Seminario 1 Introducción a la metodología científica BCM- Gabriel Scicolone — Transcript
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- 0:02la idea de la charla de hoy Entonces es
- 0:05que entendamos y reconozcamos que la
- 0:08materia está formada por distintos
- 0:10niveles de organización y que distintas
- 0:12ciencias o especialidades estudian
- 0:14distintos niveles de organización de la
- 0:16materia utilizando metodologías
- 0:18específicas para tal efecto luego vamos
- 0:21a analizar o La idea es que comprendamos
- 0:24que los científicos que trabajan en la
- 0:26biología celular y molecular producen
- 0:28conocimiento a través de resultados
- 0:31experimentales realizando experimentos
- 0:33cuyos resultados luego se generalizan es
- 0:36decir a través de una metodología
- 0:37inductiva y que el equipo de salud entre
- 0:41ellos el médico utilice esos
- 0:42conocimientos científicos para resolver
- 0:44problemas particulares de los pacientes
- 0:47utilizando una metodología
- 0:49deductiva el tercer gran objetivo de la
- 0:53de la charla es que ustedes comprendan
- 0:57que los conocimientos científicos se
- 1:00adquieren a través de trabajos
- 1:02científicos en los cuales se realizan
- 1:04procedimientos o técnicas que sirven
- 1:06para responder a las hipótesis o
- 1:07preguntas que se plantean los
- 1:09científicos en cuarto lugar
- 1:11eh comprender que en los trabajos
- 1:14científicos se utiliza modelos
- 1:16experimentales en los cuales se obtienen
- 1:19resultados que se pueden luego
- 1:21transferir Y ser aplicados por ejemplo
- 1:24para el ser
- 1:25humano entender que el método que el
- 1:28médico utiliza esos esos conocimientos y
- 1:32utiliza distintas técnicas para
- 1:34establecer el diagnóstico y el
- 1:36tratamiento adecuado de los pacientes y
- 1:39finalmente comprender el fundamento y la
- 1:41utilidad de distintas metodologías tanto
- 1:45en el campo de la investigación
- 1:46científica como en el de la medicina
- 1:50asistencial entonces empezando con la
- 1:53temática específica del de la clase de
- 1:57hoy tenemos que tener en cuenta
- 2:01que ustedes pueden ponerse en el lugar
- 2:04de un científico
- 2:06y tratar de obtener un conocimiento
- 2:10acerca de biología celular molecular o
- 2:12genética a través de un método en el
- 2:15cual el científico diseña un experimento
- 2:18o varios experimentos en los cuales
- 2:20obtiene resultados y que esos resultados
- 2:23se pueden generalizar es decir
- 2:25transferir
- 2:27a todas las especies oan de especies
- 2:30entre ellas el ser humano por ejemplo
- 2:32realiza experimentos con un ratón y esos
- 2:35experimentos dan resultados que pueden
- 2:38ser aplicables a otros seres vivos como
- 2:40ser el ser humano a este Método en el
- 2:43cual a través del trabajo
- 2:46científico se realizan
- 2:49experimentos específicos con un número
- 2:52relativamente pequeño de individuos y
- 2:55que se
- 2:56generalizan se lo llama método inductivo
- 3:01por otro lado cuando nos ponemos en el
- 3:04lugar del equipo de salud dentro de los
- 3:06cuales está el
- 3:08médico el equipo de salud resuelve casos
- 3:12particulares es decir resuelve el caso
- 3:15de un paciente utilizando conocimientos
- 3:19obtenidos mediante la metodología
- 3:20científica es decir va de lo general a
- 3:24lo particular a este método se lo llama
- 3:26método deductivo La idea es que durante
- 3:28la cursada
- 3:30nosotros nos podamos poner en ambos
- 3:33lugares en el lugar del científico y
- 3:36poder resolver problemas aplicando el
- 3:38método inductivo problemas científicos y
- 3:41que nos podamos poner en el lugar del
- 3:44médico y podamos resolver problemas
- 3:47particulares utilizando conocimientos
- 3:49generales Es decir de lo general a lo
- 3:51particular utilizando el método
- 3:56deductivo continuando entonces
- 3:58con el conjunto de temas que íbamos a
- 4:01ver en la clase de hoy vamos a hablar de
- 4:03los niveles de organización de la
- 4:05materia todos ustedes saben que la
- 4:07materia tiene distintos niveles de
- 4:11complejidad desde el nivel atómico
- 4:14pasando por el molecular el nivel
- 4:16celular las células se organizan
- 4:19secretan matrices extracelular y se
- 4:21relacionan con otras células y forman
- 4:24los tejidos que es otro nivel de
- 4:27complejidad los tejidos a su vez se
- 4:29organizan en estructuras determinadas
- 4:32llamadas órganos que cumplen funciones
- 4:35específicas a su vez los órganos se
- 4:38organizan en aparatos o sistemas en las
- 4:41cuales los distintos órganos cumplen
- 4:43distintas funciones dentro de una gran
- 4:46función Entonces estamos en el nivel de
- 4:49los sistemas o aparatos de órganos y
- 4:52finalmente estamos en el nivel de los
- 4:55organismos que podemos hablar cuando
- 4:57hablamos de organismos desde un
- 4:58organismo unicelular a un organismo
- 5:00pluricelular como en el humano en el
- 5:02cual podemos estudiar los distintos
- 5:05niveles de organización de la materia
- 5:06que describimos previamente es decir
- 5:08podemos estudiar los sistemas o aparatos
- 5:11los órganos que forman esos sistemas o
- 5:13aparatos los tejidos que forman esos
- 5:16órganos las células y la matriz
- 5:19extracelular que forma los tejidos las
- 5:23moléculas que forman esas
- 5:27células en relación con esos niveles de
- 5:30organización de la
- 5:34materia trabajan distintas ciencias que
- 5:37utilizan distintos instrumentos para
- 5:40obtener la información de los distintos
- 5:42niveles de organización de la materia
- 5:45ustedes pueden ver en el centro de la
- 5:48imagen medidas de longitud estas medidas
- 5:51de longitud están
- 5:53relacionadas con los niveles de
- 5:55organización de la
- 5:57materia y con el poder de resolución de
- 6:00instrumentos ópticos por
- 6:03ejemplo a la izquierda ven que dice
- 6:05límite del ojo humano el poder de
- 6:08resolución del ojo
- 6:10humano nos permite diferenciar dos
- 6:13puntos que estén separados entre sí por
- 6:16100 micrones a esa distancia que separa
- 6:20dos puntos que un sistema óptico puede
- 6:22determinar como distintos se lo llama
- 6:25límite de resolución cuanto menor es el
- 6:29límite de resolución mayor es la
- 6:31capacidad del sistema óptico en
- 6:34discriminar los detalles a esa capacidad
- 6:36se la llama
- 6:38resolución
- 6:40Entonces el poder de resolución de los
- 6:43humanos y la capacidad de distinguir
- 6:45puntos distintos entre sí y está
- 6:49determinado por la distancia mínima que
- 6:52separa esos dos puntos y que nos permite
- 6:54que lo veamos como distintos Entonces el
- 6:58poder resolutivo la capacidad de
- 7:01distinguir detalles y el límite de
- 7:03resolución en la distancia que separa
- 7:06los dos puntos más cercanos que con un
- 7:08sistema óptico yo puedo
- 7:10diferenciar entonces acá Se observa que
- 7:13el límite de resolución del ojo humano
- 7:15es 100 micrones es decir 0,1 Mm qué
- 7:19significa esto que con el ojo humano
- 7:22puedo diferenciar dos puntos que estén
- 7:24separados por 0,1
- 7:27mm el empleo de los microscopios ópticos
- 7:31a la izquierda nos permite distinguir
- 7:33puntos que estén separados por 0,2
- 7:36micrómetros o lo que es lo mismo por 200
- 7:39nanómetros Ese es el límite de
- 7:42resolución de los microscopios
- 7:44ópticos los microscopios electrónicos
- 7:47tienen mayor poder de resolución que el
- 7:49ojo humano y que el microscopio óptico
- 7:52nos permiten diferenciar puntos
- 7:54separados entre sí por hasta 0,2 nanm es
- 7:58decir que límite de resolución del
- 8:00microscopio electrónico está alrededor
- 8:02de los 0,2 nanómetros es decir que el
- 8:06ojo humano nos permite ver detalles o
- 8:10diferenciar puntos que estén separados
- 8:11hasta 100 micrones el microscopio óptico
- 8:14hasta 0,2 micrones y el microscopio
- 8:17electrónico hasta 0,2
- 8:21electrones Qué ciencia utiliza el ojo
- 8:25para estudiar la organización del cuerpo
- 8:27humano acá pueden ver a la derecha
- 8:32anatomía una de las materias que ustedes
- 8:34cursan este año es anatomía entonces la
- 8:36anatomía les permite estudiar utilizando
- 8:40el poder de resolución de los ojos el
- 8:43organismo humano en su
- 8:45totalidad los sistemas o aparatos y los
- 8:49órganos que forman esos
- 8:51aparatos la histología es la ciencia que
- 8:56estudia los tejidos y para estudiar los
- 8:59tejidos utiliza el microscopio óptico
- 9:03esto le permite diferenciar dentro de
- 9:06los tejidos Cómo están organizadas las
- 9:08células y la matriz extracelular ustedes
- 9:11van a cursar este año histología en el
- 9:13primero o en el segundo cuatrimestre y
- 9:15para reconocer Cómo están organizadas
- 9:18las células y la matriz extracelular
- 9:20para formar un tejido van a utilizar un
- 9:23microscopio
- 9:26óptico por debajo de los 0 do
- 9:29micrómetros
- 9:31se encuentran estructuras
- 9:34macromoleculares como las proteínas
- 9:36algunas
- 9:38organelas pequeñas de las células que no
- 9:42pueden divisarse entonces con el
- 9:44microscopio óptico pero sí pueden
- 9:47observarse con la microscopía
- 9:48electrónica la microscopía electrónica
- 9:51dio inicio a la biología celular es
- 9:53decir la ciencia que permite estudiar
- 9:56las células con sus componentes entonces
- 9:58la copía electrónica fue la que permitió
- 10:01el avance de los conocimientos de la
- 10:03biología
- 10:04celular posteriormente el empleo de
- 10:07técnicas de biología de técnicas de
- 10:10biología de biología molecular y
- 10:12técnicas bioquímicas ha permitido
- 10:14estudiar a nivel macromolecular y
- 10:17molecular la
- 10:19composición y la función de las células
- 10:22Este es el campo entonces de la biología
- 10:25molecular entonces observando este
- 10:27gráfico nosotros podemos ver que la
- 10:29anatomía
- 10:32estudia el cuerpo humano con su sistema
- 10:35o aparatos y sus órganos
- 10:38valiéndose de la del poder resolutivo de
- 10:41los ojos la histología
- 10:46estudia los tejidos Cómo están formados
- 10:49los tejidos valiéndose de la microscopía
- 10:51óptica en sus distintas variantes la
- 10:54biología celular estudia las células y
- 10:57también a la matriz extracelular como
- 10:59esas células se organizan en el
- 11:01organismo y lo hace a través de la
- 11:03microscopía electrónica y de técnicas
- 11:07que permiten localizar con microscopía
- 11:10óptica macromoléculas o moléculas más
- 11:13pequeñas la biología
- 11:16molecular utiliza técnicas que permiten
- 11:20localizar en las células y en los
- 11:22tejidos determinados componentes
- 11:24químicos y también otro tipo de técnicas
- 11:27que sin respetarle estructura que
- 11:30estamos estudiando nos permiten
- 11:34estudiar la
- 11:36composición la función de determinadas
- 11:42moléculas acá
- 11:44tenemos arriba a la
- 11:46izquierda tres fotografías ópticas de
- 11:51tejidos observados con un microscopio
- 11:53óptico entonces en los cuales el tejido
- 11:57ha sido
- 12:00coloreado a la izquierda tenemos una
- 12:03porción de cavidad bucal donde se
- 12:05observa un epitelio estratificado sobre
- 12:07un tejido conectivo y que ha sido
- 12:09coloreado con hematoxilina y osina que
- 12:11es la técnica que ustedes van a utilizar
- 12:13a lo largo de toda la cursada de
- 12:14histología es la técnica habitual que
- 12:17usa un patólogo para identificar la
- 12:20estructura de los tejidos en la imagen
- 12:22del medio ven un conducto biliar donde
- 12:26ven un epitelio simple sobre un tejido
- 12:28conectivo y está coloreado con otra
- 12:30técnica que es un tricrómico de malori
- 12:33que le permite identificar componentes
- 12:35de la matriz extracelular como las
- 12:37fibras de colágeno que se ven en azul a
- 12:41la derecha ven otro preparado de
- 12:44intestino donde en color magenta se
- 12:47observan los
- 12:49componentes formados por hidratos de
- 12:51carbono que están en los tejidos
- 12:52mediante la técnica de
- 12:54paz Estos son cortes que se obtienen de
- 13:00especímenes y que pueden apreciarse en
- 13:02el microscopio a la derecha tenemos una
- 13:06fotografía que se observa también con
- 13:07microscopio óptico pero con otra forma
- 13:09de visualización llamada contraste de
- 13:12interferencia diferencial y con
- 13:13coloración que nos permite ver las
- 13:16células sin colorear pero también como
- 13:19se le ha agregado una coloración vital
- 13:21nos permiten ver los cromosomas durante
- 13:24la división
- 13:25celular por debajo a la izquierda
- 13:29tenemos una microscopía electrónica
- 13:30donde se observa el núcleo el retículo
- 13:35endoplasm las cisternas del retículo
- 13:38endoplasmático y en forma y coloreada en
- 13:40forma artificial las
- 13:42mitocondrias esto es una microscopía
- 13:44electrónica de transmisión y a la
- 13:47derecha Tenemos también una microscopia
- 13:49electrónica donde hace asombrado con
- 13:51metales pesados los filamentos de actina
- 13:54Entonces estos son ejemplos de fotos de
- 13:58microscopia óptica y electrónica que nos
- 14:01muestran ejemplos del estudio
- 14:04histológico arriba con el microscopio
- 14:05óptico y de biología celular con el
- 14:08microscopia electrónica en la parte
- 14:12inferior Entonces hasta acá vimos
- 14:16que los científicos utilizan un método
- 14:20inductivo para generalizar conocimientos
- 14:24el médico utiliza un método deductivo
- 14:27utilizando los conocimientos generales
- 14:28para resolver problemas puntuales vimos
- 14:31que la materia se organiza en distintos
- 14:33niveles de complejidad y que las
- 14:35distintas
- 14:36ciencias se centran en esos distintos
- 14:39niveles de complejidad utilizando
- 14:42distintos instrumentos para obtener
- 14:44conocimientos en esos niveles de
- 14:47complejidad ahora bien cómo es que esas
- 14:51ciencias y principalmente la biología
- 14:54celular y molecular que es la que nos eh
- 14:57atañe en esta usada obtienen esos
- 15:01conocimientos
- 15:02científicos como dijimos antes utilizan
- 15:05un método inductivo es decir el
- 15:08investigador se plantea un problema a
- 15:11partir de una incógnita que se tiene
- 15:14ante los conocimientos
- 15:18actuales se plantea una pregunta
- 15:21entonces en base a esa pregunta diseña
- 15:24una metodología para responder a esa
- 15:27pregunta a esa hipótesis
- 15:29Y entonces obtener resultados que puedan
- 15:33llevar a decir esa hipótesis es cierta o
- 15:36es incorrecta obteniéndose de esa forma
- 15:39un conocimiento ese conocimiento se
- 15:42adquiere a través de la realización de
- 15:43experimentos con un número limitado de
- 15:47individuos de
- 15:49experimentación eso se analiza
- 15:51estadísticamente y de acuerdo a esos
- 15:54resultados estadísticos uno puede
- 15:56generalizar a todos los individuos de
- 15:59esa población los resultados
- 16:02obtenidos y
- 16:04como muchos mecanismos celulares y
- 16:08moleculares se conservan durante la
- 16:11evolución esos conocimientos obtenidos
- 16:15en un determinado animal se pueden
- 16:17transferir a la especie
- 16:24humana Cómo es que se dan a conocer
- 16:29estos conocimientos y y se certifican
- 16:32estos conocimientos los conocimientos
- 16:35científicos
- 16:37se publican en trabajos científicos es
- 16:41decir la forma en la cual se obtiene el
- 16:46conocimiento científico de la biología
- 16:48celular y molecular y de otras ciencias
- 16:50es a través de la producción de trabajos
- 16:53científicos que se publican en revistas
- 16:56científicas las revistas científicas
- 16:58reciben los trabajos de los
- 17:03científicos estos trabajos los
- 17:06administra los evalúa un editor o un
- 17:09conjunto de Editores que evalúa si esos
- 17:11trabajos son adecuados para la temática
- 17:13de la revista si consideran que son
- 17:16adecuados para la temática de la revista
- 17:18se lo dan a pares Qué son los pares son
- 17:23investigadores o científicos
- 17:25especialistas en los temas al cual se
- 17:27refiere el trabajo que se ha enviado a
- 17:29la revista para su publicación estos
- 17:32pares analizan el trabajo
- 17:35científico y dan un veredicto si la
- 17:40metodología es adecuada para responder a
- 17:43la pregunta de la hipótesis y la forma
- 17:46en que está escrito el trabajo es la
- 17:48adecuada Entonces le informan al los
- 17:52científicos que enviado del trabajo y a
- 17:53los edit al editor que el trabajo es
- 17:56adecuado para su publicación
- 17:59si no es adecuado se puede rechazar el
- 18:01trabajo y no ser publicado por lo tanto
- 18:04no adquiere el nivel de conocimiento
- 18:07científico también se
- 18:09puede se puede pedir a los científicos
- 18:12que envían el trabajo que realicen
- 18:15modificaciones para que realmente se
- 18:18responda a la pregunta original o las
- 18:21preguntas que se hacen los
- 18:22investigadores a través de la
- 18:23metodología
- 18:25adecuada en base a eso entonces se
- 18:29publica el trabajo científico como
- 18:31pueden ver entonces el trabajo
- 18:34científico es la forma más adecuada de
- 18:37obtener conocimiento debido a que se
- 18:40basa en una
- 18:42metodología que es reproducible y que es
- 18:45crítica es
- 18:47de pares y en el trabajo científico se
- 18:51debe dar toda la información para que
- 18:53otros puedan Reproducir ese trabajo y
- 18:55demostrar que es así que realmente lo
- 18:59que se aporta es cierto y que permite
- 19:02analizar por otros para ver si realmente
- 19:05los conocimientos son de esa forma
- 19:07entonces la ciencia utiliza el método
- 19:10científico en el caso de las ciencias
- 19:13biológicas un método inductivo que
- 19:16permite generalizar los conocimientos y
- 19:18que tiene las características de ser una
- 19:20metodología crítica Y
- 19:25reproducible cómo está formado un
- 19:27trabajo ci
- 19:29un trabajo científico está formado por
- 19:31un
- 19:32título en el cual sintéticamente se dice
- 19:36Cuál es el descubrimiento Cuál es el
- 19:38conocimiento que se transfiere que se da
- 19:42con ese trabajo debajo del título
- 19:45figuran los autores que han participado
- 19:48en su elaboración las filiaciones es
- 19:51decir los lugares de trabajo de esos
- 19:53autores
- 19:55luego tiene un resumen
- 19:58la palabra en inglés es el abstract
- 20:00donde
- 20:02figura Cuál
- 20:04es el tema y la
- 20:07incógnita sobre la cual van a
- 20:10trabajar Cuáles son los objetivos del
- 20:12trabajo Cuál es la metodología que
- 20:16utilizan para resolver ese problema
- 20:18Cuáles son esos resultados y luego cuál
- 20:21es la conclusión o sea en base a esos
- 20:23resultados y comparándolo con otros
- 20:25resultados de otros trabajos Cuáles son
- 20:27las conclusiones que no nos aporta ese
- 20:29trabajo todo eso figura en el
- 20:33resumen luego del resumen están las
- 20:36palabras claves o en inglés keywords que
- 20:39son las
- 20:40palabras mediante las cuales alguien
- 20:43puede buscar ese trabajo y encontrarlo
- 20:46Por ejemplo si es un trabajo que quiere
- 20:50que se basa en el desarrollo del sistema
- 20:52nervioso dos de las palabras clave van a
- 20:55ser desarrollo y sistema nervioso y
- 20:57después van a tener otras palabras
- 20:59claves más específicas por ejemplo de la
- 21:01molécula que se está estudiando de la de
- 21:04la de la de la célula que se está
- 21:06estudiando de la parte del cuerpo que
- 21:08está se está estudiando las palabras
- 21:11claves entonces son las que nos permiten
- 21:13a nosotros Buscar temas en revistas
- 21:18científicas entonces título autores
- 21:21filiaciones de los autores resumen y
- 21:24palabras claves luego tiene una la parte
- 21:29de introducción donde se plantea Cuál es
- 21:31el conocimiento sobre el tema Cuál es la
- 21:33importancia de ese tema y cuál es el
- 21:36interrogante que se plantea el
- 21:39investigador Cuáles son los objetivos
- 21:41que se
- 21:44pretenden y en algunos casos se hace una
- 21:47breve reseña sobre los resultados
- 21:49obtenidos en otros casos no luego viene
- 21:53la parte de materiales y métodos donde
- 21:55se describe la metodología científica
- 21:57que se utiliza para responder esos
- 21:58problemas luego vienen los resultados
- 22:01donde se describen Cuáles son los
- 22:03resultados de la aplicación de esa
- 22:05metodología para resolver esos problemas
- 22:07que generalmente va acompañado de
- 22:10figuras que fundamenten esos resultados
- 22:13luego viene la parte de la discusión
- 22:16donde indica Qué significado tienen esos
- 22:18hallazgos Qué relevancia tienen Y si
- 22:21tienen consistencia o no con otros
- 22:23trabajos publicados referidos a ese
- 22:25mismo
- 22:26tema y luego puede tener o no
- 22:29conclusiones y perspectivas respecto a
- 22:32los hallazgos de este trabajo a
- 22:35continuación figura la bibliografía
- 22:36donde debe estar citado todas las
- 22:38bibliografía mencionada en el trabajo
- 22:41luego figuran los agradecimientos ante
- 22:43personas que colaboran en elaboración y
- 22:46finalmente la declaración de conflicto
- 22:48de
- 22:50intereses esto se refiere a que el
- 22:53investigador no tiene intereses en que
- 22:56el resultado le de de una a otra forma
- 22:58por ejemplo en las Ciencias básicas
- 23:00donde se investigan por ejemplo Cómo son
- 23:02los mecanismos moleculares de un
- 23:04determinado proceso el investigador en
- 23:06general no tiene interés en que el
- 23:08resultado de de una forma o de otra en
- 23:11cambio en algunos trabajos científicos
- 23:13donde se
- 23:15evalúa la utilidad de una droga quizás
- 23:18el investigador forma parte de la
- 23:20empresa farmacéutica que está probando
- 23:23ese medicamento entonces hay intereses
- 23:27hay conflictos de intereses que deben
- 23:30ser declarados para ser tenidos en
- 23:35cuenta entonces vimos que el trabajo
- 23:38científico es la forma en la cual queda
- 23:41afianzado y se da a conocer los nuevos
- 23:45conocimientos científicos que se
- 23:46obtienen mediante la metodología
- 23:48científica vimos Cuáles eran las partes
- 23:51de esos trabajos
- 23:53científicos hay distintos tipos de
- 23:55trabajos
- 23:57científicos lo que describimos recién es
- 23:59la estructura de un trabajo científico
- 24:01clásico de
- 24:04de una ciencia básica sí Pero hay otros
- 24:07tipos de trabajo por ejemplo estudios
- 24:09clínicos donde se prueban por ejemplo la
- 24:11utilidad de un sistema de un aparato de
- 24:14diagnóstico de una terapéutica
- 24:17hay ensayos clínicos que acá figuran
- 24:20como clinical trials que son los ensayos
- 24:23donde se prueban determinadas
- 24:25medicaciones también hay
- 24:28descripciones de casos que describen
- 24:30casos raros por ejemplo de una patología
- 24:33y que no tienen el mismo nivel de
- 24:36conocimiento el que aportan porque están
- 24:37hablando de un solo caso pero sirven
- 24:39como para iniciar el estudio en una
- 24:41determinada patología por
- 24:44ejemplo cómo se accede a los trabajos
- 24:49científicos en internet hay buscadores
- 24:52bibliográficos por ejemplo
- 24:55pavmed que depende del sistema de salud
- 24:57de los Estados Unidos
- 25:01cielo
- 25:03lilax son distintos buscadores donde yo
- 25:07puedo ir a buscar trabajos científicos
- 25:10uno Generalmente Busca trabajos
- 25:12científicos referidos a un determinado
- 25:13tema Entonces cómo es que puede
- 25:16buscarlos donde tenemos el buscador se
- 25:19ponen las palabras claves Por ejemplo si
- 25:22a mí me interesa saber el rol de la
- 25:26molécula p50
- 25:29en el desarrollo de cáncer de mama
- 25:32entonces pongo cáncer de mama
- 25:36p53
- 25:38evolución o por ejemplo el papel de las
- 25:42mutaciones de p53 en la resistencia al
- 25:44tratamiento de cáncer de mama entonces
- 25:46puedo especificar más el tema entonces
- 25:48puedo poner resistencia tratamiento
- 25:51cáncer de mama
- 25:53p53 pongo las palabras claves y me va a
- 25:56aparecer una lista de trabajo
- 25:58en los cuales aparecen esas palabras y
- 26:01yo puedo leer los resúmenes de esos
- 26:05trabajos acá tenemos por ejemplo un
- 26:09trabajo que
- 26:10encontramos cuyo título es que los mic
- 26:14el micro
- 26:16rn9 controla el desarrollo
- 26:19dendrítico teniendo como blanco Target
- 26:22la molécula
- 26:24Rest fíjense tenemos el título tenemos
- 26:27los
- 26:28autores tenemos el abstract acá arriba
- 26:32tenemos la revista en la cual fue
- 26:35publicado y abajo tenemos las palabras
- 26:38claves si este trabajo A mí me interesa
- 26:41Y yo lo quiero buscar
- 26:44completo puedo ir acá a la derecha e ir
- 26:47hacia donde está el trabajo ven acá dice
- 26:50dónde está el full text es el link del
- 26:53texto completo ahora bien los trabajos
- 26:57científicos punto de vista de la
- 26:58accesibilidad del lector son de dos
- 27:01tipos algunos como dice esto son de
- 27:04acceso libre es
- 27:06decir la revista publica el trabajo y da
- 27:10acceso libre a toda persona que quiera
- 27:12Acceder al
- 27:13mismo y cómo es que se
- 27:16sustenta este trabajo para poder ser de
- 27:19acceso libre Los investigadores pagan a
- 27:23la revista luego de que ha sido aceptado
- 27:27el trabajo para los gastos de
- 27:30publicación hay otro tipo de
- 27:34trabajos como estos que son accesibles
- 27:38solamente mediante suscripción es decir
- 27:40no son de acceso libre yo encuentro este
- 27:41trabajo que habla sobre la isoformas de
- 27:44tau desbalance de las isoformas de tau
- 27:47que empeoran el transporte axonal de la
- 27:49proteína precursora de amiloide en
- 27:51neuronas
- 27:53humanas ahora bien si yo pongo acá para
- 27:57ver el texto completo me va a aparecer
- 27:59la hoja de la revista pero no voy a
- 28:02tener acceso a todo el trabajo
- 28:05científico tengo que pagar el acceso
- 28:08Generalmente las bibliotecas por ejemplo
- 28:10las bibliotecas de las universidades
- 28:12están suscritas a revistas les pagan a
- 28:15la revista Y entonces de esa forma se
- 28:18mantiene la revista y el
- 28:22acceso de cualquier persona que quiere
- 28:24acceder es a través de la suscripción
- 28:26institucional
- 28:28en este caso Los investigadores no deben
- 28:31pagar los investigadores producen el
- 28:33trabajo y si es aceptado es publicado
- 28:37Entonces los trabajos de libre
- 28:39acceso son mejores para el lector pero
- 28:43implican un gasto para el investigador
- 28:45mientras que los de acceso
- 28:48restringido
- 28:49son mejores para los investigadores
- 28:52porque no requiere el pago de los
- 28:54investigadores pero limitan el acceso
- 28:56del lector
- 28:58Entonces tenemos trabajos científicos de
- 29:01acceso libre y de acceso a través de la
- 29:06suscripción un tipo de trabajo que yo no
- 29:09les mencioné es el de las revisiones las
- 29:12revisiones son trabajos donde un
- 29:15investigador destacado en un determinado
- 29:18tema analiza los trabajos científicos de
- 29:20los últimos años respecto a un tema y lo
- 29:23actualiza a eso se lo llama revisiones
- 29:26cuando ustedes utilizan un libro por
- 29:29ejemplo el libro de Biología molecular o
- 29:31el libro de genética van a ver que al
- 29:33final de cada capítulo está la
- 29:34bibliografía en la cual se basa lo que
- 29:37está escrito esa bibliografía son
- 29:41revisiones y trabajos científicos
- 29:45clásicos es decir que cada uno de los
- 29:48trabajos científicos que podemos Buscar
- 29:50Generalmente aportan uno o dos renglones
- 29:53de lo escrito en el capítulo de un
- 29:56libro cualquier libro serio entonces
- 29:59tiene que tener al final del capítulo
- 30:01las bases bibliográficas en las cuales
- 30:03se basó que son los trabajos científicos
- 30:06de esa forma pueden ver la importancia
- 30:08que tienen los trabajos científicos
- 30:10porque son la forma en la cual se aporta
- 30:13nuevo conocimiento Sí y la importancia
- 30:16que tienen los libros que tienen el
- 30:18sustento de los trabajos científicos en
- 30:21lo que están diciendo Sí por eso es que
- 30:24es fundamental utilizar Fuentes bibliogr
- 30:27prcticas veraces como son los libros que
- 30:31se basan en trabajos
- 30:34científicos pasamos entonces a un tercer
- 30:38punto que es la metodología científica y
- 30:41los modelos
- 30:43experimentales como dijimos
- 30:47antes en la investigación por ejemplo en
- 30:50biología celular y molecular se pueden
- 30:53hacer experimentos en animales y los
- 30:55conocimientos que se adquieren en esos
- 30:56animales se utiliza un número reducido
- 30:59de animales los conocimientos que se
- 31:00adquieren en ese número reducido de
- 31:03animales después se generalizan a toda
- 31:05la especie como hay determinados
- 31:07mecanismos celulares y moleculares que
- 31:09se conservan a través de la
- 31:12evolución realizando trabajos en otras
- 31:14especies se ha visto que los mismos
- 31:17mecanismos moleculares se conservan en
- 31:19distintas
- 31:21especies esto fundamenta en lo empleo de
- 31:24modelos
- 31:25experimentales un cular y pluricelulares
- 31:29Qué significa esto que para obtener
- 31:31conocimiento sobre por ejemplo Cómo es
- 31:34el proceso de migración celular yo puedo
- 31:37estudiar este proceso en
- 31:41células organismos unicelulares en
- 31:44organismos pluricelulares
- 31:46y algunas de estos resultados pueden ser
- 31:52similares la migración
- 31:54celular es bastante variable entre
- 31:57tintas especies Por lo cual no es el
- 32:00mecanismo
- 32:01celular más fácil de transferir de
- 32:03especie en especie Pero hay otros
- 32:05mecanismos moleculares que ustedes han
- 32:07estudiado en el cbc Como por ejemplo la
- 32:10síntesis proteica o la
- 32:13transcripción son procesos muy
- 32:15conservados en la evolución y que son
- 32:19similares en todos los
- 32:21organismos formados por células
- 32:24eucariontes entonces experimentos
- 32:26realizados con organismos unicelulares
- 32:29eucariontes y con organismos
- 32:33pluricelulares van a dar los mismos
- 32:36resultados y por lo tanto los resultados
- 32:38obtenidos en uno de ellos pueden ser
- 32:40transferidos a otras especies formadas
- 32:44por células
- 32:46eucariontes incluso estos mecanismos
- 32:49están tan conservados como la vida se
- 32:52originó a partir de un solo tipo celular
- 32:54y luego se separaron en procariontes y
- 32:57eucariontes estos mismos procesos son
- 32:59bastante similares en procariontes y
- 33:01eucariontes con ciertas diferencias de
- 33:04hecho lo que ustedes han leído en los
- 33:06libros de biología celular sobre la
- 33:09síntesis proteica se han conocido
- 33:11primeramente en procariontes porque son
- 33:14modelos más simples de estudiar y luego
- 33:17han sido estudiados también en
- 33:19eucariontes y se ha visto que tienen una
- 33:22base común con ciertas diferencias de
- 33:25mayor complejidad en los eucariontes
- 33:28Entonces esto es lo que permite realizar
- 33:32estudios de investigación en modelos
- 33:35experimentales luego algunos de esos
- 33:37conocimientos se pueden transferir a la
- 33:40especie humana por ejemplo se pueden
- 33:44probar drogas en animales una vez que
- 33:47han sido probadas en animales recién ahí
- 33:50se pueden realizar las pruebas adecuadas
- 33:53en seres humanos en lo que se llaman
- 33:56clinical trials o
- 33:59eh trabajos
- 34:03e clínicos para pruebas de estas drogas
- 34:07Como por ejemplo han sido los realizados
- 34:09por ejemplo para las vacunas para el
- 34:14covid acá les muestro algunos ejemplos
- 34:17de modelos experimentales a la izquierda
- 34:20arriba tenemos cultivos de colonias de
- 34:24bacterias las bacterias entonces son
- 34:27útiles como modelos experimentales para
- 34:29estudiar mecanismos moleculares muy
- 34:31básicos y conservados en la evolución
- 34:34como les dije antes transcripción
- 34:37traducción
- 34:41eh Y y como y tienen la ventaja de ser
- 34:45modelos sencillos porque son seres vivos
- 34:49unicelulares y en la cual la célula no
- 34:52tiene compartimientos es un solo
- 34:54compartimiento entonces es menos
- 34:56complejo aumentando en la complejidad
- 34:59podemos ver a la derecha organismos
- 35:01eucariontes unicelulares como son las
- 35:05levaduras en las levaduras por ejemplo
- 35:08se han realizado muchos estudios de
- 35:10manipulación genética que han
- 35:13permitido conocer los mecanismos por los
- 35:17cuales se regula el ciclo celular Sí en
- 35:21estas células han estudiado por ejemplo
- 35:24las ciclinas y las proteinas a cclin
- 35:26dependientes que básicamente tienen el
- 35:29mismo rol el mismo funcionamiento en
- 35:31estas estos organismos unicelulares y en
- 35:34los seres
- 35:35humanos yendo abajo a la izquierda
- 35:38tenemos invertebrados como este gusano
- 35:41el c legans que ya es un organismo
- 35:46pluricelular entonces aumentamos en
- 35:48complejidad con respecto a los
- 35:49organismos
- 35:51unicelulares Pero dentro de los
- 35:53organismos pluricelulares son bastante
- 35:55sencillos tien un número específico de
- 35:57células que están establecidos
- 35:58genéticamente entonces tienen una gran
- 36:01ventaja estos animales estos
- 36:02invertebrados para hacer estudios
- 36:04genéticos en cuanto a la determinación
- 36:06de Destino de las células del
- 36:10organismo aumentando un poco en
- 36:12complejidad nos podemos ir a la
- 36:16drosófila melanogaster que es la mosca
- 36:18de la fruta en la mosca de la fruta
- 36:20también se han realizado estudios
- 36:21genéticos muy importantes por ejemplo
- 36:24ustedes van a ver en embriología los
- 36:26genes ox que son un un tipo de genes
- 36:29somió que
- 36:31establecen que codifican para factores
- 36:34de transcripción específicos y que
- 36:37establecen la ubicación de determinadas
- 36:41células con determinadas
- 36:44características y permiten que
- 36:46participan por ejemplo en que en esta
- 36:49parte en la parte anterior esté la
- 36:51cabeza luego está el tórax Y luego el
- 36:53abdomen cuando estos genes están mutados
- 36:56por ejemplo se pueden obtener moscas que
- 37:00tengan dos tórax O sea que el abdomen
- 37:03tenga estructura de tórax Por qué Porque
- 37:07estructuras normales pasan a ubicar
- 37:09ubicaciones
- 37:11anormales estos genes somió tios que se
- 37:14descubrieron en la mosca se vio
- 37:16posteriormente que también tiene un rol
- 37:18fundamental en el en la en la
- 37:22adquisición de valor de posición de las
- 37:24células en los vertebrados incluso en el
- 37:27ser
- 37:29humano avanzando en el nivel de
- 37:31complejidad de los modelos
- 37:33experimentales tenemos a los vertebrados
- 37:35por ejemplo este pez llamado zebrafish
- 37:38tiene la ventaja de que es transparente
- 37:40y
- 37:41permite estudiar procesos de
- 37:44desplazamientos celulares durante el
- 37:46desarrollo y sus y muchos de sus
- 37:49hallasgos también pueden ser
- 37:50transferidos a los hallazgos del ser
- 37:53humano y a la derecha y abajo
- 37:57tenemos como los ratones que son junto
- 38:01con las ratas las especies más empleadas
- 38:03en experimentación porque son mamíferos
- 38:05como el ser humano y tienen la ventaja
- 38:08de que se reproducen
- 38:09rápidamente pueden servir de modelos
- 38:12experimentales por ejemplo en este caso
- 38:14sirve de modelo experimental el ratón
- 38:17para evaluar un cuadro un fenotipo
- 38:20llamado vitiligo en el cual hay una
- 38:23pérdida de pigmentación en algunas
- 38:25regiones del cuerpo esta pérdida de
- 38:27pigmentación se deben a falla en la
- 38:30migración de una células llamadas
- 38:32crestas neurales células de las crestas
- 38:34neurales que dan origen a los
- 38:36melanocitos que son los que llevan el
- 38:38pigmento de la piel y como pueden ver a
- 38:42la derecha el ratón tiene el mismo
- 38:44cuadro clínico que esta niñita que está
- 38:48a la izquierda lo que nos está mostrando
- 38:51que los mecanismos celulares y
- 38:52moleculares que participan en la
- 38:55producción del vitiligo durante el
- 38:57desarrollo son similares en el ratón y
- 39:00en el ser
- 39:02humano con esto
- 39:05Entonces les estoy mostrando la utilidad
- 39:09de los modelos experimentales para
- 39:11estudiar los procesos celulares y
- 39:14moleculares que vamos a ver a lo largo
- 39:16de la cursada es decir muchos de los
- 39:19conocimientos que nosotros vamos a
- 39:21discutir durante la cursada se basan en
- 39:24trabajos realizados en distintos modelos
- 39:28experimentales a su vez los trabajos
- 39:32realizados en cada uno de estos modelos
- 39:35pueden realizarse con distintos niveles
- 39:40de integración y de aislamiento de las
- 39:43variables Qué significa variable
- 39:46varibles son todos los factores que
- 39:48pueden hacer que se modifique una
- 39:51respuesta yo puedo por ejemplo comp
- 39:53quiero comparar la respuesta en un
- 39:55determinado proceso en un grupo Control
- 39:59un grupo que no es tratado contra un
- 40:00grupo que es tratado con una determinada
- 40:02droga entonces comparo ambos grupos y
- 40:06veo Cuál es el resultado del empleo de
- 40:09una determinada droga veo la diferencia
- 40:13comparo yo puedo comparar o investigar
- 40:16el efecto de esa droga en
- 40:18animales sometidos entonces a estas
- 40:21distintas condiciones experimentales
- 40:24estos estudios que se realizan en
- 40:25animales se llaman estudios inv
- 40:28ahora bien yo puedo para lograr
- 40:32controlar mejor las variables porque yo
- 40:34al trabajar con un animal completo Tengo
- 40:36la ventaja que estoy trabajando en las
- 40:38condiciones fisiológicas normales pero
- 40:40tengo la desventaja que tengo muchas
- 40:41variables que pueden influir en el
- 40:44resultado que yo estoy obteniendo
- 40:45entonces una forma de disminuir las
- 40:49variables sobre el comportamiento
- 40:51celular es aislar las células de ese
- 40:54organismo y realizar cultivos celulares
- 40:58entonces puedo hacer proliferar
- 41:02células puedo hacer proliferar células
- 41:05en cultivos Y tratar esas células con
- 41:09esa droga Entonces de esa forma Tengo la
- 41:13ventaja de que voy a estar separando
- 41:16esas células del resto de señales del
- 41:19organismo que pueden estar influyendo
- 41:21sobre el resultado y que yo no quiero
- 41:24que influyan en el resultado entonces de
- 41:27los estudios inv vitro en cultivos
- 41:29celulares tienen la ventaja sobre los
- 41:31estudios inv vivoo de que
- 41:35permiten aislar mejor las variables y
- 41:38tiene la desventaja de que me estoy
- 41:41alejando del Estado
- 41:43fisiológico ahora bien yo puedo estar
- 41:46estudiando un mecanismo molecular que se
- 41:49produzca por ejemplo en las mitocondrias
- 41:51por ejemplo la respiración celular
- 41:53entonces puede ser que esa respiración
- 41:55celular esté influida por las señales
- 41:58entre las células dentro un organismo
- 42:00completo o de las señales entre células
- 42:04vecinas que están creciendo en un
- 42:06cultivo celular entonces puede ser
- 42:08ventajoso para mí para para separar
- 42:12variables que puedan influir sobre cómo
- 42:15se produce el fenómeno el mecanismo de
- 42:18respiración celular puede ser útil que
- 42:20yo aísle las mitocondrias del resto de
- 42:22los componentes celulares a estos
- 42:25estudios se lo llama udos libres de
- 42:27células en los cuales se produce un
- 42:29fraccionamiento subcelular y yo puedo
- 42:32trabajar con distintas fracciones de la
- 42:35célula tiene la ventaja que separo mejor
- 42:39las variables tiene la desventaja que me
- 42:41voy alejando cada vez más de la
- 42:44fisiología del Estado
- 42:48real acá tenemos entonces un ejemplo
- 42:52varios ejemplos de estudios sin vivo la
- 42:55rata y el ratón como modelos mentales en
- 42:58trabajos o estudios inv vivo por ejemplo
- 43:00a la izquierda tenemos una rata que está
- 43:03ubicada en un lugar donde se está
- 43:05evaluando su conducta ante determinados
- 43:08estímulos pruebas
- 43:10conductuales en el medio arriba se Está
- 43:14realizando una operación de una rata
- 43:17preñada para extraer los fetos que los
- 43:20podemos ver abajo y entonces poder
- 43:23estudiar esos fetos por ejemplo en este
- 43:25caso estudiar el efecto del alcoholismo
- 43:27materno en el desarrollo de los fetos
- 43:31por ejemplo acá vemos que el etanol el
- 43:32alcoholismo en la rata produce en la
- 43:35descendencia una disminución en el
- 43:37tamaño de los ratones de de los de las
- 43:40ratas de los fetos de
- 43:43ratas y finalmente a la derecha tenemos
- 43:46ratones transgénicos los ratones
- 43:48transgénicos o animales transgénicos son
- 43:50aquellos en los cuales se producen
- 43:53cambios en el genoma de forma tal que
- 43:56este genoma que este cambio se
- 43:58transfiere a la descendencia es decir
- 43:59que afecta a todas las células o por lo
- 44:03menos a las células germinales de forma
- 44:05tal que esa modificación genética va a
- 44:08estar en las células germinales que
- 44:10participen en el proceso de fecundación
- 44:12y en la formación de la célula huevo del
- 44:15individuo que va a nacer que se va a
- 44:17desarrollar en este caso tenemos dos
- 44:20ratones en los costados en los cuales se
- 44:23ha insertado un gen que codifica para
- 44:25una proteína fluorescente verde que es
- 44:27inocua Entonces yo puedo ver que en los
- 44:31ojos donde se ha expresado esta proteína
- 44:34en las células de la retina se ven los
- 44:36ojos fluorescentes sí Entonces estos son
- 44:41ejemplos de trabajos utilizando modelos
- 44:45animales y trabajando realizando
- 44:47estudios en vivo yo puedo matar esos
- 44:52animales realizar cortes de distintos
- 44:55tejidos
- 44:57y observarlos al microscopio para
- 44:59observarlos al microscopio óptico como
- 45:01el microscopio óptico se basa en el que
- 45:03la luz atraviesa el preparado la muestra
- 45:07Por ejemplo yo corto un pedazo
- 45:09de acá intestino que tengo en la tercer
- 45:12foto de la
- 45:13izquierda tomo intestino corto en
- 45:17segmentos pequeños el intestino para
- 45:19poder observarlo en el microscopio Qué
- 45:21debo hacer primero tengo que conservar
- 45:22la estructura Entonces se utiliza un
- 45:25procedimiento que se llama fijación que
- 45:27mata las células y conserva la
- 45:29estructura después Qué debo hacer
- 45:31cortarlo en fetas chiquitas para que
- 45:33poder observar el microscopio para eso
- 45:35lo tengo que endurecer lo incluyo luego
- 45:38lo corto con un aparato llamado
- 45:40micrótomo que como una fiambrera y me da
- 45:43cortes finitos luego como esos cortes
- 45:47finitos si yo lo observo al microscopio
- 45:49el el tejido es transparente no voy a
- 45:52notar diferencias entre distintos
- 45:54componentes para lograr ver diferencias
- 45:56coloreo sus componentes y entonces puedo
- 45:59observar distintos componentes con
- 46:00distintos
- 46:02colores acá entonces a la izquierda
- 46:05tenemos microscopias ópticas en donde
- 46:08los cortes fueron tenidos de distintas
- 46:10formas donde observo tejidos de un
- 46:12animal que fue sometido a una
- 46:13experimentación in
- 46:15vivo a la derecha tengo cultivos
- 46:20celulares observados con otro tipo de
- 46:23microscopía óptica que me permiten ver
- 46:25como relieve las distintas partes de la
- 46:28célula y que ha sido también coloreado
- 46:30por observar los
- 46:32cromosomas esto es un ejemplo de un
- 46:34trabajo
- 46:36invitro y abajo tengo microscopias
- 46:39electrónicas En las cuales los cortes
- 46:42del tejido han sido observados en la por
- 46:45un microscopio electrónico en lugar de
- 46:46un microscopio óptico lo que me permite
- 46:48observar las organelas o las
- 46:51macromoléculas de esa célula que no
- 46:53puedo apreciar con la microscopía óptica
- 46:56tenemos que tener en cuenta y lo van a
- 46:57ver en histología actualmente hay
- 47:00microscopios ópticos que me permiten
- 47:04observar moléculas específicas y con una
- 47:08gran resolución entonces la microscopía
- 47:11óptica también es Útil para los estudios
- 47:14de biología celular y
- 47:17molecular entonces vimos ejemplos de
- 47:21estudi sin vivo donde puedo observar
- 47:24cortes de los tejidos en los
- 47:25microscopios ópticos o
- 47:28electrónicos acá tenemos los estudios
- 47:30invitros fíjense se toma un pedazo de
- 47:34tejido ese tejido se corta en fragmentos
- 47:37se le pone una solución y
- 47:41se corta ven acá arriba tenemos un
- 47:45émbolo que gira Y entonces
- 47:48destruye el tejido se le agregan
- 47:51Generalmente enzimas que rompen las
- 47:53uniones intercelulares Y entonces se
- 47:56disgrega todo el
- 47:57tejido esto se somete a una pequeña
- 48:00centrifugación que hace que las células
- 48:02vayan al fondo formen un precipitado y
- 48:04arriba quede el líquido estas células
- 48:07luego se pueden poner en una cápsula de
- 48:09petri y se introducen en una incubadora
- 48:14abajo a la derecha donde se conserva la
- 48:17temperatura del cuerpo 37 gr y hay una
- 48:20concentración alta de dióxido de carbono
- 48:22equivalente a la que hay en el interior
- 48:25de nuestro org
- 48:27para realizar este procedimiento debe
- 48:29mantenerse la esterilidad para que no se
- 48:32contaminen con organismos procariontes Y
- 48:35eso se realiza en flujos laminares que
- 48:38está la foto arriba a la derecha donde
- 48:42se mantiene la esterilidad Y entonces se
- 48:45permite favorece el desarrollo de los
- 48:47cultivos los cultivos Entonces se
- 48:49mantienen en las estufas en las
- 48:51incubadoras permitiendo que las células
- 48:54proliferen una vez que proliferan y
- 48:55abarcan todas las superficie pueden otra
- 48:58vez disgregarse y hacerse un cultivo
- 49:00secundario sobre estas células del
- 49:03cultivo primario o del cultivo
- 49:05secundario se pueden realizar
- 49:07experimentos y obtenerse
- 49:09resultados también hay algunas células
- 49:12modificada genéticamente que tienen la
- 49:14capacidad de proliferar indefinidamente
- 49:16y que yo las puedo congelar en un tubo
- 49:19de nitrógeno líquido como el que está
- 49:21abajo a la derecha abajo de la
- 49:24incubadora lo pueden apreciar abajo ese
- 49:27tubo grande donde en nitrógeno líquido A
- 49:30menos 160 gr se pueden conservar por
- 49:33mucho tiempo estas células estas líneas
- 49:36celulares luego cuando quiero
- 49:38utilizarlas de nuevo las descongelo y
- 49:39las cultivo nuevamente Esto me permite
- 49:42entonces realizar experimentos
- 49:45invitro o sea en cultivos celulares Este
- 49:50es un
- 49:51microscopio es invertido se llama
- 49:53invertido porque tiene los objetivos
- 49:54abajo en lugar de tenerlos arriba como
- 49:56de los trabajos prácticos de histología
- 49:58que tienen ustedes que tien los
- 49:59objetivos arriba este tiene los
- 50:01objetivos abajo para poder ver en la
- 50:03parte inferior de la cápsula de petri a
- 50:06las células en cultivo esto es un
- 50:09microscopio óptico invertido que nos
- 50:11permite observar a las células en
- 50:14cultivo y acá tenemos la muestra de dos
- 50:16cultivos celulares arriba a la izquierda
- 50:18un cultivo celular que se observa sin
- 50:20que las células estén
- 50:22tenidas observándola con una
- 50:25modificación de los rayos llamada
- 50:28contrast de interferencia diferencial
- 50:29que me permite observar las células como
- 50:32con relieve Sí y me permite reconocerlas
- 50:36sin necesidad de colorearlas en la
- 50:39imagen que tenemos abajo a la derecha
- 50:41observamos células en un cultivo celular
- 50:44observadas con el mismo tipo de técnica
- 50:46pero las cuales además tienen color yo
- 50:48estoy observando estas células en un
- 50:49microscopio invertido de
- 50:52epifluorescencia es decir que emite
- 50:54radiaciones que al impactar con un
- 50:57fluorocromo hacen que ese fluorocromo
- 51:01emita luz en el en el margen visual de
- 51:07esta forma yo puedo apreciar en estas
- 51:09células en
- 51:12verde el núcleo porque estas células
- 51:17fueron se les ha
- 51:19introducido
- 51:21ADN que codifica para un gen que se
- 51:25transcribe y se traduce en una proteína
- 51:27fluorescente verde Entonces cuando yo lo
- 51:30veo con el microscopio de fluorescencia
- 51:32veo que el núcleo florece porque ahí
- 51:36está esta proteína fluorescente verde
- 51:38que es inocua para el desarrollo para la
- 51:41vida de la célula y por otro lado en
- 51:43rojo veo en el citoplasma un colorante
- 51:46vital vital es que no daña la célula que
- 51:51se une a las mitocondrias Entonces yo en
- 51:54este cultivo celular Estoy Ob and la
- 51:57fluorescencia de una proteína verde y la
- 52:02fluorescencia de un marcador de
- 52:05mitocondrias entonces puedo observar los
- 52:09resultados de la experimentación en
- 52:11estas células en cultivo que pueden
- 52:14haber
- 52:15sido sometidas un
- 52:18grupo al tratamiento con una droga y
- 52:21otro ser un control es decir no se lo
- 52:23somete a la acción de nada y se los
- 52:25compara para ver cuál es el efecto de la
- 52:27droga que estoy
- 52:30estudiando entonces hemos visto estudios
- 52:33sin vivo estudi sin vitro y nos queda
- 52:36por ver los estudios libres de células
- 52:38que se obtienen a través del método de
- 52:40fraccionamiento subcelular el
- 52:42fraccionamiento subcelular es el
- 52:44conjunto de métodos y técnicas que
- 52:46tienen como objetivo obtener fracciones
- 52:48puras o enriquecidas de un determinado
- 52:50componente celular Por ejemplo si vemos
- 52:52a la izquierda vesículas del retículo
- 52:54endoplasmático y ribosomas en el segundo
- 52:57gráfico vesículas de retículo
- 52:59endoplasmático rugoso llamadas
- 53:02microsomas más abajo mitocondrias y
- 53:05lisosomas más abajo
- 53:07núcleos y acá está representado el
- 53:10procedimiento en forma sintética que lo
- 53:13vamos a ver en la diapositiva siguiente
- 53:16Entonces el fraccionamiento
- 53:18subcelular Busca purificar o separar
- 53:21distintos componentes celulares para
- 53:24poder trabajar luego con algún uno de
- 53:26ellos en la etapa uno se produce la
- 53:29ruptura mecánica del tejido por ejemplo
- 53:31a la izquierda tenemos hígado se cortan
- 53:34las porciones de hígado y se la pone en
- 53:36un tubo Y luego se lo tritura en forma
- 53:40mecánica Con este aparato que funciona
- 53:43como émbolo que gira y lo va triturando
- 53:45se puede agregar también enzimas o
- 53:48soluciones con detergentes para
- 53:50facilitar esa disgregación y se forma
- 53:54entonces lo que se llama homogeno que lo
- 53:56vemos en marrón en este tubo de la
- 53:59derecha el homogeno como muestra el
- 54:03gráfico de la derecha tiene mezclados
- 54:07todos los componentes de ese tejido los
- 54:10componentes de la matriz extracelular y
- 54:11los componentes de las células que si
- 54:14fueron tratadas con detergentes se
- 54:15rompieron porque destruyeron las
- 54:17membranas Entonces en ese mismo homogeno
- 54:20tenemos núcleos mitocondrias microsomas
- 54:23que son las vesículas que se forman a
- 54:24partir de la ruptura del ret
- 54:26endoplasmático rugoso y liso tenemos
- 54:28ribosomas Y tenemos componentes del
- 54:31citosol y acá no los dice pero también
- 54:33de la matriz extracelular es decir que
- 54:36hemos realizado el primer paso que es la
- 54:38ruptura del tejido y tenemos todos los
- 54:41componentes del tejido disueltos en un
- 54:44homogeno El Paso siguiente es separar
- 54:48esos componentes Cómo se separan esos
- 54:52componentes mediante un proceso llamado
- 54:54centrifugación diferenci
- 54:57la centrifugación consiste en someter a
- 55:00estos componentes del homogeno
- 55:04a presiones de fuerza gravitatoria mayor
- 55:08que la fuerza gravitatoria normal varias
- 55:12veces mayor de forma tal que los
- 55:14componentes que están en este homogeno
- 55:17se van a ir moviendo hacia el fondo los
- 55:20que tengan mayor densidad los que tengan
- 55:22menos densidad van a quedar flotando
- 55:24entonces la centrífuga hace que gire a
- 55:27gran velocidad el tubo que tiene el
- 55:31homogeno de forma tal que los
- 55:34componentes más densos vayan al fondo
- 55:36los menos densos queden
- 55:42flotando de forma tal que vamos a tener
- 55:44un precipitado pelet que se ve en el
- 55:47fondo de color blanco y un
- 55:52sobrenadante Entonces tenemos el homogen
- 55:55lo sometemos a 1000 fuerzas de gravedad
- 55:581000g durante 10 minutos Entonces
- 56:02obtenemos un pelet de células enteras y
- 56:05núcleos separamos esa porción y nos
- 56:08quedamos con el sobrenadante y a ese
- 56:10sobrenadante lo sometemos a 20.000 g
- 56:13durante 20 minutos y obtenemos otra vez
- 56:16un pellet y un sobrenadante en este caso
- 56:19el Pet que está representado en Rosa va
- 56:22a estar formado por los componentes más
- 56:24pesados de las células que han quedado
- 56:26luego de que se separaron las células
- 56:28enteras y los núcleos que son las
- 56:31mitocondrias los lisosomas y los
- 56:33peroxisomas me quedo con ese pelet
- 56:36entonces ya separé las mitocondrias los
- 56:38lisosomas y los peroxisomas en ese Pet
- 56:40en el pelet anterior me quedé con
- 56:42núcleos y algunas células enteras y
- 56:45ahora me quedo con el sobrenadante y ese
- 56:47sobrenadante lo someto nuevamente a
- 56:49ultracentrifugación Pero esta vez a
- 56:5280,000 ge por más tiempo por una hora y
- 56:54obtengo un pelet que está representado
- 56:56en celeste
- 56:58que en el cual obtengo a los microsomas
- 57:01es decir a las vesículas que se
- 57:02rompieron a partir de los del retículo
- 57:04endoplasmático liso y
- 57:06rugoso me quedo otra vez separo los
- 57:09microsomas para trabajar con ellos y el
- 57:12sobrenadante lo someto a otro periodo de
- 57:15ultracentrifugación esta vez de 100,000
- 57:17G durante 3 horas y entonces voy a
- 57:19obtener un Pet con ribosomas y grandes
- 57:22macromoléculas y un sobrenadante donde
- 57:24tenga otros componentes de del citosol
- 57:27que tenga menor densidad de esta forma
- 57:30obtengo distintas fracciones
- 57:33celulares y Puedo trabajar con esas
- 57:36fracciones celulares en forma
- 57:38aislada cómo sé que esas fracciones
- 57:41celulares son Realmente las que yo
- 57:44busqué lo puedo determinar por ejemplo
- 57:48evaluando la actividad enzimática de
- 57:50alguna enzima que yo sé que está en en
- 57:51una determinada organela por ejemplo si
- 57:53yo quiero saber si la fracción
- 57:54mitocondrial mía Es realmente la
- 57:56fracción mitocondrial puedo agregar un
- 57:59sustrato de la enzima citocromo oxidasa
- 58:04que está en las
- 58:05mitocondrias y el sustrato que le agrego
- 58:08es un sustrato tal que cuando es
- 58:11procesado por esa enzima me va a dar un
- 58:14producto que es
- 58:16insoluble y que lo voy a poder
- 58:18identificar con un determinado color
- 58:19entonces si yo a la fracción la someto a
- 58:22la acción de esta enzima le agrego el
- 58:25sustrato acción de le agrego un sustrato
- 58:28si está la enzima es decir si están las
- 58:30mitocondrias me va a dar el producto
- 58:32coloreado y lo voy a ver si no es la
- 58:35fracción mitocondrial o Hay pocas
- 58:37mitocondrias no voy a obtener o voy a
- 58:40obtener poca cantidad del producto y por
- 58:42lo tanto menor cantidad del color y voy
- 58:45a saber que esa fracción está menos
- 58:47enriquecida en mitocondrias si quiero
- 58:49saber si son los microsomas puedo hacer
- 58:51lo mismo con otra enzima que se
- 58:52encuentra en los microsomas si quiero
- 58:54saber si es el citosol puedo utilizar un
- 58:57sustrato de otra enzima que se encuentre
- 58:59en el citosol otra forma de evaluar si
- 59:02realmente ob
- 59:03obtuve la fracción indicada es observar
- 59:06al microscopio electrónico las
- 59:08fracciones subcelulares por ejemplo a la
- 59:10izquierda tengo fracciones nucleares que
- 59:12yo las reconozco por la
- 59:14morfología en el medio tengo fracciones
- 59:17mitocondriales y a la derecha la
- 59:20fracción microsomal con vesículas con
- 59:22ribosomas del retículo endoplasmático
- 59:24rugoso y otras sin os somas del retículo
- 59:27endoplasmático liso de esa forma
- 59:29entonces confirmo mediante una técnica
- 59:32bioquímica o de microscopía electrónica
- 59:34que realmente he purificado la fracción
- 59:36que quiero y puedo trabajar estudiando
- 59:38una determinada reacción en cualquiera
- 59:41de esas fracciones utilizando entonces
- 59:44una metodología libre de células que he
- 59:48obtenido esos componentes a través del
- 59:49fraccionamiento
- 59:51subcelular otra forma de separar
- 59:55componentes
- 59:57disgregado en la homogeneización es
- 1:00:00utilizar centrifugacion pero con
- 1:00:01gradientes de densidad es decir
- 1:00:06tengo distintas concentraciones por
- 1:00:08ejemplo de sacarosa Y
- 1:00:11entonces los elementos que se
- 1:00:13centrifugan se van a separar dependiendo
- 1:00:17de densidad Entonces por ejemplo los
- 1:00:19microsomas van a quedar más abajo que
- 1:00:23los ribosomas sueltos y las onas más
- 1:00:26abajo todavía Y de esa forma las puedo
- 1:00:28separar o también lo puedo utilizar para
- 1:00:31separar macromoléculas entre
- 1:00:34sí por ejemplo por ultracentrifugación
- 1:00:36con gradientes de sacarosa puedo Separar
- 1:00:39en un tejido
- 1:00:41nervioso las sinapsis los componentes
- 1:00:44pre y postsinápticos de una sinapsis
- 1:00:50química Entonces de esa forma hemos
- 1:00:54terminado de analizar
- 1:00:56la metodología científica en cuanto a
- 1:00:59qué utiliza un método en el cual a
- 1:01:02partir de experimentos con pocos
- 1:01:05animales se puede generalizar a todos
- 1:01:07los animales de la especie Y
- 1:01:11cómo muchos de los mecanismos
- 1:01:13moleculares se conservan en la evolución
- 1:01:16muchas veces se ha visto que esos
- 1:01:18mecanismos se pueden transferir a otras
- 1:01:22especies pluricelulares eso es lo que
- 1:01:25nos permite entonces emplear modelos
- 1:01:27experimentales para adquirir
- 1:01:29conocimientos por ejemplo sobre la
- 1:01:31fisiología del cuerpo humano Entonces
- 1:01:34tenemos distintos modelos desde
- 1:01:37organismos unicelulares a pluricelulares
- 1:01:39que varían en su complejidad y a su vez
- 1:01:42esos modelos los puedo utilizar y
- 1:01:44analizar en distintos niveles de
- 1:01:47complejidad puedo utilizar experimentos
- 1:01:49inv vivo experimentos inv vitro en
- 1:01:52cultivos celulares y experimentos con
- 1:01:55con componentes que separad de las
- 1:01:57células es decir libres de
- 1:02:01células pasamos entonces a ubicarnos
- 1:02:05ahora en la última parte de la clase en
- 1:02:07la posición del Médico hasta ahora nos
- 1:02:10hemos ubicado en la posición del
- 1:02:11científico y hemos hablado de la
- 1:02:13metodología científica ahora Vamos a
- 1:02:16ponernos en el lugar del Médico el
- 1:02:18médico puede solicitar estudios
- 1:02:22complementarios para llegar a un
- 1:02:24diagnóstico sobre la patología que tiene
- 1:02:26el paciente o para también Establecer un
- 1:02:30una predicción sobre la evolución del
- 1:02:34paciente y que pueden ayudar para
- 1:02:37definir Cuál es el tratamiento adecuado
- 1:02:39para ese
- 1:02:41paciente entonces para realizar esos
- 1:02:44estudios se obtienen
- 1:02:46muestras que pueden tener distintos
- 1:02:49orígenes la muestra más común que
- 1:02:52ustedes saben que se utiliza es la
- 1:02:54muestra de sangre arriba tiene Cómo se
- 1:02:56obtiene con una jeringa y una aguja la
- 1:02:58muestra de sangre esa muestra de sangre
- 1:03:00se puede dejar que precipite si se pone
- 1:03:02un anticoagulante se permite que
- 1:03:04precipite entonces abajo van a quedar
- 1:03:05los glóbulos y arriba el plasma o
- 1:03:11puede trabajarse con esa muestra antes
- 1:03:13de que se separen pero en general se
- 1:03:15permite la separación entre los glóbulos
- 1:03:17y el plasma y se puede trabajar con los
- 1:03:18glóbulos o con el
- 1:03:23plasma también se pueden obtener
- 1:03:25muestras para realizar estudios de otras
- 1:03:28ubicaciones Por ejemplo si tenemos algún
- 1:03:32problema relacionado con la sangre con
- 1:03:35los elementos formes de la
- 1:03:37sangre se puede tomar una muestra de
- 1:03:40médula ósea la médula ósea es donde se
- 1:03:41forman los elementos sanguíneos los
- 1:03:43elementos forma de la sangre Entonces se
- 1:03:45puede
- 1:03:46punzar la médula ósea que está en el
- 1:03:50hueso coxal por ejemplo se puede obtener
- 1:03:53una muestra por aspiración en la cual se
- 1:03:55obtienen solas o se puede obtener una
- 1:03:58muestra en la cual se saca un bocado y
- 1:04:00en la cual se puede cortar y observar al
- 1:04:02microscopio Qué diferencia tienen estas
- 1:04:04dos muestras Si obtengo solo células
- 1:04:06pierdo la organización del tejido y
- 1:04:08obtengo las células por separado
- 1:04:10mientras que si saco un tubito de tejido
- 1:04:12yo puedo cortarlo y observar como esas
- 1:04:15células están organizadas en el tejido
- 1:04:17es decir conservo la organización
- 1:04:20tisular se puede hacer por ejemplo si
- 1:04:23hay una persona que tiene acidez se
- 1:04:25puede hacer una endoscopía alta Sí a la
- 1:04:28derecha estamos viendo y se si hay
- 1:04:30alguna lesión se puede obtener una
- 1:04:32muestra de esa lesión una biopsia para
- 1:04:36también poder estudiarlas en el
- 1:04:38microscopio o puedo también obtener
- 1:04:40muestras para hacer
- 1:04:42cultivos cultivos para ver si crecen
- 1:04:45bacterias o cultivos celulares y abajo
- 1:04:47tenemos otro ejemplo de biopsia biopsia
- 1:04:50es una muestra de
- 1:04:52tejido que conserva la estructura
- 1:04:54tisular y entonces permite que ser
- 1:04:56estudiada al microscopio abajo entonces
- 1:04:59tengo la forma en la cual se obtiene una
- 1:05:00muestra de piel para ser estudiada
- 1:05:03también el microscopía
- 1:05:06entonces acá tenemos un esquema
- 1:05:09conceptual sobre distintas técnicas y
- 1:05:13formas de obtención de las muestras
- 1:05:16tanto en el trabajo científico en
- 1:05:19modelos experimentales como a partir de
- 1:05:23pacientes en la consulta Mica
- 1:05:26entonces este esquema conceptual nos
- 1:05:28muestra
- 1:05:30qué se pueden obtener muestras de
- 1:05:32distintas formas de modelos
- 1:05:34experimentales animales que se utilizan
- 1:05:37en un trabajo científico o se pueden
- 1:05:39obtener muestras de un paciente por
- 1:05:42ejemplo obtención de plasma o obtención
- 1:05:44de tejido sí mediante una
- 1:05:47biopsia ahora bien esas muestras que yo
- 1:05:51obtengo yo puedo querer analizarlas
- 1:05:54conservando su forma por ejemplo quiero
- 1:05:57analizar las células la forma los
- 1:06:01componentes celulares o cómo están
- 1:06:04organizadas las células formando tejidos
- 1:06:05y comoo esos tejidos están organizados
- 1:06:07formando las distintas capas de un
- 1:06:09órgano entonces esa muestra puedo tener
- 1:06:12que conservarla por ejemplo biopsias o
- 1:06:15elementos formes de la sangre o células
- 1:06:18de cultivo entonces las tengo que
- 1:06:20obtener fijarlas para conservar su
- 1:06:23estructura si son células
- 1:06:26de la sangre o células de cultivo las
- 1:06:29puedo fijar y observarlas directamente
- 1:06:31al microscopio con o sin coloración si
- 1:06:34son porciones de tejido necesito
- 1:06:37cortarlas para verlas en el en el
- 1:06:39microscopio y las puedo colorear o no
- 1:06:42entonces conservo la estructura para
- 1:06:45observarlas al microscopio es lo que
- 1:06:48tenemos a la izquierda en este gráfico
- 1:06:50donde dice biopsia elementos formes de
- 1:06:52la sangre o células en cultivo
- 1:06:56ahora bien la muestra puede ser que yo
- 1:06:59la quiera utilizar para hacer estudios
- 1:07:01bioquímicos o estudiar alguna molécula
- 1:07:03sin que me importe la localización
- 1:07:06Entonces yo puedo obtener plasma que es
- 1:07:09líquido o obtener un tejido y
- 1:07:11homogeneizar para estudiar la cantidad
- 1:07:15de una proteína la cantidad de una
- 1:07:17enzima o la actividad de una enzima
- 1:07:21entonces a ese material puedo realizarle
- 1:07:24estudios a la homogeno o realizar un
- 1:07:27fraccionamiento subcelular y luego
- 1:07:29estudiar el
- 1:07:30homogeno entonces a la izquierda del
- 1:07:33gráfico tenemos muestras que conservan
- 1:07:36la estructura y las observo al
- 1:07:38microscopio puedo observarlas realizando
- 1:07:41técnicas histológicas o citológicas de
- 1:07:43rutina donde con coloraciones habituales
- 1:07:46puedo obtener poder discernir Cuáles son
- 1:07:49los distintos componentes celulares por
- 1:07:51ejemplo núcleo y citoplasma y la matriz
- 1:07:54extracelular o puedo realizar estudios
- 1:07:57para obtener la ubicación de proteínas
- 1:08:00dentro del
- 1:08:02tejido por ejemplo utilizando la técnica
- 1:08:05de inmunohistoquímica o
- 1:08:07inmunofluorescencia
- 1:08:08mediante estas técnicas yo puedo
- 1:08:10localizar en el tejido la ubicación de
- 1:08:13la proteína que yo quiero estudiar y
- 1:08:17esto lo puedo aplicar para muestras
- 1:08:18provenientes de animales de experimentos
- 1:08:21o de cultivos celulares de trabajos
- 1:08:23experimentales o muestra de tejido de
- 1:08:26humano que se obtuvieron para hacer un
- 1:08:30diagnóstico Por ejemplo yo puedo
- 1:08:33utilizar también técnicas para detectar
- 1:08:35la ubicación de arenes mensajeros en el
- 1:08:38tejido por ejemplo utilizando la técnica
- 1:08:40de hibridación INS situ o
- 1:08:45puedo localizar la ubicación de
- 1:08:47proteínas si yo a un cultivo celular por
- 1:08:50ejemplo o un organismo pluricelular
- 1:08:53sometido a experimentación le agrego los
- 1:08:56genes que codifican para proteínas
- 1:08:58fluorescentes y entonces yo en el
- 1:09:00microscopio de epifluorescencia que es
- 1:09:03un tipo de microscopio óptico puedo
- 1:09:05visualizar la ubicación de esas
- 1:09:06proteínas fluorescentes Entonces el
- 1:09:09esquema en la parte izquierda me muestra
- 1:09:11como conservando el tejido y
- 1:09:13sometiéndolo a distintas técnicas yo
- 1:09:15puedo observar las características de
- 1:09:17las células como están organizadas en
- 1:09:19los tejidos o de las células con sus
- 1:09:22componentes celular celulares como el
- 1:09:24núcleo y el asma o cómo puedo ubicar
- 1:09:27dentro del tejido proteínas o ácidos
- 1:09:32nucleicos y por otro lado a la derecha
- 1:09:36tengo que puedo obtener material que no
- 1:09:39conserve su estructura puedo obtener
- 1:09:42plasma es líquido o puedo hacer un
- 1:09:45homogen y ese
- 1:09:47homogen a partir del homogen puedo hacer
- 1:09:49un fraccionamiento subcelular lo que no
- 1:09:51es muy frecuente en la práctica médica
- 1:09:53es más frecuente en la investig
- 1:09:55o de ese homogeno puedo purificar
- 1:09:58determinadas moléculas por ejemplo ADN
- 1:10:00ARN o
- 1:10:01proteínas Y entonces después puedo hacer
- 1:10:04estudios para analizar esas proteínas o
- 1:10:08esos ácidos nucleicos o puedo estudiar
- 1:10:11por ejemplo funciones enzimáticas
- 1:10:13entonces a partir de esa purificación yo
- 1:10:16puedo realizar técnicas de análisis que
- 1:10:19me permita por ejemplo mediante la
- 1:10:21técnica de electroforesis separar por
- 1:10:24carga eléctrica por tamaño distintas
- 1:10:27proteínas o distintas moléculas de
- 1:10:29ácidos
- 1:10:31nucleicos puedo realizar luego de
- 1:10:34electroforesis otros estudios que me
- 1:10:37permitan
- 1:10:38identificar la presencia y la cantidad
- 1:10:40relativa de ADN mediante la técnica de
- 1:10:43Southern Blood de ARN mediante la
- 1:10:45técnica de Northern Blood o de proteínas
- 1:10:48mediante la técnica de Western Blood o
- 1:10:51puedo utilizar el ADN y amplificar lo
- 1:10:56mediante la técnica de la reacción en
- 1:10:58polimerasa en cadena o puedo purificar
- 1:11:01ARN y mediante una transcriptasa reversa
- 1:11:04producir ADN complementario y luego ese
- 1:11:06ADN amplificar lo mediante la técnica de
- 1:11:08pcr y poder estudiar la presencia o no
- 1:11:12de una determinada
- 1:11:13molécula con estas moléculas purificadas
- 1:11:16Yo también
- 1:11:18puedo puedo manipularla puedo manipular
- 1:11:21por ejemplo los ácidos nucleicos y
- 1:11:23producir moléculas combinantes es decir
- 1:11:26que tengan distintas porciones de
- 1:11:28ADN y que yo puedo después fíjense la
- 1:11:32flecha hacia arriba a la izquierda puedo
- 1:11:34introducir esas moléculas modificadas
- 1:11:37esos ácidos nucleicos modificados en
- 1:11:39modelos experimentales y ver qué efecto
- 1:11:41tiene esas moléculas modificadas en los
- 1:11:44modelos
- 1:11:46experimentales también puedo utilizar
- 1:11:48una técnica que vamos a ver en la
- 1:11:50tercera en la segunda clase que es la
- 1:11:53técnica de Cris parcas que me permite
- 1:11:55producir mutaciones en el ADN de
- 1:11:58individuos o de células para evaluar Por
- 1:12:00ejemplo cuáles son las consecuencias de
- 1:12:02esas mutaciones Entonces en este esquema
- 1:12:06conceptual ustedes pueden ver que en el
- 1:12:09trabajo científico como en la consulta
- 1:12:12médica se obtienen muestras de tejidos
- 1:12:15yo puedo conservar la estructura de esas
- 1:12:17muestras o puedo
- 1:12:19destruirlas en el primer caso puedo
- 1:12:22observar en el microscopio
- 1:12:25la organización del tejido la forma y la
- 1:12:29estructura de las células de la matriz
- 1:12:31extracelular incluso la ubicación y la
- 1:12:34distribución de proteínas o ácidos
- 1:12:37nucleicos a la
- 1:12:39derecha mediante puedo utilizar ese
- 1:12:42homogen o ese plasma para purificar ADN
- 1:12:45ARN o proteínas y realizar estudios de
- 1:12:48esas proteínas esos arns o Esos adns sí
- 1:12:53Y también puedo ular los ácidos
- 1:12:56nucleicos y volver a introducirlos en
- 1:12:59modelos experimentales e incluso
- 1:13:01actualmente se pueden introducir en
- 1:13:04humanos para realizar
- 1:13:08tratamientos por último si nosotros
- 1:13:12analizamos el flujo de la información
- 1:13:15genética Cómo se expresa la información
- 1:13:18genética podemos ir si observamos la
- 1:13:20parte central del gráfico desde el ADN
- 1:13:23pasando por los ARN a las
- 1:13:26proteínas y tenemos distintas técnicas
- 1:13:29que nos permiten
- 1:13:32analizar las moléculas en esos distintos
- 1:13:36niveles de expresión génica por ejemplo
- 1:13:40hay técnicas que nos permiten analizar
- 1:13:42el
- 1:13:43ADN por ejemplo técnicas que nos
- 1:13:45permiten amplificar el ADN tener muchas
- 1:13:48muestras pcr
- 1:13:51qpcr secuenciar es decir obtener la del
- 1:13:57ADN
- 1:13:58reconocer moléculas de ADN mediante la
- 1:14:02unión de dos moléculas distintas por
- 1:14:04complementaridad de bases mecanismo que
- 1:14:06se llama hibridación o puedo modificar
- 1:14:09el ADN mediante técnicas de edición todo
- 1:14:12eso lo pueden ver a la
- 1:14:13izquierda las técnicas que ven a la
- 1:14:15izquierda actúan sobre el ADN y me
- 1:14:18permiten analizar el ADN a nivel de
- 1:14:22genes o porciones de ADN individuales si
- 1:14:25vamos a la derecha en el gráfico donde
- 1:14:28dice
- 1:14:30genoma hay técnicas que me permiten
- 1:14:32analizar todo el genoma o trabajar sobre
- 1:14:35todo el genoma por ejemplo hibridación
- 1:14:37en micromatrices técnicas que mediante
- 1:14:40la hibridación me permiten reconocer
- 1:14:42distintas porciones de todo el genoma Es
- 1:14:44decir de todo el ADN de una célula o de
- 1:14:46un tejido o técnicas de secuenciación
- 1:14:49masiva es decir que me permiten saber la
- 1:14:51secuencia de todo el ADN de todo el
- 1:14:54genoma de una célula o de un tejido
- 1:14:56entonces a la izquierda tenemos las
- 1:14:59metodologías que me permiten trabajar
- 1:15:02sobre el ADN sobre porciones de ADN y a
- 1:15:05la derecha sobre todo el ADN si vamos
- 1:15:08hacia abajo tenemos arns a la izquierda
- 1:15:11técnicas que me permiten trabajar sobre
- 1:15:13moléculas individuales de RN y a la
- 1:15:15derecha transcriptoma que significa el
- 1:15:19análisis del conjunto de ARN de una
- 1:15:22célula o de un tejido Entonces tenemos
- 1:15:25distintas técnicas que me permiten a la
- 1:15:27izquierda analizar
- 1:15:29arns individuales Como por ejemplo RT
- 1:15:33qpcr hibridación insitu nn Blood o
- 1:15:36evitar modificar arns mediante ARN de
- 1:15:40interferencia y a la derecha técnicas
- 1:15:43que me permiten mediante la mediante la
- 1:15:45hibridación o la secuenciación
- 1:15:48masiva seguidas de la retrotranscripción
- 1:15:51es decir Yo puedo purificar ar
- 1:15:53rn utilizar una transcriptasa inversa
- 1:15:56que me convierta ese ARN en ADN y luego
- 1:15:59por hibridación reconocer todos los ARN
- 1:16:03de la célula o del tejido o por
- 1:16:05secuenciación masiva reconocer la
- 1:16:08secuencia de todos los ARN de esa célula
- 1:16:11o de ese tejido por último si vamos a
- 1:16:13las proteínas a la izquierda tenemos las
- 1:16:15técnicas de inmunohistoquímica o
- 1:16:18inmunofluorescencia que me permiten
- 1:16:20detectar una proteína específica en el
- 1:16:22tejido ver su distribución la técnica de
- 1:16:25Western Blood que me permite detectar
- 1:16:27por la reacción antígeno anticuerpo la
- 1:16:31cantidad relativa y el peso molecular de
- 1:16:34una proteína la citometría de flujo que
- 1:16:37me permite separar por ejemplo células
- 1:16:39dependiendo de la presencia de una
- 1:16:41proteína específica la cristalografía de
- 1:16:43rayos x que me permite ver la estructura
- 1:16:46tridimensional de una proteína y la
- 1:16:49espectrometría de resonancia magnética
- 1:16:50nuclear que también me permite reconocer
- 1:16:53la estructura de una proteína eso a la
- 1:16:56izquierda Me permite trabajar sobre
- 1:16:57proteínas individuales a la derecha
- 1:17:00tenemos una técnica que me permite
- 1:17:03investigar el proteoma es decir el
- 1:17:05conjunto de proteínas de una célula o de
- 1:17:07un o de un tejido que básicamente tiene
- 1:17:11dos pasos la electroforesis o
- 1:17:13cromatografía que me permite separar las
- 1:17:15proteínas de un tejido y
- 1:17:18luego de romperlos esas proteínas se
- 1:17:22puede analizar mediante una técnica
- 1:17:24llamada espectrometría de masas que me
- 1:17:26permite analizar y tener el conocimiento
- 1:17:28de todas las proteínas de una célula o
- 1:17:30de un tejido entonces este esquema nos
- 1:17:33muestra que hay técnicas que me permiten
- 1:17:36analizar y manipular el ADN hay técnicas
- 1:17:40que me permiten analizar y manipular los
- 1:17:42arns y hay técnicas que me permiten
- 1:17:45analizar y manipular las proteínas a la
- 1:17:47izquierda tenemos las técnicas que nos
- 1:17:50permiten trabajar a nivel de una sola
- 1:17:52molécula detectar
- 1:17:55sobre una sola molécula de o una porción
- 1:17:57de ADN una rn o una proteína y a la
- 1:18:02derecha aquellas técnicas que me
- 1:18:04permiten Tener información del
- 1:18:08conjunto de las moléculas en una célula
- 1:18:11o en un tejido es decir del genoma del
- 1:18:14transcriptoma o del proteoma sobre
- 1:18:17algunas de estas técnicas es que vamos a
- 1:18:19hablar en la clase siguiente
- 1:18:25entonces para sintetizar los contenidos
- 1:18:28de los cuales hablamos en la clase de
- 1:18:30hoy primero hablamos sobre los niveles
- 1:18:32de organización de la materia y como las
- 1:18:35distintas ciencias utilizan distintos
- 1:18:39instrumentos para estudiar los distintos
- 1:18:41niveles de organización de la materia
- 1:18:44luego hablamos de la metodología
- 1:18:47científica hablamos del método inductivo
- 1:18:50y de los trabajos científicos hablamos
- 1:18:52de los modelos experimentales y de los
- 1:18:55estudios inv vivo invitro y libres de
- 1:18:57células En tercer lugar hablamos de la
- 1:19:00metodología deductiva que utiliza el
- 1:19:03equipo médico para emplear conocimientos
- 1:19:06generales obtenidos por la ciencia para
- 1:19:07resolver casos particulares de los
- 1:19:10pacientes
- 1:19:13y un esquema global de las metodologías
- 1:19:16de estudio de los tejidos células y
- 1:19:20macromoléculas según la forma de
- 1:19:22obtención y procesamiento de las
- 1:19:23muestras
- 1:19:25según el nivel la relación con el nivel
- 1:19:27de expresión génica y en relación al
- 1:19:30número de moléculas
- 1:19:32analizadas Esto entonces resume lo que
- 1:19:35hemos hablado hoy y para la clase
- 1:19:38próxima es decir la segunda clase vamos
- 1:19:40a trabajar sobre las algunas las
- 1:19:43principales técnicas que nos permiten
- 1:19:45estudiar proteínas y ácidos nucleicos en
- 1:19:48forma individual o en forma
- 1:19:52global Muchas gracias a hasta la próxima
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