Precipitacion 2 — Transcript

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1. 0:00y continuar con la presentación
2. 0:04de precipitación nos queda pendiente el
3. 0:07uso de solventes para precipitar
4. 0:11para prestar proteínas y el uso de
5. 0:13polímeros no únicos vamos a empezar con
6. 0:16con solventes
7. 0:19aquí estamos anunciado que dice que si
8. 0:21tu adicción es un solvente orgánico a tu
9. 0:23mezcla donde está disuelta tu mezcla
10. 0:27como solución acuosa donde tienes a tu
11. 0:29proteína y le adiciona un solo ente
12. 0:31orgánico puedes provocar su
13. 0:33precipitación
14. 0:37aquí hay una tabla de constantes y
15. 0:40eléctricas
16. 0:43el agua por ejemplo tiene una constancia
17. 0:45eléctrica muy alta el metanol más baja y
18. 0:49la más baja a estos malos consejeros
19. 0:54porque necesitamos que el sólido técnico
20. 0:56que se adicione sea soluble en agua
21. 1:00la constante eléctrica déjenme en trato
22. 1:03de explicar qué cosas
23. 1:05supongan que toda la pantalla que está
24. 1:08aquí en negro es agua
25. 1:10y lo que hacemos es agregamos
26. 1:15que soy
27. 1:17lo que hace la vuelta para el cristal
28. 1:19pues es es rodear a estos iones o sol
29. 1:23matar los voy a considerar que esto
30. 1:26verde son moléculas de agua
31. 1:38y si vas a tener en tu solución pues un
32. 1:40mar de iones sodio y otro igual de iones
33. 1:43cloro
34. 1:45la constante eléctrica
35. 1:49es una medida de lo siguiente escribirlo
36. 1:55qué tan probable
37. 2:03es que
38. 2:05el ión sodio
39. 2:07interactúen
40. 2:16qué tan probable es que interactúen
41. 2:35qué tan probable es que el que ese yo
42. 2:39sodio
43. 2:42interactúen
44. 2:48el ión cloruro
45. 2:52es decir cuál es la probabilidad de que
46. 2:55esta molécula oeste johnny este choque e
47. 2:58interactúa
48. 2:59la respuesta es es muy baja la
49. 3:03probabilidad más alta es que el sodio
50. 3:05siempre que se mueva e interactúe con
51. 3:08moléculas de agua
52. 3:11entonces la constante de eléctrica es
53. 3:13una representación más o menos de esto
54. 3:15de qué tan probable es que estos solutos
55. 3:17que están disueltos en agua interactúan
56. 3:20y la respuesta es cuando esa agua esa
57. 3:22prioridad es bajísima pues el agua tiene
58. 3:24la constante eléctrica más grande de la
59. 3:26probabilidad de que estos iones
60. 3:27interactúan o que cuando se están
61. 3:29moviendo choquen con el ión opuesto es
62. 3:31muy baja más bien siempre están chocando
63. 3:34con moléculas de agua
64. 3:38eso es una representación entonces
65. 3:45de lo que es la constante y eléctrica
66. 3:47entonces qué es lo que pasa cuando
67. 3:48adicionamos mejor
68. 3:53qué es lo que pasa cuando
69. 3:56adicionamos por ejemplo etanol
70. 4:00a nuestra solución acuosa
71. 4:03lo que sucede es que la constante
72. 4:04eléctrica
73. 4:06igual era 80 y lo que hacemos es la
74. 4:09disminuimos la de la mezcla entonces la
75. 4:12constante eléctrica de de la mezcla
76. 4:21es lo que es representada anteriormente
77. 4:25desde entonces estoy aumentando la
78. 4:26probabilidad de que esos solutos choquen
79. 4:29e interactúan
80. 4:31la cosa es que si esos solutos son
81. 4:33proteínas ya sabemos que se quiere unir
82. 4:36por el efecto hidrofóbico entonces lo
83. 4:39que estamos haciendo la grados ambiente
84. 4:40orgánico estamos favoreciendo que las
85. 4:42moléculas choquen y que entonces se unan
86. 4:44por efecto del fobic o ahí en la libre
87. 4:47otra vez hay varias teorías de que está
88. 4:49pasando como es que adicionar un
89. 4:51solvente orgánico precipita proteínas
90. 4:56pero por la que me hace más sentido otra
91. 4:58vez es esta de que el agua está
92. 5:00compitiendo por las moléculas del vagón
93. 5:02el solvente que adicionamos el solvente
94. 5:04orgánico compite con por las moléculas
95. 5:07de agua y en esa competencia pues
96. 5:10favorece la interacción de los frutos y
97. 5:12si son proteínas pues terminan
98. 5:13precipitándose
99. 5:18aquí están las moléculas de esta semana
100. 5:20que la tengo aquí pero pues ahí están
101. 5:23las fórmulas o representaciones de las
102. 5:26moléculas de los solventes orgánicos o
103. 5:29los más utilizados para como digo tienen
104. 5:32que cumplirse que sean solubles en agua
105. 5:35hessel ventroni consell benceno no sirve
106. 5:38de mucho el hexano está un poco pero
107. 5:40esto si el metanol si es soluble en agua
108. 5:43el etanol también
109. 5:45y por aquí está la acetona esos tres son
110. 5:48los más comunes para precipitar
111. 5:49proteínas
112. 5:51todos pueden interactuar con el agua
113. 5:54pues a través de esta parte
114. 5:59cuando se adicionan se alienta orgánico
115. 6:01para bajar la constante eléctrica del
116. 6:04lazo de la nueva solución y que se
117. 6:07precipiten las proteínas puede
118. 6:09presentarse la situación que comentaba
119. 6:11para el caso de adición de sal o o
120. 6:14moviendo el ph o adición de ph de
121. 6:17protones
122. 6:19si la adicción es solvente orgánico es
123. 6:21brusca y
124. 6:23y puedes provocar que las proteínas se
125. 6:25desnaturalicen se precipiten
126. 6:28pero estén desnaturalizadas
127. 6:33entonces otra vez tiene que ser el
128. 6:34proceso muy suave para que la proteína
129. 6:36no pierda su estructura terciaria y al
130. 6:38formar el sólido yo no pueda red y
131. 6:40soldar
132. 6:43otro problema con el solvente orgánico
133. 6:47me voy a regresar
134. 6:51al inicio
135. 6:54en la representación está el general de
136. 6:57proteína estar aquí
137. 7:02esto que está aquí representa la
138. 7:04proteína que es la estructura terciaria
139. 7:06y ya establecimos qué
140. 7:09responde al solvente entonces porque se
141. 7:13pliega de cierta forma es porque el
142. 7:15solvente es agua
143. 7:17y entonces lo que trata de hacer es pues
144. 7:19expongo residuos que quieren tratar con
145. 7:21el agua en los ácidos aspártico
146. 7:23glutámico él y sin arginina es divina y
147. 7:26trato de enterrar o que preferentemente
148. 7:29estén en la parte interna de la proteína
149. 7:31los residuos hidrofóbicos para que no
150. 7:34interactúan con el agua no los puede
151. 7:35enterrar todos y me quedan unos parches
152. 7:37hidrofóbicos en la superficie
153. 7:40qué es lo que seré si de repente decimos
154. 7:43vamos a meterla
155. 7:45y metanol al sistema ya no sólo va a ser
156. 7:48agua también van a haber moléculas
157. 7:51de etanol
158. 7:54se va a favorecer la precipitación pero
159. 7:56qué pasa si es mucha
160. 7:58y si es mucha concentración de hacer de
161. 8:03solvente orgánico que se agrega
162. 8:06el problema es que este solvente si
163. 8:09puede interactuar con estas regiones
164. 8:11hidro fontes él si puede el agua
165. 8:17y si pueden tratar con esas pensemos que
166. 8:21esto que voy a dibujar
167. 8:24es una región hidrofóbica pero que está
168. 8:26interna no la vemos
169. 8:32el plegamiento hizo que esa región que
170. 8:34estuviera internalizada y no está
171. 8:36expuesta
172. 8:38pero el solvente orgánico si puede
173. 8:40interactuar entonces con
174. 8:43con
175. 8:46con la región hidrofóbica expuesta pues
176. 8:48también puede entrar en la estructura de
177. 8:50la proteína e irse hacia el interior e
178. 8:52interactuar con este y el problema de
179. 8:54esa situación es que entonces el
180. 8:57plegamiento va a cambiar porque antes
181. 8:59del plegamiento la estructura 3a
182. 9:01respondía que el solvente externo era
183. 9:03agua y es completamente hidrofílico pero
184. 9:05luego que izaban mira hay algo que
185. 9:06también puede entrar todo lógicamente
186. 9:08eso también puede perturbar la
187. 9:10estructura de la proteína densidad ya no
188. 9:11tengo que mantener enterrados a estos
189. 9:13aminoácidos hidrofóbicos los expongo
190. 9:15porque ellos si pueden interactuar con
191. 9:17el solvente blanco y en esa exposición
192. 9:19se puede perder la estructura te decía
193. 9:21entonces
194. 9:23con esta nota decir que no funciona así
195. 9:25funciona la precipitación contra el ente
196. 9:27orgánico nada más que hay que tener
197. 9:28estos cuidados estoy comentando
198. 9:32entonces precipitación suave y no va a
199. 9:34agregar tanto solvente orgánico
200. 9:37nos regresamos acá donde llevamos bien
201. 9:42aquí está un poco de la batería del
202. 9:44mecanismo esto no voy a decir ya medio
203. 9:46lo expliquen esto así es importante la
204. 9:49constante dieléctrica que yo presenté
205. 9:52allá seguramente es a 25 grados depende
206. 9:54de la temperatura
207. 9:59y lo que hace la gente para hacer más
208. 10:01suave el proceso este de precipitación
209. 10:03que tiene que ver con modificar el valor
210. 10:05de la constante de eléctrica para que no
211. 10:07cambie tan tan bruscamente
212. 10:11si lo hacemos así como está aquí y
213. 10:14bajamos de 80 y bajamos 80 muy rápido
214. 10:17porque agregamos el canal que está en 24
215. 10:21la constante eléctrica se puede
216. 10:23precipitar la proteína como digo
217. 10:25irreversiblemente
218. 10:27entonces lo que hace la gente es bajemos
219. 10:30los valores de constante eléctricas para
220. 10:31que el cambio no sea tan brusco si vamos
221. 10:34a bajarla pero que no sea tan brusco ese
222. 10:36cambio y eso se logra haciendo entonces
223. 10:39la precipitación utilizando etanol es
224. 10:42como dice aquí para el ejemplo del
225. 10:44plasma humano
226. 10:46se adiciona el etanol a menos 10 grados
227. 10:48centígrados y esto que está aquí pues es
228. 10:51general
229. 10:53si precipita y proteínas la media las
230. 10:55proteínas no aguantan precipitar las a
231. 10:57temperaturas mayores a dos de los dos
232. 10:58sentidos de proteínas que si resisten
233. 11:00esto pero en general la precipitación
234. 11:03busca hacerse con solventes orgánicos
235. 11:05fríos
236. 11:07y también en el laboratorio podrán
237. 11:09precipitar proteína por adición de
238. 11:12solvente orgánico y podrán hacerlo a
239. 11:13menos 20 grados a 4 grados centígrados y
240. 11:17a temperatura ambiente y podrán ver qué
241. 11:20diferencias hay
242. 11:23aquí estaba un modelo de
243. 11:27para describirla como es que perturba so
244. 11:31bajas la solubilidad por andar cambiando
245. 11:33la constante de eléctrica
246. 11:36también pudiéramos usar la ecuación de
247. 11:37con
248. 11:40aquí está algunas recomendaciones sobre
249. 11:43el solvente
250. 11:47ya establecí el problema que puede
251. 11:49ocasionar la desnaturalización lo que se
252. 11:51pierde la estructura sería generar un
253. 11:52sólido pero ya no lo puedes resolver ya
254. 11:54no sirve para nada
255. 11:56aquí está también el requisito después
256. 11:58del solvente orgánico debe ser visible
257. 12:00por eso pensé no y el examen no nos
258. 12:03sirven de mucho
259. 12:05y pues no debe reaccionar con las
260. 12:07proteínas debe ser bueno para precipitar
261. 12:09y debe ser seguro entonces yo no usara
262. 12:11el metanol
263. 12:12no usará etanol o acetona
264. 12:15finalmente en esta parte de disminución
265. 12:18de la solubilidad tenemos en la
266. 12:20precipitación con polímeros muy únicos
267. 12:24y una cosa que ya establecimos antes es
268. 12:27el agua
269. 12:29prefiere disolver cosas con cargas
270. 12:32absolutos con carga y que sean pequeños
271. 12:37si puedes haber proteínas pero tiene
272. 12:39problemas para querer hacerlo por eso es
273. 12:42que agregarle algo que compita termina
274. 12:45precipitando las proteínas porque el
275. 12:46agua entonces tenía problemas para
276. 12:48disolverlos
277. 12:53esta precipitación con polímeros iónicos
278. 12:56explota esta parte de tamaño
279. 13:01y de al mismo tiempo competencia por
280. 13:03moléculas de
281. 13:05de agua el polímero único que vamos a
282. 13:08agregar el agua tiene mucha afinidad por
283. 13:10él aún cuando es una molécula grande
284. 13:16y entonces a la adicional al adicionar
285. 13:19se este polímero el agua prefiere
286. 13:21disolverlo a él y deja de solubilizar a
287. 13:23la proteína y se nos precipita
288. 13:27y la ventaja de la presentación con
289. 13:30polímeros no únicos es que es muy poco
290. 13:34probable que desnaturaliza la proteína
291. 13:37cuando se precipita entonces es una
292. 13:38ventaja sobre los otros métodos
293. 13:41el solvente más utilizado perdón en el
294. 13:44polímero más utilizado es el
295. 13:45polietilenglicol
296. 13:49y como digo el político le en especial
297. 13:51es un polímero aquí está representado
298. 13:54por aquí abajo
299. 13:56que tiene muchísima afinidad por el agua
300. 13:59o el agua tiene mucha afinidad por el
301. 14:00siempre va a preferir disolverlo y la
302. 14:03otra cosa que ocurre con el político en
303. 14:07glicol es que ocupa mucho volumen en el
304. 14:09espacio
305. 14:12es decir
306. 14:15mientras todo para presentarlos
307. 14:22entonces tenemos nuestra proteína
308. 14:26con sus regiones hidrofóbicas
309. 14:29y pues esa proteína tiene ciertas
310. 14:31dimensiones en el espacio
311. 14:35nuestras moléculas de agua
312. 14:38están interactuando con una proteína con
313. 14:41los riñones hidrofílicas para disolverla
314. 14:51si la solución digamos que el recipiente
315. 14:53aquí de manera exagerada nada más es
316. 14:56este o mi solución ocupa este volumen
317. 15:03a la hora que agregamos el política
318. 15:04agrícola tiene la bonita característica
319. 15:07de ser una molécula muy grande entonces
320. 15:10polietilenglicol logró representar así
321. 15:14pero es una molécula muy grande
322. 15:17que pudiera ser
323. 15:19equivalente en tamaño a las proteínas
324. 15:21grandes
325. 15:23entonces
326. 15:26el problema o más bien la ventaja que
327. 15:28tiene es como ya dije el agua prefiere
328. 15:31venirse a interactuar con él
329. 15:35pero adicionalmente palabra que estás
330. 15:38agregando moléculas de política en
331. 15:40glicol eventualmente el espacio puede
332. 15:42estar todo ocupado por por este polímero
333. 15:45gigantesco
334. 15:48y qué es lo que ocurre con la proteína
335. 15:49que se ve forzada a precipitarse
336. 15:53hay una y hay un efecto también por el
337. 15:55tamaño
338. 16:00aquí hay mecanismos que no voy a
339. 16:02explicar del que hace sentido es el que
340. 16:04estoy diciendo y también se puede
341. 16:06utilizar la ecuación de con este equipo
342. 16:08sigue siendo el modelo de con que está
343. 16:11la salud bilidad aquí está la
344. 16:12concentración de polímero que se agrega
345. 16:17más concentración de polímero menos
346. 16:19solubilidad de tu proteína
347. 16:21y algunos otros modelos que no voy a
348. 16:23hablar aquí están a través datos de
349. 16:26alguna encima en el eje x está la
350. 16:29concentración de política en glicol y en
351. 16:31él pues una medida de la el logaritmo de
352. 16:34la solubilidad si sigue en una relación
353. 16:36lineal pues están descritas por el
354. 16:38modelo de com y como pueden ver pues ahí
355. 16:41hay varias donde si hay
356. 16:43no está de este lado no más bien está
357. 16:48te amo de nada
358. 16:58y como ven ahí hay unos datos que son
359. 17:00curvos
360. 17:04pero si estás precipitando y nada más
361. 17:06estás aquí no puedes aproximar como una
362. 17:09línea recta sin problema
363. 17:15que hay información general
364. 17:19el esquema se utiliza es el de 4000 de
365. 17:23alto
366. 17:26y como ocupa mucho volumen eso es lo que
367. 17:30lo que está aquí en esta viñeta se
368. 17:32requieren bajas concentraciones de pep
369. 17:33para precipitar proteínas de alto peso
370. 17:35molecular y también está lo que decía
371. 17:38estos polímeros que se agregan
372. 17:40estabilizan la proteína y pues se
373. 17:44precipita de una manera suavizada
374. 17:46entonces la propiedad que se naturalice
375. 17:48es bajísima
376. 17:51qué más puedo decir
377. 17:53el peeling glicol es caro entonces tu
378. 17:56proteína tiene que ser más cara para
379. 17:58usar esto hay muchas proteínas que se
380. 18:02obtienen por precipitación
381. 18:03específicamente con solventes orgánicos
382. 18:05y una de ellas pues es la albúmina
383. 18:08y el suelo se puede fraccionar obtener
384. 18:11diferentes canciones de proteína como
385. 18:14utilizando diferentes concentraciones de
386. 18:15solventes orgánicos entonces todo lo que
387. 18:17estamos viendo aquí tiene aplicaciones
388. 18:19aplicaciones importantes
389. 18:24bueno aquí terminó este vídeo para el
390. 18:27siguiente empezar cómo regresar a la
391. 18:30a semanas al principio
392. 18:34dónde vamos
393. 18:39ella revisamos disminución de
394. 18:41solubilidad con estas cuatro opciones en
395. 18:44el siguiente vídeo pues hablo de
396. 18:46desnaturalización selectiva donde ahora
397. 18:49buscamos precipitar a las proteínas
398. 18:52contaminantes