
36:38regular la estabilidad del transcripto
36:43primario. Sin
36:44embargo, esta representación idealizada
36:48del transcripto lineal no es lo que
36:50ocurre en el interior de las células,
36:53porque como hemos podido ver, los ARN se
36:56encuentran relacionados con una
36:58multiplicidad de proteínas que han ido
37:01adquiriendo a lo largo de su maduración.
37:05No solo tenemos a las proteínas de unión
37:07al CAP, el CAP Binding Complex por un
37:11lado y las proteínas de unión a la poli
37:14por el otro, sino que también tenemos
37:17otro repertorio de proteínas nucleares,
37:19entre ellas los complejos de unión
37:21exones en todos los puntos en donde se
37:24produjo un sitio de splicing. Todas
37:26estas conjunto de proteínas son
37:30necesarias para que se produzca la
37:32correcta exportación.
37:35del ARN mensajero maduro desde el núcleo
37:39en donde se produjo hacia el citosol a
37:42través de los poros nucleares en donde
37:44va a producirse el proceso de la
37:45traducción.
37:48También estas proteínas son necesarias
37:51para que se produzca la interacción con
37:55proteínas denominadas factores de
37:59iniciación de la traducción eucariotas H
38:02y que van a permitir el comienzo de la
38:05traducción del
38:07transco. En
38:09particular, aquí observamos a dos
38:12proteínas, dos factores del inicio de la
38:15traducción.
38:17que interactúan por un lado con el
38:20complejo de unión al CAP y por otro lado
38:23con las proteínas de unión a la cola de
38:26poli de modo tal que la
38:29configuración que permite la traducción
38:32del ARN mensajero es esta configuración
38:35circular.
38:39Esto, este aspecto particular, esta
38:41configuración particular de proteínas de
38:44unión a la RN que van a permitir su
38:46correcta exportación y
38:48traducción funciona en términos
38:50moleculares como un control de calidad
38:54de la expresión génica, ya que evita
38:57que, por ejemplo, si un ARN mensajero se
39:01rompe por un accidente molecular, se
39:03trunca, evita que esa región truncada
39:06sea exportada y traducida. Hm. Y este es
39:10otro sentido entonces en el que podemos
39:13pensar la regulación de la expresión
39:16génica, regulando el funcionando como un
39:20control de calidad de estos productos
39:22génicos.
39:25Una vez en el citosol, el ARN mensajero
39:28en esta configuración
39:30circular que está determinada por la
39:33interacción entre las proteínas que se
39:35unen a sus extremos y los factores del
39:37inicio de la traducción,
39:39permiten el ensamblaje de las
39:41subunidades de los ribosomas sobre el
39:44mensajero y la correcta traducción del
39:47mismo. En esta imagen, lo que puede
39:50observarse es algo frecuente en los ARN
39:53mensajeros maduros que han sido
39:55exportados correctamente, que comienzan
39:57a ser traducidos de manera simultánea
40:00por muchos
40:02ribosomas. Por supuesto, todos se
40:06ensamblan alrededor del codón de inicio
40:09de la traducción y luego avanzan. Hm. En
40:11donde uno puede ver de manera
40:13esquemática cómo va generándose la
40:15proteína. Hm. Cada vez más larga.
40:19A medida que los ribosomas avanzan el
40:21proceso de traducción.
40:27Un aspecto a considerar que forma parte
40:30de los mecanismos de control de calidad
40:32es el hecho de que cuando por una
40:37mutación, por ejemplo, aparece un codón
40:40stop prematuro en una proteína, esos
40:44ARNs son efectivamente degradados, no
40:47son traducidos generando una proteína
40:50más corta. Y para comprender el
40:52mecanismo por el cual se detectan los
40:56codones stop
40:58prematuros, vamos a analizar a un
41:01proceso
41:02denominado degradación de RN mensajero
41:05por secuencias de terminación prematura.
41:08Esto comúnmente se conoce, eh se lo
41:11nombra en inglés como nonsense mediated
41:13decay.
41:16Para comprender cómo funciona este
41:18mecanismo, debemos
41:21recordar, comparemos a un a la
41:24traducción pionera, es decir,
41:27al primer proceso de traducción cuando
41:30pase el primer ribosoma que va a
41:31traducir este
41:33RN en presencia o en ausencia de este
41:36codón stop adicional. Para que
41:38comprendamos esta representación,
41:40tenemos en la izquierda un transcripto
41:43normal en donde no se está representando
41:45su configuración circular para hacerlo
41:48más simple a la representación y en
41:51donde aquí en el último de los exones
41:55antes de la cola de polía se representa
41:57con este pequeña esfera el codón stop.
42:04Aquí
42:08tenemos en en el en un transcripto que
42:11ha adquirido por una mutación un codón
42:14stop prematuro, el codón stop natural y
42:17el codón stop extra producto de esa
42:21mutación.
42:22Como les decía, aquí está representado
42:25el ribosoma con sus subunidades 60s y
42:2840s. Lo que ocurre en condiciones
42:30fisiológicas es que cuando se produce la
42:34primera rueda de traducción, el ribosoma
42:37al pasar por el complejo de un exones,
42:40¿recuerdan que era ese complejo que
42:42quedaba unido en los empalmes entre dos
42:45sexones
42:48adyacentes,
42:50esto mantiene la estabilidad del
42:53transcript? Hm.
42:56En cambio, por ejemplo, cuando hay un
42:58codón stop temprano, el ribosoma va a
43:01despegarse al encontrarse un primer
43:04codón stop y no
43:06modificará a los complejos de unión
43:09exones que están en un punto posterior.
43:12Estos complejos de unión exones no
43:14modificados por esta primera rueda de
43:18traducción que tiene el transcripto,
43:22reclutarán exonucleas que van a inducir
43:25la degradación temprana del transcripto.
43:28Dicho de otro modo, usualmente se
43:31observa que codones stop tempranos,
43:34frecuentemente en exones previos al
43:37último, inducen este mecanismo de
43:39degradación temprana y esto conduce a
43:42que la célula no produzca proteínas
43:45truncas ni utilice recursos de
43:47traducción en proteínas no
43:51funcionales. Analicemos a continuación
43:53los mecanismos moleculares que regulan
43:56la estabilidad de los ARN mensajeros. en
43:58condiciones fisiológicas, es decir, en
44:01condiciones de ausencia de mutación.
44:07Ha podido determinarse experimentalmente
44:09que no todos los ARN
44:12mensajeros dentro de una célula tienen
44:14la misma duración en el tiempo. Algunos
44:17se degradan más rápido y otros se
44:19degradan más lento. Es decir, sus vidas
44:22medias, el término molecular que se
44:24utiliza para definir
44:26esto, puede ser un tiempo muy corto,
44:29durar solo unos pocos minutos. Y en ese
44:32caso diremos que esos ARNs mensajeros
44:34son
44:35inestables, en tanto que hay otros
44:38debidas medias muy largas que son muy
44:39estables. Por ejemplo, los ARNs
44:43mensajeros eh de proteínas que codifican
44:46proteínas que controlan el ciclo celular
44:48suelen ser ARN inestables. Tanto que los
44:51ARN mensajeros de proteínas abundantes
44:54que tienen importancia funcional,
44:56proteínas estructurales, por ejemplo,
44:59suelen tener vidas medias mucho más
45:02prolongadas. Esto permitió
45:05advertir que existen mecanismos dentro
45:08de las células que regulan de manera
45:11diferencial la degradación de algunos
45:15ARN versus otros. en particular pueden
45:18proteger a un subconjunto de ARN
45:20mensajeros de la acción de
45:22exodiendonucleas o exponer a otros a las
45:25mismas y regular así de manera
45:28diferencial estas vidas medias.
45:32Parte de los mecanismos moleculares que
45:35regulan esta estabilidad suelen ser
45:37generales. Por ejemplo, la existencia,
45:40como ya hemos visto, de complejos de
45:43unión a la caperusa o de proteínas de
45:46unión a la cola de polia. Pero también
45:48hay mecanismos que actúan de manera
45:50diferencial sobre los distintos
45:52transcriptos. Por ejemplo, pueden unirse
45:55a ellos, dependiendo de la forma
45:57tridimensional que adopten estos
45:59transcriptos, diferentes proteínas de
46:02unión
46:04ARN, RBPs, por sus siglas en inglés, RNA
46:08binding proteins. Y estas proteínas de
46:11unión a la RN pueden conferirle
46:14estabilidad o inestabilidad, ya sea si
46:17protejan o recluten al sitio del AN
46:21mensajero a las exoyendonucleasas.
46:25Vamos a analizar con cierto detalle a
46:27continuación un mecanismo particular de
46:31regulación de la estabilidad de los ARN
46:34que está mediado por una familia de
46:37pequeños ARNs no codificantes que
46:41funcionan como reguladores
46:43posttranscripcionales de la expresión
46:45génica. se denominan
46:48micros. Estas moléculas están
46:51codificadas por el genoma y generan
46:54cuando adoptan su forma madura,
46:57pequeños eh oligonucleótidos de RN de
47:01aproximadamente 21 nucleótidos de
47:03longitud.
47:06Estos nucleótidos en el citosol se unen
47:09a un
47:10complejo proteico denominado risk por
47:14sus siglas en inglés, que se traduce
47:17como complejo efector, complejo
47:19silenciador eh de RNA.
47:24Y lo que hace el micro RN es
47:28guiar es por el complementariedad de
47:31bases a este complejo efector
47:35un usualmente a un segmento localizado
47:38en el extremo tres prima no traducido
47:41del ARN
47:42mensajero. Entonces, dependiendo de la
47:45complementariedad o no que existe entre
47:47el micro RN y el ARN mensajero en
47:51cuestión, esto guiará o no al complejo
47:55efector de
47:56silenciamiento. Una vez que este
47:58complejo proteico compuesto por diversas
48:00proteínas, una de ellas son las
48:02proteínas de la familia argonautas, aquí
48:04representadas con la sigla
48:07ago, se desencadenan una serie de
48:09procesos que van a reprimir la
48:12traducción de este mensajero y también
48:15van a inducir la degradación de la RN
48:18mensajero. Es decir, los microarrenes al
48:20unirse al transcripto maduro en el
48:23citosol disminuyen la vida media del
48:26transcripto y evitan que se siga
48:29traduciendo. El genoma humano posee
48:31alrededor de 2,300 genes para diferentes
48:34micro RDNs y un mismo una misma
48:38secuencia de micro RNES tiene distintos
48:40blancos moleculares, ya que regulará a
48:44todos aquellos transcriptos maduros que
48:46tengan secuencias complementarias.
48:49a la secuencia del micro
48:53RN. Estos micro RNs entonces participan
48:56de la regulación fina de los niveles de
48:58expresión. Hm. A diferencia de los
49:02controles
49:04pretranscripcionales y controles del
49:06inicio de la transcripción que vimos en
49:08la clase pasada, que funcionaban como
49:10una especie de interruptor, todo o nada
49:13de la expresión de un gen, los
49:15microenes funcionarán como
49:18ecualizadores, regulando a nivel fino
49:21los niveles de expresión.
49:24Este mecanismo muy novedoso cuando se lo
49:26descubrió en la década de los 90, que
49:29permitió identificar una familia de RN
49:31que interfería con la expresión de
49:34otros, se lo denominó en forma general
49:37fenómeno de interferencia de ARN. Y su
49:41descubrimiento permitió, por ejemplo,
49:44diseñar ARNs pequeños artificiales que
49:47pueden utilizarse como fármacos, ya que
49:50pueden introducirse dentro de las
49:51células.
49:53para regular negativamente algunos
49:55transcriptos que están teniendo efectos
49:57negativos en ciertos
50:00contextos. Veamos por último la
50:03regulación de la estabilidad y la
50:05actividad de las proteínas.
50:08Una vez que las proteínas se producen,
50:11es decir, culmina la traducción en el
50:14citosol, algunos productos proteicos no
50:17son necesariamente activos, sino que
50:20solo se activan bajo condiciones
50:22particulares. Por ejemplo, muchas
50:25modificaciones covalentes como la
50:27fosforilación cambian el estado de
50:29actividad de las proteínas o la unión de
50:32un ligando particular puede transformar
50:34a una proteína de un estado inactivo a
50:36un activo. Por ejemplo, la unión de
50:40hormonas esteroideas que ingresan al
50:42interior
50:43celular, encuentran a receptores
50:46intracelulares proteicos que solo a
50:49posterior desunión con su ligando pueden
50:51migrar al núcleo y cumplir la función de
50:54ser factores específicos de la
50:56transcripción. O muchos ejemplos de
50:58proteínas que participan en la
51:00regulación del ciclo celular que solo
51:03cuando son fosforiladas se vuelven
51:06activas. Por
51:07ejemplo, las elicas que al ser fosfor
51:11que están localizadas en los orígenes de
51:13replicación de la células, pero que solo
51:17se vuelven activas cuando son
51:18fosforilados por los complejos CDCI
51:20clinas característicos de la fase F.
51:25Algo importante de identificar de esta
51:28regulación postraduccional es que suelen
51:31tener efectos en el muy corto plazo, es
51:35decir, las modificaciones funcionales se
51:38ejecutan en las células en el lapso de
51:40entre segundos y minutos. Y esto
51:42contrasta con modificaciones más lentas
51:45que se dan en el transcurso de horas,
51:47como son las que se requieren eh las que
51:51usualmente involucran los mecanismos de
51:54regulación del acceso a la cromatina,
51:57tal como vimos en la clase pasada. En
52:00otras palabras, la temporalidad de los
52:02distintos mecanismos que regulan la
52:05expresión génica son
52:08diferentes. Por último, la vida media de
52:12las
52:13proteínas también está regulada
52:16activamente por las células, por un
52:18sistema que se denomina ubiquitina
52:21proteasoma.
52:23La ubiquitina es una pequeña proteína
52:25aquí representada con una pequeña esfera
52:28verde que puede ser unida, conjugada a
52:32distintos sustratos
52:34proteicos. Mediante la unión de varias
52:37proteínas de ubiquitina, hablamos de una
52:39reacción de de
52:41poliubiquitinación. Esta reacción de
52:44conjugación de ubiquitina a distintos
52:46sustratos está llevada a cabo por un
52:49conjunto de enzimas denominadas
52:51ubiquitín ligas. Hm. Hay tres clases
52:55diferentes de ubiquitín ligas porque la
52:58reacción requiere tres pasos. Una
53:00primera enzima activadora de tipo E1 a
53:04la que activa mediante la
53:07desfosforilación de un ATP a la
53:09ubiquitina.
53:11Esta luego
53:14transmitirá, sí, pasará mediante la
53:17conjugación de la ubiquitina a una
53:19segunda enzima, una enzima E2 y esta
53:21finalmente se la pasará a una enzima E3.
53:25Y las E3 ubiquitín ligazas son las que
53:29van a reconocer específicamente a
53:32distintos sustratos a los cuales
53:33conjugar esta
53:36poliubiquitina. Hay distintas clases de
53:39tres ligas. en distintos tipos celulares
53:41que reconocerán distintos sustratos y
53:43esto es lo que le confiere la
53:45especificidad a la reacción de
53:47poliubiquitinación.
53:49Además, pensemos que las etesligazas
53:52pueden estar en estados inactivos o
53:54activos, por ejemplo, mediante
53:56fosforilaciones. O sea, que solo bajo
53:58ciertas condiciones particulares de la
54:00célula, esta reacción de
54:02polioviquitinación de ciertos sustratos
54:05va a llevarse adelante. ¿Cuál es el
54:07efecto final sobre una proteína al
54:11agregársele esta cadena de
54:13poliubiquitinas? El resultado es su
54:16degradación por parte de un complejo
54:18proteico que tiene actividad de proteasa
54:21y que es muy abundante en las células,
54:24pero que solo reconoce como sustratos a
54:27proteínas que están extensamente
54:29polipubiquitinadas.
54:33Un ejemplo frecuente que hemos visto ya
54:36en eh ustedes en otras clases es la
54:39degradación de las cisclinas que regulan
54:41la actividad de las quinazas
54:43dependientes de ciclinas en la
54:46regulación de la progresión del ciclo
54:49celular. La cantidad de moléculas de
54:52ciclina varía a lo largo del ciclo
54:54justamente porque ante determinadas
54:56señales intracelulares se activan las C3
54:58ligazas que unen poliubiquitinas. a las
55:02moléculas de ciclina y conducen a su
55:04degradación por el
55:08proteasoma. A modo de conclusión de esta
55:11clase, me gustaría reflexionar con
55:14ustedes las distintas manifestaciones de
55:17la regulación de la expresión génica que
55:19hemos visto en la clase anterior y en
55:22esta.
55:23Un primer aspecto para comprender a que
55:26denominamos regulación de la expresión
55:28génica es el conjunto de mecanismos que
55:31regulan el nivel, es decir, la cantidad
55:33de un determinado producto
55:36génico. La regulación
55:37prestranscripcional y del inicio de la
55:39transcripción que analizamos la clase
55:41pasada o el efecto de los micro RNs
55:46terminan regulando si hay o no producto
55:49génico y la cantidad de los mismos. son
55:52ejemplos de esta aspecto de la
55:55regulación de la expresión gémica, pero
55:58otros mecanismos
56:00regulan el nivel de actividad del
56:02producto génico como los mecanismos
56:04posttraduccionales de proteínas, ¿no? La
56:06fosforilación de una proteína puede
56:08transformarla de activa a inactiva. Y
56:12aquí tenemos una modificación que regula
56:14la actividad de un producto
56:16génico. También analizamos mecanismos
56:20que regulan ya no la cantidad, sino la
56:23calidad del producto
56:25génico. Cuando analizamos el splicing
56:28alternativo, observamos que estos
56:30procesos regulatorios permitían generar
56:34isoformas proteicas distintas a partir
56:36de un procesamiento diferencial de un
56:38mismo transcripto primario. Y por último
56:42también vimos mecanismos moleculares que
56:45cumplen la función de controlar la
56:48calidad de un producto génico cuando
56:52analizamos los efectos que tienen las
56:55modificaciones en los extremos 5 prima y
56:573 prima de la RN o los mecanismos de
57:01nonsense mediated decay que degradaban a
57:04un transcripto cuando tenían un codrano
57:06son ejemplos de este último tipo de
57:09regulación del expresión génica.

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