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Acreditable inmuno UABP 2 — Transcript

by Fausti Del Mestre · 7,172 words · 1,226 segments · language en · Watch on YouTube

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0:00menos de él
0:01del libro de libros de español
0:08así que bueno ustedes entonces
0:12pueden interrumpiendo meses sin problema
0:15durante la charla con las preguntas que
0:17tengan y
0:20y bueno después cuando el
0:23lunes porque saben que las
0:25evaluaciones el lunes tienen dos
0:28evaluaciones una mañana ya tratar de de
0:31acá lunes todos ustedes tienen que
0:32repasar estos conceptos tienen traten de
0:35rehacer y rever los los problemas y
0:38entenderlos y con eso van a poder hacer
0:41la evaluación tranquilamente bien
0:46el tema de hoy es estructura y función
0:49anticuerpos y técnicas de inmuno
0:51diagnóstico entonces ustedes acá tienen
0:53que pasar el concepto de que es un
0:55anticuerpo
0:57qué función tiene cómo actúa y vamos a
1:02usar el concepto de técnica de unidad no
1:05tengo para repasar justamente concepto
1:08de antígeno anti 4
1:12profe disculpe hay gente en el chat
1:15y los chats no para aceptar si gracias
1:18ahora dentro
1:24tenemos esto
1:48pasa que si dejo esto abierto esta pala
1:52destapar las diapositivas y no las vean
1:54así que bueno cualquier cosa me vuelve a
1:56avisar es un tema porque interrumpe todo
2:03bueno pasamos entonces a la primera
2:05diapositiva la utilización de antígeno
2:08anticuerpo en el laboratorio
2:09bueno los anticuerpos son moléculas muy
2:13específicas que permiten detectar
2:18cualquier tipo de molécula o sea
2:21proteínas lípidos sea polisacáridos y lo
2:25debe de permitir y lo que determina es
2:28la estructura terciaria de cuaternaria
2:30de esos antígenos
2:33la característica que tiene es que son
2:36muy específicos o sea pueden detectar
2:39específicamente una molécula y no se
2:41equivocan cristaliza molecular en otra y
2:44además como la detectan con mucha
2:47afinidad pueden usarse en
2:49concentraciones mínimas lo que hace es
2:52que puede detectar con muchísima
2:53sensibilidad cualquier antígeno y a su
2:56vez con más tijera se puede detectar con
2:58mucha sensibilidad un anticuerpo esto
3:01permite
3:02identificar marcadores
3:04que permiten detectar enfermedades o
3:08infecciones o determinar distintos
3:10estadios fisiológicos
3:18bueno para qué sirve la dieta de la
3:23determinación
3:25en el laboratorio bueno los
3:31las técnicas de inmunoquímica pueden
3:33usarse para detectar anticuerpos
3:37hay alguien más ahora si me ponen bueno
3:39vamos a estar un poquito interrumpido no
3:41sé hasta que terminan de entrar
3:44e
3:46re comenzamos entonces vamos a ver cómo
3:49pueden usarse las técnicas de
3:51inmunoquímica de inmuno diagnóstico
3:55se puede detectar antígenos con las
3:58técnicas de inmunoquímica o se pueden
4:01detectar anticuerpos si uno tiene un
4:04antígeno específico lo puedo usar para
4:07este esperma anticuerpo que desarrolle
4:09un individuo frente de una infección por
4:11ejemplo y a su vez si uno dispone de
4:14anticuerpos contra antígenos lo puede
4:16usar para
4:18determinar
4:20buscaran antígenos correspondientes a
4:23qué virus
4:26y bacterias que produce una infección
4:28entonces aquí en este gráfico ustedes
4:31ver por ejemplo cuando tiene una
4:33infección viral ustedes tienen una
4:35primera etapa los primeros dos días de
4:37la infección tienen una alta carga de
4:39virus por ejemplo en sangre
4:43/ el qué
4:45la primera semana por ejemplo tiene una
4:48alta carga y a partir del cuarto quinto
4:51día empiezan a aparecer anticuerpos los
4:53primeros que aparecen son y gm y luego
4:55aparece mi jefe entonces aquí con las
4:58técnicas inmunoquímica ustedes tienen la
4:59posibilidad tanto de detectar la
5:02presencia de virus en la etapa aguda
5:04como el desarrollo de anticuerpos
5:09puede ser y jejeje m cuando empieza el
5:13organismo a defenderse contra esa
5:16infección entonces si usted stepanova
5:19jover después que si detectan
5:20[Música]
5:22el
5:23patógeno estamos hablando que se está
5:26haciendo una detección directa si lo que
5:29detectan es el anticuerpo se dice que se
5:31hace una detección iniesta porque el
5:33rayar estamos detectando la reacción del
5:36organismo en contra del patógeno no el
5:38pastor final sí entonces es por eso que
5:41se habla de una detección indirecta
5:48eso en cuanto a la detección de
5:51patógenos pero también se puede detectar
5:53otras otras
5:55otras moléculas como por ejemplo
5:58hormonas ustedes hagan bien por ejemplo
6:00el tan conocido debate es permite
6:03detectar el embarazo detectando a la
6:06hormona
6:08entonces
6:10si está basado en el mismo principio de
6:13usar un anticuerpo que detecta la verdad
6:17a otro áfrica con iván y coma
6:27bueno nos vio arriba
6:31significa para la pantalla
6:35qué información puede dar las técnicas
6:38de dibujo diagnóstico
6:41bueno podemos ver
6:44presencia o ausencia de infección
6:46en cuanto a si hablamos de infecciones
6:51propiamente dicho no podemos hablar de
6:53presencia o ausencia de infección ahí
6:55podemos como mencionaba hoy medir
6:57antígenos del patógeno pedir anticuerpos
7:00contra el patógeno entonces sería
7:01detección directa si el antígeno
7:04intención indirecta si medimos
7:06anticuerpos pero además nos permiten
7:09hacer otro tipo de determinaciones como
7:12por ejemplo medir el estado de la
7:15infección viviendo a dicho tipo la
7:17especificidad del anticuerpo o la vía
7:20ahora vamos a pasar estos un poquito a
7:21ver de qué estamos hablando
7:24cuando hablamos dicho tipo especificidad
7:29ustedes vieron sea
7:33el seminario y también en el libro que
7:37existen distintos tipos de anticuerpos
7:39ustedes tienen indicios de que eligen ig
7:43de ustedes
7:45tienen que repasar cuál es la función de
7:48cádiz o tipo y cuál es el tiempo en
7:50donde aparecen y cómo actúan eso bueno
7:55mucho de eso de estos temas se los vamos
7:59a tomar en el en la evaluación así que
8:05acá yo les dejo un pequeño resumen una
8:09tablita con un pequeño resumen sobre la
8:11función de cádiz o tipo
8:14ustedes saben que una infección parece
8:18el egm después casi simultáneamente si
8:22la infección es volvían cosas aparece el
8:24ejea y
8:26la fm
8:28y persiste durante las primeras semanas
8:30pero desaparece rápidamente en cambio la
8:33exige que aparece un poquito más tarde
8:35por el concepto de lo que es el cambio
8:38de hizo tipo en el curso de la formación
8:42de la respuesta inmune
8:44puede aparecer y persiste por lo que es
8:47la memoria inmunológica que genera
8:48anticuerpos de ese tipo y jeje entonces
8:50luego una infección a la larga persiste
8:53lgg y ese es el principal fundamento por
8:56el cual funcionan las vacunas que
8:59permiten generar anticuerpos y gg que
9:02protegen contra posteridad es
9:03infecciones
9:06entonces
9:10frente a una infección pidiéndole ese
9:14tipo nosotros podemos tener información
9:17acerca de si la infección es reciente o
9:19una infección antigua por ejemplo
9:24acá en esta tabla podemos ver que si
9:26hacemos una determinación de gm y jeje y
9:30la izquierda es positiva el eje negativa
9:32obviamente se trata una infección
9:34reciente que está dentro de la primera
9:37semana quizás de contra ella la
9:39infección si la higiene es positiva el
9:43eje es positiva
9:45es también probablemente una infección
9:47reciente porque todavía tenemos
9:49disponibilidad de gm esto lo podemos ver
9:52en el gráfico es
9:55que si sigue habiendo y gm es porque las
9:59infecciones recientes y el momento del
10:01egm ya no están solas y que la infección
10:04ya es ya ha desaparecido y sólo queda
10:07memoria
10:09y ese es el caso de de el tercer la
10:13tercera fila fíjense una negativa con un
10:17eje positiva tenemos inmunidad contra la
10:20infección
10:21bien y sigamos anticuerpos son negativos
10:24y nos está indicando rsc ausencia de
10:27infección discurso que voy a admitir acá
10:33bueno pasemos ahora entonces a ver
10:37[Música]
10:39y la especificidad
10:41si hablamos del icio tipo qué rol cumple
10:43hizo tipo en un en un diagnóstico veamos
10:46ahora la especificidad el anticuerpo
10:51bueno como ejemplo de específica
10:53anticuerpo les traigo el de la
10:55determinación de hepatitis b ustedes
10:58saben la hepatitis b es un virus
11:00envueltos es un virus doble cadena de
11:02dna que está envuelto que tienen una
11:05cárcel de una cárcel de oportunidades
11:08proteicas que envuelve al adn
11:11y por otro lado tiene una envoltura que
11:13está compuesta también por fosfolípidos
11:15y proteínas entonces es en el curso de
11:19la infección
11:20[Música]
11:21van a aparecer en los primeros días de
11:24la infección cuando se está
11:26desarrollando la sintomatología y tienen
11:29la sintomatología
11:30aparecen en sangre una gran carga de
11:34antígenos hbs que son los antígenos que
11:36están en la envoltura
11:39al poquito tiempo
11:41luego de la semana de la infección
11:43empiezan a aparecer anticuerpos es ahora
11:46aparecer anticuerpos y gm anti hrs
11:52y
11:53más tarde aparecen los anti hb ese
11:57antígeno bastante más tarde entonces
12:00nosotros desarrollando ningunos
12:02diagnósticos que nos permitan detectar o
12:05bien el antígeno o bien el anticuerpos
12:07específicos contra el htc o hbs podemos
12:13tener una idea de en qué etapa de la
12:16infección estamos siguiente estamos
12:18agencias dije no sabemos que estamos en
12:21la etapa aguda
12:23y podemos confirmar la infección si a
12:25eso le sumamos los síntomas y asia y
12:27sospecha de infección y encontrar un
12:29antígeno podemos confirmar la presencia
12:31de infección y luego están los
12:34anticuerpos podemos tener una idea de el
12:37tiempo en el que se está desarrollando
12:39una infección
12:47bueno cómo funcionan las técnicas de
12:49inmuno diagnósticos aquí hay que tener
12:51en cuenta que hay dos tipos de
12:53reacciones que se utilizan para el
12:55inmundo diagnóstico una es la reacción
12:57primaria de antígeno anticuerpo y otras
13:01la reacción secundaria la reacción
13:03primaria es que consiste en la reacción
13:05que se determina entre un solo
13:07anticuerpo de un solo antígeno
13:10y entonces para que esta reacción se
13:12pueda visualizar
13:15s
13:17e
13:19es necesario solamente que haya una
13:21integración entre un cuerpo monovalente
13:24con un antígeno monovalente en la
13:26reacción secundaria en cambio
13:29se produce una interacción entre muchos
13:32anti tienen muchos anticuerpos que
13:34forman una red de antígeno anticuerpos
13:37que puede ser visualizada a simple vista
13:41para que se pueda formar esa red es
13:44necesario que los antígenos y los
13:47anticuerpos sean equivalentes o sea que
13:49tengan varios sitios de acción si no no
13:51se forma la red
13:52entonces vamos a ver ejemplos de cada
13:55uno de ellos para que usted entienda
13:56mejor el concepto
13:58empecemos por lo que es la reacción
14:00primaria para que se produzca una
14:02reacción primaria necesitamos entonces
14:04un pérez y un antígeno que tiene un
14:08solo sitio de reconocimiento ejemplos de
14:11reacciones
14:13ninguno diagnóstico que se basa en este
14:16principio son elisa radio un ensayo
14:18quimioluminiscencia inmunofluorescencia
14:20y western blot ahora lo vamos a ver y en
14:24los problemas lo vamos a tratar
14:27para el desarrollo de estas regiones es
14:30lo que se hace es fijar el antígeno por
14:35ejemplo si tenemos si queremos detectar
14:37anticuerpos en el suelo de un paciente
14:39contra un virus lo que hacemos es
14:43detectar es fijar en una superficie el
14:47virus se lo pega de alguna manera hay
14:50distintas maneras para pegarlo se lo
14:52puede pegar en una superficie luego
14:54incubamos el virus pegado en la
14:57superficie con el suero del paciente en
15:01donde están los anticuerpos entonces los
15:02anticuerpos se van a pegar al virus que
15:05está fijado en la superficie
15:08tenemos que lavar para que se vayan
15:10todos los anticuerpos que no son
15:12específicos y que no se pegaron y a
15:14continuación lo enfrentamos a un segundo
15:18anticuerpo
15:19marcado esto generalmente es un
15:21anticuerpo comercial que tiene una marca
15:23que nos permite saber si este anticuerpo
15:26está presente en nuestra presente ósea y
15:28en qué consiste esta marca bueno hay
15:30distintos tipos de marcas
15:34sí sí esta marca es un compuesto
15:37radioactivo puede ser cualquier molécula
15:42radioactiva
15:43si el ensayo se llama radio isótopos si
15:49es un flor o foro se llama
15:53que puede ser florece y se llama
15:55inmunofluorescencia si es una enzima se
15:58llama el ensayo se llama elisa y si es
16:02un químico luminiscente o sea una mole
16:05de luz se llama quimioluminiscencia
16:09y cualquiera de estas señales que emite
16:13este anticuerpo se detectan a través de
16:15algún tipo de lector específico para esa
16:18señal por ejemplo es desde el caso de un
16:21lector de elisa
16:25pasemos entonces a analizar en qué
16:29consiste en qué consiste en estas
16:32técnicas
16:33y pusimos en el caso de la liza que es
16:37el más comúnmente utilizado pero después
16:41como les explique todos nosotros de
16:43todas las otras técnicas que están
16:46basadas en reacciones primarias son
16:49básicamente iguales lo único que cambia
16:51es la marca que tiene el anticuerpo para
16:54poder ser detectado
16:56si nosotros lo que queremos detectar es
16:58un antígeno por ejemplo lo que hacemos
17:02es pegar en una placa de lisa
17:05una planta de visa tiene esta forma
17:07lamentablemente esto cuando hacemos la
17:09clase presenciales llevamos y
17:11demostramos que no podemos mostrar pero
17:14básicamente son unas plaquetas plásticas
17:17que tienen 96 pocillos en donde cada
17:20pósito se puede poner la muestra de
17:23suero a evaluar entonces en una placa
17:25entran 96 muestras
17:29y lo que se hace esperar en cada
17:31posición por ejemplo el antígeno y
17:33después se enfrenta con un anticuerpo
17:35marcado que permite detectar si ese
17:37antígeno si está presente el antígeno
17:42hay distintos formatos está elisa
17:45directo el índice indirecto y elisa
17:48sándwich
17:50si nosotros lo que queremos detectar por
17:53ejemplo es un anticuerpo contra un
17:55antígeno como le mostraba hoy por
17:58ejemplo el hb el anticuerpo anti hbs de
18:01hepatitis b
18:03o por ejemplo para hacerlo más actual
18:05por ejemplo queremos detectar y fije
18:07anti coronavirus
18:10podríamos poner el anticuerpo del
18:13antígeno de coronavirus pegarlo en el
18:15fondo de la placa y en cuba lo con el
18:19anticuerpo del paciente
18:22lo incubamos el tiempo necesario para
18:25que se une al anticuerpo con el antígeno
18:27y luego para saber si ese anticuerpo se
18:31unirá al antígeno necesitamos
18:33reconocerlo con un anticuerpo marcado
18:36con una enzima entonces fíjense esta es
18:40explicar la enzima y
18:42esa enzima lo que hace es cambiar
18:45[Música]
18:49está cerrado
18:58mientras que sí
19:04disculpen
19:07bien entonces ustedes ponen
19:11el antígeno el anticuerpo con el anti un
19:16anticuerpo marcado que permite ser
19:18detectado a través de por ejemplo el
19:21cambio del color de un sustrato
19:23finalmente otro otro tipo de ensayo es
19:27un ensayo de galicia que permite
19:28detectar
19:30antígenos por ejemplo como veíamos hoy
19:32si queremos detectar el antígeno de
19:34hepatitis b
19:36lo que se hace es poner un anticuerpo en
19:39el fondo del pocillo
19:41incubarlo con el suero del paciente que
19:44tiene el antígeno entonces el antígeno
19:47se va a unir al anticuerpo y después
19:49vamos a utilizar un anticuerpo que
19:51reconozca ese antígeno
19:54y después vamos a revelar la reacción
19:58poniendo otro anticuerpo que tenga a su
20:00vez una marca que permita dar un color
20:03por ejemplo para detectar el antígeno
20:08bien ahora cuando ustedes hagan los
20:10explique los problemas vamos a
20:12entenderlo mejor y ni hablar cuando lo
20:15practiquen en su casa
20:18obviamente tenemos que saber cómo
20:20interpretar el resultado hay distintas
20:22formas de interpretarlo
20:25una forma es
20:28y saber si el resultado es positivo o
20:30negativo simplemente
20:33cuando ustedes
20:37revelan digamos cuando pone en el
20:40sustrato en el pocillo y vencida color
20:43no da color la forma de saber si es
20:45positivo o negativo es evaluar muchos
20:48suelos positivos y muchos otros
20:50negativos y buscar una un valor de
20:54absorban cya que nos permita diferenciar
20:56todos los negativos de todos los
20:58positivos ese valor se llama línea de
21:00corte
21:01entonces establecimos una línea de corte
21:04y luego de hacer la muestra incógnita
21:07vemos si nos cae dentro de los negativos
21:08o si nos cae dentro de los positivos
21:13otra forma de expresar los resultados es
21:17el título
21:19lo que se hace para informar título es
21:22acá diluir las muestras de suero por
21:25ejemplo tenemos tres suelos de tres
21:27pacientes las diluimos puede ser de
21:30ilusiones al medio cuarto al octavo y
21:32así sucesivamente y nos fijamos le
21:35hacemos la determinación del ensayo de
21:37inmuno diagnóstico y nos fijamos hasta
21:40que de ilusión tenemos positividad si
21:42por ejemplo en este suelo la positividad
21:46de la elipse es hasta la dilución 1 en
21:4816 decimos que el título es 1 en 16
21:51luego es negativo por ejemplo en este
21:53otro suero si es hasta 1 en 128 decimos
21:58que el suero es tiene un título 1 en 128
22:03y bueno en este tercer suelo por ejemplo
22:05el título también
22:08es una 16
22:11puede ser que más menos quiere decir que
22:14es justo en esa línea de corte por lo
22:18que podemos tomar
22:19este valor como positivo o negativo
22:22según el criterio que establezcamos
22:26el tercero
22:29el tercer dato que nos puede dar
22:32la técnica inmunoquímica es directamente
22:34la concentración
22:37para poder calcular la concentración lo
22:39que se hace es utilizar un patrón de
22:40concentración conocida y hacerle una
22:44hacerle hacer una curva de concentración
22:47ver su densidad auspicia entonces
22:49hacemos ilusiones seriadas del patrón y
22:55grafica mos una curva de concentración
22:57en función de la observancia luego
22:59haciendo la determinación de la
23:02incógnita de la muestra del paciente
23:03incógnita ingresamos con la densidad
23:06óptica que nos da la muestra incógnita y
23:08podemos calcular la concentración que
23:11tiene
23:12de lo que estamos buscando el análisis
23:15ensayado
23:17en
23:18nuestro del paciente en este caso por
23:21ejemplo usted debe
23:23si teníamos esta curva y los valores de
23:26concentración eran estos y la el suelo
23:29la absorba hacia el paciente por ejemplo
23:32acá dio 13
23:33entonces entrando en 1,3
23:36vemos que la concentración no obtenía es
23:38de 0,14 miligramos por mililitro
23:42supongamos que esto una hormona y bueno
23:45eso sería la concentración de la hormona
23:50profesión de una prenda sí
23:54ahí por ejemplo cuando se refiere a la
23:56absorban cya sería por ejemplo si es un
23:58inmunoensayo que utiliza la enzima por
24:01ejemplo cuando al color que fuerte es el
24:05color que genera exacto exacto acá le va
24:08a dar
24:10como se ve aquí ven es tratarla quitar
24:14acierto de usted ve este azul es el
24:17color que general el sustrato que
24:19utilizamos de un color azul cuando la
24:21enzima actúa sobre el sustrato acá le da
24:23un color azul si la enzima no es el
24:27anticuerpo no se pegó porque no se
24:30pegará anticuerpo del paciente entonces
24:33no hay color porque el sustrato no
24:35cambia de color y that blanco
24:39de acuerdo entonces en función si hay
24:41poquito anticuerpo de a poquito color
24:43azul si hay mucho anticuerpos da mucho
24:45color azul
24:48y es absorbida pasa como se mide para
24:52ponerle un número para poder hacer la
24:53gráfica y bueno esto se pone como le ha
24:56demostrado a estos listos les había
24:59traído no sé como mencioné estos pocitos
25:02se llenan con una micro pipeta que
25:04también yo siempre le llegó para
25:05mostrarle pero bueno este hay una pipeta
25:07que es especial para cargar pequeños
25:10volúmenes que tiene esta foto
25:15para para poder medir el valor de
25:19absorban cja se usan lo que se llamó
25:21selector de niza que acá se los mostré
25:23en este caso se diría esto ustedes ponen
25:27la placa en el lector y esto le indica
25:29el valor de absorban cya cuanto más
25:32color más absorban cya menos color menos
25:34absorban cya entonces con eso hacen ven
25:37que acá por ejemplo tienen entrada estos
25:40valores de absorban cya que van entre 0
25:42y 1 entonces si hay poquita absorban cya
25:45y no se ve color los valores rondan por
25:48lo entre 0 y 0 25 si hay muchas orgáncia
25:51rondan entre 0 25 y 1 en este caso y con
25:55esto
25:57hacer una curva con un patrón y se puede
26:01perfectamente entrar en la curva con la
26:04absorban cya en comida
26:06muchas gracias ayuda a explicar mejor
26:12bien veamos ahora el caso de la
26:14inmunofluorescencia la
26:15inmunofluorescencia es muy similar al
26:17elisa nada más que puede utilizar una
26:20placa el plástico se usa un portaobjetos
26:23en donde se pega el antígeno
26:27por ejemplo
26:30ustedes pueden pegar un parásito y
26:33detectar anticuerpos contra el parásito
26:35por ejemplo se usa mucho
26:37plasma sistir para nosotros y se usa
26:39mucho lo que se hace es pegar el
26:41parásito entero en un portaobjetos se
26:44incuba luego con el suelo del paciente y
26:49después se utilizan anticuerpos marcados
26:51con un cloro foro que reconocen al suelo
26:53del paciente para ver si se ve igual el
26:56suero del paciente entonces si el
26:57paciente no está infectado y no tiene
26:59anticuerpos
27:00estos anticuerpos con el cloro foro no
27:03se pegan al anticuerpo humano y no hay y
27:06no hay fluorescencia si están
27:09anticuerpos se pegan iain fluorescencia
27:11esto se ve a un microscopio de
27:12fluorescencia
27:14se pone en un microscopio que se después
27:17los problemas que les muestra se ponen
27:21presencias se observan los parásitos con
27:24un microscopio especial que tiene una
27:26luz que florece entonces si los
27:30parásitos se ven verdes fluorescentes
27:32este es el resultado es positivo si no
27:36se ven los parásitos directamente porque
27:38no hay anticuerpo fluorescente el
27:40resultado es negativo lo que se hace
27:42aquí comúnmente es ilusiones del suero
27:45del paciente también se ponen
27:48se evalúa el anticuerpo en varias de
27:50ilusiones y se informa la última
27:52dilución en donde el suelo del paciente
27:54da positivo eso se llama el título como
27:57ya les mostré arriba para elisa aquí
28:00también se determina el título de la
28:02misma manera
28:0990
28:25vuelvan
28:27e
28:30pasemos ahora entonces a analizar lo que
28:32son las reacciones
28:36las reacciones secundarias como les
28:40decía una reacción secundaria es entre
28:43un pepito un antígeno que tiene un
28:45ámbito que es muy representado porque
28:47tiene que tener un mismo epítome más de
28:49una vez y un anticuerpo también que es
28:52esta
28:53que ponía lentes ya que puede reconocer
28:57más de una edición a la vez
29:01ejemplos de este tipo de reacciones son
29:04la iluminación directa y la
29:05democratización entonces pasemos a ver
29:08el ejemplo más típico de aglutinación
29:10directa es la determinación de grupo
29:12sanguíneo
29:15y ustedes saben el grupo sanguíneo
29:17procedente te quería preguntar hay
29:20alguna técnica que sea más específica
29:22para un microorganismo determinado o
29:25como nos damos cuenta de eso bueno
29:28después de al final ahora les voy a
29:30comentar de la sensibilidad que hay
29:34y en general las técnicas más
29:36específicas justamente consiste en que
29:38susan antígenos más específicos
29:41como los antígenos más específicos por
29:44ahí están en menor concentración y hay
29:48que usar las técnicas que son más
29:49sensibles como por ejemplo elisa o radio
29:52inmunoensayos que son más sensibles
29:54específicas que las técnicas de
29:56aglutinación por ejemplo
30:01bien entonces veamos las técnicas y
30:05las reacciones secundarias
30:09un ejemplo es la rutina acción directa
30:11que lo traemos aglutinación la directa
30:13el ejemplo más típico es
30:16la
30:17determinación del grupo sanguíneo
30:19ustedes saben de él en
30:22los eritrocitos de distintas personas
30:26pueden tener distintos antígenos pueden
30:28tener el antígeno ba del antígeno ve el
30:30antígeno ave o ninguno de los antígenos
30:33entonces cómo se hace para saber si es
30:36cuál es el antígeno que tiene esas
30:38personas pues no se usan anticuerpos que
30:42generan hoy día son anticuerpos
30:44monoclonales antes se usaban anticuerpos
30:46porque obtenido distintos pacientes pero
30:49ellos son monoclonales que son muy
30:52comúnmente usados entonces lo que se
30:54hace es enfrentar los glóbulos rojos con
30:58los distintos anticuerpos anti anti vean
31:01tía
31:03y ver si reaccionan si reaccionan con
31:06anti b
31:12el grupo sanguíneo sabe si reacciona con
31:14la entidad si reacciona con los dos que
31:17sabes si no reaccionar con ninguno es
31:19cero entonces es como es el resultado
31:22esto se hace habitualmente en una en un
31:26corto objeto ustedes ponen una gotita de
31:29sangre y ponen el anticuerpo monoclonal
31:31[Música]
31:33a por ejemplo
31:34por ejemplo en este caso que se aglutinó
31:39aglutina la reacción en la sangre
31:42aglutinó con la entidad que quiere decir
31:45que el paciente es a ishií latino
31:48convento se es a obviamente
31:53este
31:55y si se aglutinó con en este caso
31:59el paciente ave también va a dar
32:02positivo
32:03no sé si lo visualizan
32:06esta es justamente es una reacción
32:07secundaria porque puede ser visualizada
32:10a simple vista porque como precipita
32:12aglutinarlas los glóbulos rojos entonces
32:16es sencillamente se puede ver
32:23bien y la última
32:27la otra reacción que vamos a mencionar
32:29ahora es la aglutinación indirecta
32:33e
32:35en este caso lo que se hace es por
32:38ejemplo a utilizar también glóbulos
32:40rojos aprovechar que el glóbulo rojo es
32:42una partícula muy chiquitita que se la
32:45usa básicamente se la usa como partícula
32:48simplemente para pegarles antígenos de
32:50interés por ejemplo esta reacción se
32:53sigue usando mucho todavía hoy día para
32:55la determinación de chagas entonces lo
32:57que se hace es
33:00pegar a la partícula al glóbulo rojo se
33:04le pega
33:06moléculas del trypanosoma cruzi y
33:09entonces después eso se enfrenta con las
33:12muestras de suelos de los pacientes y
33:14eso forma una red también que puede ser
33:16visualizada a simple vista y para
33:18visualizarla lo que se hace
33:20habitualmente es ponerla en una placa de
33:24plástico en este caso que tiene fondo en
33:28un ósea y en un fondo tipo en donde vas
33:31a alimentar los glóbulos rojos si los
33:34glóbulos rojos
33:36formaron esta red se alimentan todos en
33:39el fondo todos juntos si no hay
33:41interacción porque no se forma la red se
33:43van todos al fondo y forma lo que se
33:45llama un botón entonces en base a eso si
33:49se formó la red es porque había
33:51anticuerpo dispositivo si no se formó la
33:53red y forma un botón es negativa lo que
33:56se hace para
33:59para informar este resultado de esas
34:01ilusiones del suelo del paciente será
34:03sin divisiones al medio del cuarto al
34:06octavo 16 32 y después se le aplica la
34:10partícula del glóbulo rojo con el
34:13antígeno entonces uno lo que hace es ver
34:17hasta donde la dilución de suero da
34:19positivo en este primer caso por ejemplo
34:22el suero del paciente dio positivo hasta
34:251 de 64 luego empezó a dar negativo eso
34:28quiere decir que el título de este suero
34:30era una 64 en el segundo caso la
34:35dilución del suelo dio positivo está una
34:36noche después de a negativos entonces el
34:38título es un 8 y en el tercer caso dio
34:42positivo hasta 1 en 502 entonces el
34:44título es 1 en 512
34:49bueno en relación por lo que me
34:52preguntaban hoy
34:54estas técnicas tienen distintos
34:57distintas sensibilidades
34:59se considera que el radio en un ensayo
35:01que usa radioactividad es el más
35:03sensible de todos
35:05luego viene la quimioluminiscencia
35:07luego de liza y luego de indignación o
35:10sea estas tres primeras son como les
35:13comentaba hoy las técnicas
35:15de presión primaria y aglutinación es
35:19una reacción secundaria entonces
35:22las técnicas de reacción primaria suelen
35:25ser más sensibles que las de
35:28las de reacción secundaria y eso es
35:32porque la causa vamos marcadores que nos
35:34permiten aumentar muchísimo la señal en
35:37cambio la aglutinación todo depende de
35:39que haya en mi cuerpo que esté anti
35:40valente interacción entre ellos
35:45pasamos entonces ahora a los problemas
35:49estos son los problemas que les digo que
35:51normalmente les dábamos para que
35:53resuelvan este y que este año
35:56lamentablemente tenemos que comentar los
35:59no más pero yo se nos comentó a ustedes
36:01puede repasarlo y con eso vengan después
36:04a rendir él es la evaluación
36:08peleo el problema basándose en los
36:12esquemas que ilustran a los distintos
36:14tipos de ensayo de elisa proponer un
36:17esquema de ensayo de lista para
36:18determinar anticuerpos anti g20 del
36:20virus de hb en sueros humanos indicar el
36:24esquema el nombre del antígeno la
36:26especificidad del anticuerpo conjugado
36:28si el anticuerpo que se quiere
36:29determinar
36:30se mide en sidra óptica con un lector de
36:33elisa indicar cómo se interpreta el
36:35resultado entonces ustedes acá ven que
36:37es un ejercicio muy sencillo pero es
36:39para que ustedes razón en un poco cuál
36:42es el antígeno que se usa cuál es el
36:44anticuerpo que se detecta que
36:46especificidad tiene y cómo se interpreta
36:48el resultado
36:50en este caso
36:52en plantea de determinar anticuerpo en
36:55el suelo del paciente es entonces si
36:57vamos a determinar anticuerpos que
36:59tenemos que utilizar el ensayo en
37:02directo en donde el anticuerpo del suelo
37:05del paciente se va a pegar al antígeno
37:06estrés seriales que va a utilizar
37:10y entonces cómo se como son las partes
37:14del ensayo vamos a tener
37:17el antígeno que vamos a pegar a la placa
37:20de plástico el antígeno gp120 lo
37:24planteaba en el enunciado del problema
37:26el gp siento este de el archivo
37:30el anticuerpo que se detecta tiene una
37:32especificidad anti gp120 y está en el
37:36suelo del paciente y luego tenemos un
37:39anticuerpo anti hehe humana que está
37:42marcada con una enzima
37:46y entonces tenemos tres componentes del
37:49antígeno
37:51el anticuerpo que detectamos y el
37:53anticuerpo anti anticuerpo humano está
37:55este cuerpo normalmente puede ser un
37:57mono clara lo puede ser un anticuerpo
37:58hecho en otro animal que detecta el
38:01anticuerpo humano por ejemplo puede ser
38:02hecho en conejo
38:04inyectando anticuerpos de humanos en un
38:07conejo se pueden obtener anticuerpos
38:08anti humanos dichos en conejos
38:11e
38:13con este esquema vamos a hacer
38:17la determinación de los anticuerpos
38:20incógnitas
38:22nos va a dar esto como les comentaba ven
38:24estos pasillos que no tienen color
38:26probablemente no van a tener anticuerpos
38:29específicos los que tienen color si más
38:31color tiene más anticuerpo tiene
38:33vigencia acaba
38:34común degrade que así queda más éstos
38:39tienen más anticuerpo que es esto lo
38:41vamos a pasar a leer un lector de elisa
38:44que nos va a dar valores de absorban
38:46cian estas absorban cias las vamos así
38:49las gráficas por ejemplo es cada puntito
38:52de esto es es uno de estos pocillos
38:54entonces si las hojas filas gráfica
38:58vamos vemos que tenemos valores de bach
38:59absorban cya de hasta absorban cya y los
39:02negativos son todos valores de muy baja
39:04absorban cja puede ocurrir que algunos
39:07valores sean bajos y en general los kim
39:09comerciales establecen un lo que se
39:11llama una zona gris que es una zona que
39:13es la indeterminación si las
39:16determinaciones caen dentro de esta zona
39:18gris
39:20es aconsejable repetir la reacción o
39:23hacer otro tipo de ensayo que nos
39:24permita definir el estatus de esos
39:26suelos
39:29es una pregunta
39:31si todos esos puntos azules digamos son
39:34del mismo paciente no no
39:37son distintos pacientes como les decía
39:40la placa de elisa tiene 96 pocillos
39:43fíjense tiene 8 x 12 96 en cada positivo
39:47de esto ustedes ponen un suero de un
39:48paciente distinto
39:50y aquí también y obviamente tienen ponen
39:53un control positivo en control negativo
39:55de siempre es necesario ponerlo en estos
39:57ensayos
39:57o varios controles positivos varios
40:00controles negativos pero cada punto cada
40:03apósito es un suero diferente y después
40:08hay en la gráfica como sabes que el
40:10triangulito es que puntito
40:12no porque esto es un gráfico de una
40:16gráfica acá pero el lector desliza te da
40:18la coordenada dice
40:21este es el 1 este lado está en la 3 así
40:26y te va a decir la coordenada de ese mal
40:29ds
40:31de la placa y aquí el valor corresponde
40:36gracias
40:37veamos ahora en el ejemplo de lisa
40:40sandwich
40:42televisa sándwich bueno de lejía del
40:45problema basándose en los esquemas que
40:48ilustran los distintos tipos de ensayo
40:49de elisa proponer un esquema cuya clase
40:52me corta
40:54disculpen un esquema de ensayo de lisa
40:57para determinar antígenos hbs del virus
41:00de la hepatitis b en sueros humanos
41:02indicar en el esquema el nombre del
41:04antígeno la específica del anticuerpo
41:06conjugado y el anticuerpo que se quiere
41:08determinar semi densidad óptica con un
41:11lector de iris e indicar cómo se
41:12interpreta el resultado bueno aquí como
41:15lo que queremos detectar es anticuerpo
41:18de sant y gen o anticuerpo
41:22necesitamos capturarlos del suelo
41:24entonces vamos a usar lo que se llama el
41:27elisa sandwich elisa de captura aquí
41:29utilizamos un anticuerpo
41:31que tiene especificidad hacia la actitud
41:33un antígeno hbs
41:37existe la resolución utilizamos el
41:40anticuerpo con especificidad hacia el
41:41antígeno
41:44que está presente en el suelo del
41:46paciente y luego para ver si si el
41:50anticuerpo pegados capturadas dije nos
41:52necesitamos revelarlo y para ello
41:54utilizamos un sistema de dos anticuerpos
41:56un anticuerpo por ejemplo del conejo
41:59contra el antígeno y luego un anticuerpo
42:03marcado con la enzima que reconozca el
42:05anticuerpo de conejo eso sería el
42:09posible es que va a desarrollar aquí
42:12también vamos a obtener
42:15vamos vamos a
42:17a poner suero de distintos pacientes en
42:20la placa de elisa y vamos a obtener
42:22distintas señales en función de la
42:24concentración de antígeno que haya en
42:26cada muestra luego vamos a leerlos y
42:29volvemos también a tener este tipo de
42:32gráfico
42:34la interpretación es exactamente igual
42:39vamos al tercer ejemplo que escribe
42:42luminiscencia que es exactamente igual
42:44que el isa nada más que en vez de ser
42:47revelado con una enzima es revelado con
42:50unas sustancias que produce luz por eso
42:53se llama y ministra es decir porque si
42:57el anticuerpo con la marca de
42:59luminiscencia se pegó va a emitir luz y
43:02se va a poder testar a través de la
43:03emisión de luz aquí se usan para medir
43:08la luminiscencia producida también se
43:10usa un equipo que es muy parecido al
43:11este queremos trabajo
43:14nada más que en vez de decir a óptica me
43:19de luminiscencia
43:21lo leo pero radio a éste no se lo voy a
43:23explicar porque es igual a los
43:25anteriores
43:25basándose en los esquemas que ilustran
43:27los distintos tipos de elisa proponer un
43:29esquema de ensayo de quimioluminiscencia
43:31para determinar unidades internacionales
43:33de anticuerpos contra el virus de la
43:35rubéola
43:36indicará el esquema el nombre del
43:38antígeno la especificidad el anticuerpo
43:41conjugado de las tics or box que se
43:43quiere determinar se me describen
43:45licencias con lector indicar cómo se
43:48interpreta el resultado y cómo se
43:49calculan las unidades internacionales
43:51del anticuerpo anti rubio
43:54en este caso
43:55[Música]
43:57como les decía
44:00la resolución es la misma que aquí
44:05y aquí
44:08donde ponemos el antígeno de rubéola
44:12determinado en el anticuerpo del
44:13paciente y lo revelamos con un
44:15anticuerpo marcado pero en vez de decir
44:17una enzima es un compuesto que lo que
44:20genera luz y después el entonces en un
44:23aparato que permite ver leer la luz
44:26entonces usted
44:29resuelvan yo para no alargar la clase no
44:32lo resolví porque es muy parecido a lo
44:34que es elisa
44:36hemos alucinación indirecta
44:38veamos un ejemplo martín acción
44:41indirecta proponer un esquema de ensayo
44:43de más rutina acción indirecta para
44:44determinar antígenos trypanosoma cruzi
44:46en seres humanos e indicar en el esquema
44:48el nombre del antígeno a la
44:49especificidad de anticuerpos que se
44:51quiere determinar indicar cómo se le
44:52resultado y cómo se interpreta bien aquí
44:55como ya le expliqué hoy se utiliza el
44:58anticuerpo del paciente que se enfrenta
45:01al glóbulo rojo que tiene las partículas
45:03que tienen las moléculas de trypanosoma
45:06cruzi pegadas
45:09entonces ahí se produce una reacción
45:11secundaria porque los anticuerpos
45:13reconocen a más de un
45:16glóbulo rojo con antígeno y los
45:19aglutinan y eso se lee en una placa del
45:22que tiene una placa de plástico con
45:24fondren o en donde si hay una reacción
45:28secundaria se alimenta todo en el fondo
45:30y se ve todo rojo si no hay rastros de
45:32estrés con gadea se forma se va todo al
45:34fondo y forma un botoncito entonces como
45:37les explicaba hoy si forman el manto
45:39rojo hasta 1 en 32 la el título de un 32
45:44si forma estable en 41 en 4 si formaste
45:48164 con 164
45:50esto ya se lo explique hoy es muy
45:53sencillo
45:56bien y la inmunofluorescencia
45:59no faltando que este y otro más en
46:02nuestro blog no más la
46:03inmunofluorescencia
46:05él dice así basándose en los esquemas de
46:09industrialización una presencia
46:11indirecta proponer un esquema de ensayo
46:14inmunofluorescencia indirecta para
46:15determinar toxoplasmosis ser humano
46:17indicar en el esquema el nombre del
46:19antígeno a la especie del anticuerpo y
46:22como se le ha resultado bien
46:26el esquema sería este como la que hoy
46:28por ejemplo aquí es un
46:31parásito de toxoplasma gondii que hay
46:34que formular los para que se mantenga en
46:36el tiempo
46:37este parásito tiene antígenos propios
46:41pegados y uno lo incuba con el
46:44anticuerpo del paciente luego para
46:46evaluar si se si el paciente tenía
46:48anticuerpos que se pegaron si lo incuba
46:51con un segundo anticuerpo que es un
46:52anticuerpo anti hehe humana marcado con
46:56un cloro foro que puede ser el florece
47:00línea por ejemplo
47:03sí sí sí
47:06sí el suelo tenía anticuerpos
47:10y los parásitos van a emitir
47:12fluorescencia y van a poder verse al
47:14microscopio de fluorescencia de esta
47:16forma usted lo van a ver todos verdes y
47:19si no había anticuerpos los parásitos no
47:21van a emitir fluorescencia y se van a
47:23ver no se va a ver color directamente
47:27aquí como es la interpretación aquí como
47:30les comentaba hoy también se hacen
47:31direcciones del suelo y se evalúa hasta
47:34qué dilución
47:35existe del suelo del paciente o se
47:38obtiene fluorescencia entonces se
47:40informa el título diciendo bueno hasta 1
47:43en 16 por ejemplo hay fluorescencia por
47:45debajo de 1 entre por encima de un 16 ya
47:48no hay flores en ciertos el título es 1
47:49en 16 si la fluorescencia llega hasta el
47:52título por ejemplo en el 64 el título es
47:55uno de 64
47:57bueno el último ejemplo es el de western
48:00blot
48:01[Música]
48:02que se los mencionamos porque bueno
48:04básicamente es muy conocido por ser la
48:07técnica de referencia para
48:10confirmar la difusión por hb
48:14entonces dice proponer un esquema de
48:16ensayo de western blot para confirmar a
48:18chivas en sus manos indicar en el
48:20esquema el nombre del antígeno a la
48:21especificidad del anticuerpo que se
48:23quiere determinar e indicar cómo se le
48:25resultado y cómo se interpreta
48:26bueno el western blog consiste en esto
48:29ustedes
48:32por ejemplo toman el virus de la hb y lo
48:36dijeras de tal forma de que las
48:38proteínas
48:39que en todos por separadas se hacen se
48:41rompe el archivo del virus para que
48:44todas las proteínas sueltas eso se
48:46siembra en un gel que tiene un tamaño de
48:49poro que permite que las proteínas
48:52migren en función de su tamaño sea
48:54cuanto más grande son menos migran
48:56cuanto más chiquitas son más migran para
48:58que logren migrar lo que se hace es
49:01ponerle una corriente eléctrica
49:04de tal forma que
49:07las partículas sean empujadas por la
49:11corriente eléctrica se pone un polo
49:13negativo polo positivo entonces la carga
49:16del
49:17paso de la corriente va empujando a la
49:19partícula cuanto más grandes son más
49:21atrás a cuanto más chiquitas menos se
49:23atrasan entonces se les separan
49:27las moléculas del virus en función de su
49:30tamaño luego exigen lo lo
49:34enfrentan a una membrana
49:37de tal forma una membrana que se llama
49:39de nitrocelulosa de tal forma que las
49:42las moléculas migran hacia la membrana
49:45entonces les queda de esas banditas de
49:48proteínas que tenía el virus les quedan
49:50en la membrana y esa membrana lo que
49:52tiene el característico es que permite
49:55hacer un ensayo de tipo elisa
49:58entonces uno la enfrenta con el suelo
50:00del paciente y si hay anticuerpos contra
50:03distintas bandita se pegan y después dos
50:06se unen los revelan con un anticuerpo
50:09anti anticuerpo humano
50:13unido a una enzima que permite dar color
50:16entonces ahí sí había anticuerpos contra
50:20cualquiera de las banditas del virus le
50:23va a dar una bandita de color
50:27entonces el aspecto que tendría
50:30un western blog de distintos pacientes
50:33con distintos casos clínicos
50:37aquí por ejemplo este suelo reaccionó
50:41contra todos los todas las proteínas del
50:44virus vigencia y kaká a la izquierda
50:46ustedes tienen las proteínas del virus
50:48que emigran
50:49cuando uno hace esa corrida
50:52electroforética y este western blot
50:54ustedes logran
50:56separar todas estas proteínas este
50:59paciente tiene anticuerpos contra todas
51:01las proteínas de un suelo fuerte se
51:05llama
51:06si va a reaccionar contra varias
51:08proteínas sueros fuertes y reacciona
51:10contra poquitas proteínas un suero débil
51:11ahora como la confirmación de hb se basa
51:15en que haya reacción contra dos
51:17proteínas básicamente
51:19las 24 y las gp120 son las dos proteínas
51:23que tienen que presionar para confirmar
51:25la positividad del suelo si no hay
51:27reacción contra ninguna de las
51:31de la proteína quiere decir que el suelo
51:35es negativo y este con esto terminamos
51:38esta es la última
51:40la última diapositiva yo no sé si
51:43ustedes tienen alguna pregunta si
51:45tuvieron oportunidades de estudiar con
51:49la guía de preguntas
51:51lo importante de la guía de pregunta es
51:53que las mismas preguntas que están en la
51:55guía son las que les vamos a hacer en el
51:57múltiple yo sé si ustedes
51:59logran resolver las preguntas que les
52:01dimos los múltiples choice tratan sobre
52:04las mismas preguntas así que van a poder
52:07resolverlo con mucha facilidad
52:12y bueno no sé si tienen alguna pregunta
52:14[Música]
52:16sobre ofrece tengo una duda
52:19por ejemplo la de las placas de elisa
52:23que tienen el anticuerpo o el antígeno
52:26ya ha pegado digamos eso se compran
52:29placas específicas con anticuerpos o
52:31antígenos específicos o eso es trabajo
52:34del laboratorio digamos
52:38para la clínica ya viene todo resuelto
52:41de estas placas ya vienen con el
52:43anticuerpo pegado por ejemplo si vos
52:44querías detectar la archivera
52:46anticuerpos anti anti 720 ya te viene el
52:50antígeno pegado a la placa simplemente
52:53lo que tenéis que hacer es comprar la
52:55placa con el antígeno y hacer alguna
52:58reacción con el suelo del paciente ahora
53:01simplemente
53:03digamos estas clases para que ustedes
53:05entiendan el fundamento y que repasan
53:07justamente el concepto de interacción
53:09antígeno anticuerpo
53:14pero si yo tengo una duda que tiene que
53:17ver con lo que usted está demostrar de
53:18las tiras de los cánticos contra el h y
53:20ver que mostraré que sea positivas de a
53:23dos de las proteínas voy a le podías
53:25decir al agente que está acompañado
53:27positivo para para el virus cuando la
53:30persona realiza el tratamiento que te
53:32dicen que puedes llegar a darse el caso
53:33de que deje de dar aunque deje de
53:37aparecer el virus comunista sin activado
53:40la tira sale como si fuera una persona
53:43negativa o tiene menos reacción a
53:45proteínas porque hay como menor cantidad
53:47vírica como en este caso el seguimiento
53:51del seguimiento de tratamiento se hace
53:54allá por otra técnica que es detectar
53:56viremia cortese era no es cierto porque
54:00una vez que tenía anticuerpos probables
54:02que esos anticuerpos pero están por
54:03mucho tiempo que se haya negativa
54:13los anticuerpos persisten y bueno en
54:16general el paciente de hb no se curan sí
54:18que también
54:19la bola o así es que por eso no entendía
54:21cómo se vería es operar a que usted me
54:24quita que es únicamente diagnóstico para
54:26decir si esos positivos negativos
54:29tienen mucho más sentido que si el
54:31seguimiento de tratamiento se hace con
54:3413 recibe se mide carga viral por pcr y
54:39por debajo de cierto valor se considera
54:41que ya no es un tratamiento efectivo
54:43pero como ustedes saben el tratamiento
54:45hasta ahora no no no cura no eliminar al
54:49virus
54:50o sea si no hay corte al tratamiento el
54:52virus vuelve a aparecer
54:59bien había alguna otra pregunta
55:07bueno si no hay más preguntas entonces
55:08cortamos acá ya lo que ya se están
55:10retirando
55:12este
55:17bueno entonces
55:19cualquier consulta que tengan me pueden
55:23escribir
55:25y
55:26les recomiendo que trabajen con la guía
55:29de preguntas si ustedes entienden todas
55:31las preguntas y también usando el
55:34powerpoint para responder a las dudas
55:36que le queden van a poder rendir la
55:40evaluación con mucha facilidad son muy
55:42fáciles
55:44pero si lean lean el capítulo 5 del abad
55:47donde se explica la función de los
55:49anticuerpos la estructura y función y
55:51lean también el capítulo del regueiro en
55:54donde se explican las técnicas
55:55inmunoquímica
55:57bueno
56:04[Música]

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