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07 Procesamiento del RNA en Eucariontes — Transcript

by MillerBecker · 10,343 words · 1,686 segments · language en · Watch on YouTube

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0:01Entonces estamos grabando
0:04eh nos quedamos en el último
0:09paso que corresponde al procesamiento
0:11del rna en eucar todo lo que vamos a ver
0:14aquí vamos a hablar se trata de
0:18rna Okay
0:20rna y el procesamiento del rna uscente
0:24Ya lo habíamos adelantado un poquito a
0:28ver voy a sacar mi Super puntero Láser
0:32lo habíamos adelantado un poco esto y
0:35dijimos que en el 5 prima cierto se
0:40sufre El caping laa mensajero
0:42especialmente que es la adición de la
0:45estructura cap a la primera base del
0:48transcripto llamado HN rna o rna nuclear
0:53heterogéneo Por qué se llama heterogéneo
0:55Porque da origen a numerosos tipos de
0:57rna largos cortos No es cierto para
0:59diferentes proteínas eh después tenemos
1:03en el tres prima la poliadenilación que
1:05es la visión de una cola poad al tres
1:08prima ya nos pasamos al otro lado del
1:12mensajero y
1:14eh los dos procesos finales son el sping
1:18que en español podríamos decir que se LL
1:21se llamaría si se puede traducir corte y
1:24Empalme de los que significa fondo poder
1:30transformar el r madurarlo sacando lo
1:33que son las secuencias intrón que vimos
1:35antes y uniendo las secuencias
1:38exas ya y finalmente está el editing que
1:42vamos a hablar un poquito de él es un
1:44tema que está recién en
1:48estudio Entonces nos ubicamos nuevamente
1:51aquí tenemos el transcripto primario que
1:53lo vimos Cómo se
1:56transcribía se acuerdan Cómo se
1:58sintetizaba desde el 5 prima ut Hasta el
2:023 prima ut ya cada uno de ellos
2:05corresponde al exón un hasta el exón en
2:08este caso del ejemplo son cco ya después
2:11viene el capin en el 5 prima
2:13poliadenilación en el TR prima splicing
2:17ya que es la maduración más
2:20importante y antes de esto Tal vez
2:24podemos tener las etapas de editing o
2:26edición este rna maduro está portado a
2:31través del poro nuclear donde al
2:33citoplasma donde comienza la traducción
2:35y ahí también se sufre este fenómeno
2:39digamos de procesamiento final del rna O
2:44sea no se las lleva así solita el rna es
2:48muy bien vigilado y existe Todo un
2:52sistema en pleno estudio que está
2:55diseñado para ver que El mensajero no
2:58tenga defectos
3:00entonces vimos nos quedamos nos quedamos
3:03ayer en esta en esta metilación de eston
3:06No es cierto este que era el mecanismo
3:11por el cual las histonas son removidas
3:15ya y permite que la rna polimerasa
3:18atraviese No es cierto este
3:21Gen disociando y asociando disociando y
3:25asociando los nucleosomas que sea
3:28necesario a través del Gen ya entonces
3:32la iniciación eh de la rna polimerasa
3:35que se nota aquí la cola del carboxilo
3:38Terminal hiperfosforilada ve se fijan
3:42acá fósforo fósforo fósforo Ya esta esta
3:46Cola y la ran polimerasa en sí misma va
3:49reclutando numerosos factores Eh Al
3:53principio no es cierto recluta los
3:55factores de caping después los de
3:57spacing y después los de B ación casi
4:00todos los reclutan la rna polimerasa por
4:03eso se llaman procesos c
4:06transcripcionales están ocurriendo casi
4:09inmediatamente o poquito después de la
4:12transcripción por eso la transcripción
4:14es t importante Ahora yo los podría
4:17llenar de casos clínicos de defecto de
4:20transcripción pero ahora ya saben dónde
4:23Ah Dónde están las particularidades que
4:27pueden diferenciar la enfermedad de la
4:30salud o la salud de la enfermedad lo
4:33mismo vamos a ver en splicing y sus
4:35asociaciones a diferentes enfermedades
4:38como el cáncer por ejemplo ya entonces
4:41la rna polimerasa dos tiene numerosos
4:45factores asociados en complejos es
4:48verdadera plataforma para complejos
4:51proteicos ya sabemos que es lo que es la
4:54eu eucromatina
4:56activa O sea que
4:58es opcionalmente competente se puede
5:02expresar y que tiene que estar metilada
5:05eh Tri metilada No es cierto la licina 4
5:09Tri metilada en la licina 36 y Tri
5:13metilada en la licina
5:1579 ya Y también sabemos que la cromatina
5:20reprimida está metilada en la licina 27
5:25la 20 y la k9 ya y estas metilacion son
5:31normalmente producto de dos metilasas
5:34las metilasas Z1 y Z2 que promueven una
5:38memoria
5:40transcripcional es decir en algunas
5:42personas que
5:43recibieron esta impronta genética No es
5:46cierto hablemos de epigenética esta
5:49impronta genética No es cierto Bueno hay
5:52genes que no se expresan muy bien y os
5:54se expresan mejor
5:56etcétera esto es la epigenética lo que
5:59que más está estudiando en este momento
6:02Y seguramente que les pase alguna clase
6:05biología general acerca de esto ya
6:09entonces los eventos son reguli de p o
6:12factores asociados a la polimerasa ahí
6:15hay Tri metilación de la elicina k4 por
6:19set1 ya después aparece la tf Doh el
6:24factor pfh de transcripción El último
6:26que ingresa al complejo se acuerdan Y
6:30entonces mediante la 28 se fosforila la
6:34serina 5 del carboxilo Terminal que
6:37vemos
6:39acá ya y ocurre inmediatamente el caping
6:43ya hay otra metilacion posteriores
6:47metilación por C2 de la licina 36 y
6:51comienza la
6:52elongación y junto con ella comienza el
6:56reclutamiento de los factores que vamos
6:58a ver ens seguida esto es fabuloso
7:01complejo pero fabuloso es más complejo
7:04es más interesante No es
7:06cierto Esto es lo que vamos a ver el
7:08pamiento rna aquí tenemos el dna por
7:12última vez que lo vamos a ver en esta
7:14clase y acá está la polimerasa no cierto
7:18ya que está sintetizando esto que es el
7:21rna mensajero en este caso el cual sufre
7:25capin
7:28ring aas primas etcétera de eso vamos a
7:33hablar ahora entonces el procesamiento
7:35del premna De qué se tratar el rna
7:39nuclear es heterogeneo y por eso lo
7:42llaman así HN rna rna nuclear
7:47heterogéneo es decir comprende
7:50transcriptos hechos por la rna
7:52polimerasa do ent otos de genes
7:55nucleares de distinto tamaño
7:57distribución
7:59y que en general tienen una estabilidad
8:02baja la mayor parte de ellos se pierden
8:06se degrada por todos estos mecanismos
8:09que vamos a
8:10ver ya entonces este a ver alguien tiene
8:17eh según el calendario sí Ah no sé bueno
8:22Cualquier duda tienen excelentes
8:25ayudantes y también me pueden escribir a
8:27mí okay
8:30entonces la HN rnp H es la digamos
8:36asociación entre numerosas
8:40proteínas ya que for que se unen al rna
8:43mensajero en este caso y forman la
8:48hnrb ribu núcleo partículas de rna
8:51nuclear heterogénea es decir el
8:55rna aunque sea el precursor inmaduro no
9:00está desnudo en el en el núcleo sino que
9:04está unido a proteínas que lo protegen
9:06de alguna manera y va a sufrir todos
9:09estos procesos hasta que después de que
9:13madura completamente es exportado
9:16exportado al
9:18citoplasma Okay
9:22Eh qué Cuáles son estos procesos bueno
9:28el primero es el cap
9:30esta esto es bien particular porque es
9:33una estructura cap que también es
9:36reconocida por numerosas proteínas
9:38Entonces el c prima cap se forma por
9:42adición de una guanina y ninguna otra
9:46guanina al terminal 5 prima ya vía un
9:53enlace extraño que yo no le había
9:56enseñado es un enlace 5 Prim 5 prima 5
10:00prima y no 5 prima 3 prima como
10:02estábamos acostumbrados a ver en la
10:04síntesis de rna aquí no es un enlace 5
10:08prima 5 Prima ahora esta guanina no está
10:12en ninguna parte sino que es
10:14adicionada como decir gratuitamente okay
10:19No está
10:20codificada
10:22ya el proceso de caping toma lugar
10:26durante la transcripción como les dije
10:28antes o sea ya se comienza la
10:30transcripción la elongación por
10:32la y ya está ocurriendo el caping Porque
10:36todos los factores de capin son
10:38reclutados ahí al tiro inmediatamente es
10:41una la Ren polimerasa es una plataforma
10:44de factores proteicos es increíble y
10:48esto es a una velocidad
10:50asombrosa Entonces esto est proceso de
10:53ging también es muy importante en la
10:56reiniciación también de eh la traducción
11:00y de la
11:02transcripción entonces acá se muestra un
11:04esquema Esta es la guanina H que es
11:09adicionada gratuitamente porque no está
11:12codificada en el dna y aquí está el
11:15enlace 5 prima 5 prima
11:18fosfato ya y esto esto que se mostra acá
11:22es la primera base Real del transcripto
11:27la primera base codificada el dna o
11:30primera base real de transcripto es esta
11:33y luego la siguiente ahora esta
11:36estructura cap es sustrato de metilacion
11:40metilacion ya metilacion
11:43etcétera se fijan incluso acá en la
11:47ribosa también hay metilación Eso
11:50depende un poco de los organismos como
11:52se ha visto algunos organismos tienen
11:54más metilacion que ot ya entonces aquí
11:57se muestra en un zoom
12:00el enlace 5 prima prima llega la guanina
12:03esta ppp trifosfato se adiciona formando
12:09un enlace 5 prima 5 prima gracias a un
12:12enzima que se llama guanilil transferasa
12:15que toma la guanina y la adiciona al c
12:19prima del rna mensajero y ahí tien
12:24entonces después de este proceso que
12:28es I ya después de este proceso hay una
12:32serie de metilacion por distintas
12:35encimas transferasa ahí hay una
12:37metilación n6 metiltransferasa allí hay
12:40otra ya dos o metiltransferasa en la
12:44ribosa y así no todo se da en todos los
12:48erras mensajeros también depende un poco
12:51del tipo de organismo de qué se trata
12:55Para qué sirve
12:57el una respuesta Es decir para el inicio
13:01de la Traducción Ahora nos pasamos de
13:04transcripción a
13:06traducción inicio de la Traducción si no
13:09hay capin no hay traducción a proteína
13:12ya entonces El rna mensajero es
13:16reconocido por el ribosoma sí solo sí
13:19está el capin Entonces el el complejo
13:24capin que une todas esas proteínas que
13:27les dije que se unen a G etcétera forma
13:30un complejo se llama c
13:32eh de complejo B binding eh y C Complex
13:39ya Y eso es porque aquí a este cap ya se
13:43unen diferentes factores de inicio de la
13:48Traducción estamos hablando del 5 prima
13:51ut o sea la región no traducible O
13:57untranslated region ya del C prima Hasta
14:02hasta dónde llega Bueno hasta la u aquí
14:04comienza la traducción cierto entonces
14:07este es el ca udr Y entonces una vez que
14:11hay capin bueno se recluta la subunidad
14:15menor del ribosoma de 40s no cierto que
14:20es más grande que la de bacteri por supu
14:23y est unidad reclutada aquí con
14:26numerosos otros factores hasta alcanzar
14:29el aug eso en términos simples ya y ahí
14:34Entonces recluta otro tipo de complejo
14:37que vienen cuando se asocia la Sub
14:39unidad
14:40mayor Ya ahora en la la asociación de
14:46diferentes factores al cap es importante
14:50para la traducción factores de inicio
14:53que se llaman
14:55eif2 que tiene tres unidades ya eh la
15:00también necesidad de
15:03gtp en vez de ATP usa gtp y nadie sabe
15:07exactamente por qué pero gtp es un
15:11factor no cierto como el ATP que permite
15:14digamos la fosforilación de algunos
15:16otros otras proteínas y luego viene el
15:20complejo ternario con ya sabemos el
15:24terna que viene cargado con
15:27meteorina y que se une al aug que está
15:31acá también se requiere ATP en otra
15:34etapa
15:36etcétera es importante entender de que
15:41este caping binding Complex como se
15:46llame entonces requi numerosos factores
15:49de inicio de la Traducción como eif4e
15:53e4f y f4a etctera no me interesa que se
15:56aprendan esta memoria la mayor parte de
15:59ello se mantiene en ese complejo con el
16:02cap vamos a ver después al final por qué
16:06ya pero en el fondo este
16:10complejo con varios factores de inicio
16:13va
16:15recorriendo El rna mensajero y
16:19desenrollando el rna que adopta
16:21estructura secundarias como lo muy
16:24fácilmente porque como tiene una sola
16:26hebra es refácil que se
16:30Entonces lo va desenrollando o relajando
16:33como quieran y entonces uno de ellos f3
16:38importante para el reclutamiento de la
16:40Sub unidad menor p ya Y entonces la
16:44asociación de El terna el trna o rna de
16:48transferencia cargado con
16:51meina siempre siempre siempre en todos
16:54los teras mensajeros terrene meteorina
16:59y ahí se carga y luego aparece la
17:01subunidad mayor y comienza la traducción
17:05Okay aquí esto es más actual este es
17:08como la última del mate como se
17:10dice
17:12en los eventos
17:15precisos Aquí está el ribosoma
17:17eucariótico de 80 es porque tiene dos
17:22unidades una de 40 s las un menor y la
17:24otra de 60 s las cuales está en
17:27equilibrio necesario para ensamblarse y
17:31esto depende del factor de inicio
17:33e3 se fijan e3 entonces Eh puede
17:38permitir la disociación o asociación de
17:42estas subunidades e f6 en cambio se
17:45encarga de a de impedir la asociación de
17:4860s de su unidad mayor entonces acá
17:52aparece 40s su unidad menor unida al
17:55factor
17:56e3 muy importante
17:59aparece
18:02e1a eif2 con gtp se acuerda y el terne
18:07de
18:08medeina complejo ternari Ahí está ya un
18:13poco distinto que en bacteria y se
18:16establece el complejo de preiniciación
18:18de la Traducción aparece o se recluta
18:22digamos e4 que es el Bing Complex se
18:26forma esto Unido al rna Aquí recién se
18:29une mensajero que está
18:32acá ya Y
18:36entonces ocurre el complejo de
18:38iniciación les dije que toda la
18:41estructura secundaria dos prima str
18:44significa estructura secundaria esto se
18:47relaja escaneando hasta el
18:51aug en ese momento se disocian varios
18:54factores como se ve acá y se asocia
18:58mayor y comienza la
19:01traducción Okay no hay nada más que
19:04saber respecto a esto Esto es lo
19:08importante Cuál es en eucariotes la
19:13secuencia de reconocimiento est unidad
19:16menor es una que es difícil de encontrar
19:20en distintos genes yo lo he tratado de
19:22encontrar pero digamos que se
19:26llama secuencia de reclutamiento de laad
19:29menor cuando la hace que sea
19:31establemente unida es la secuencia cosac
19:35que hay un consenso en eucariotes ya
19:38entonces aquí el esquema de 5 prima 3
19:41prima el 5 prima ut cto hacia allá y el
19:453 Prim TR Aquí está el Stop el Stop de
19:49la Traducción O sea la traducción parte
19:51en el aug y termina en el Stop el codón
19:54sin sentido de acuerdan
19:59eh A diferencia de
20:03nosotros ya que está tan de moda el
20:06fenómeno los virus tienen muchos virus
20:09tienen una particular inicio de
20:16traducción ellos
20:18también en su genoma
20:22viral necesitan inicio de traducción
20:25pero no tienen no sufren cap ya sino que
20:29en el cco
20:31prima los virus tienen una secuencia que
20:34se llama ires como por ejemplo una bien
20:37estudiada en poliovirus
20:40ya también existe en el virus del
20:44hepatitis en el virus de la fiebre Osa
20:47en en
20:48bovinos en otros virus animales de pollo
20:52etcétera hay una tremenda lista Entonces
20:55esta se llama internal ribosome entre
20:59aquí y es esta estructura una serie de
21:02dominios de estructura secundaria que
21:04hay en el
21:05rna antes de la ug y esto Entonces es
21:10como una digamos en el fondo emulación
21:14de eh cap del caping ya y recluta más
21:20fácilmente los factores de inicio 4b y 4
21:25y f4g 4a y y siempre la su unidad menor
21:29unidad
21:31f3 Entonces nos ganan la pelea los virus
21:34porque reclutan muy fácilmente estos
21:36complejos tienen un tracto rico en
21:39pirimidinas acá etcétera y expuesta el
21:42aguje del
21:43virus entonces Claro en base a esto
21:47Ahora hay
21:49muchos digamos estrategias de clonam
21:52miento en terapia génica que usen los
21:56Iris bien que usan los sires para poder
22:00competir con los virus para ver cómo
22:02ellos pueden ganarnos la pelea en el
22:04inicio de traducción que sería
22:08prioritario en vez del nuestro
22:11okay Para que sepan que no hay ninguna
22:15cosa en biología molecular que sea que
22:16no tenga una excepción los virus tienen
22:18una excepción se traducen igual que
22:21nuestros r mensajeros pero no tienen
22:24Camp
22:26[Música]
22:27okay por el otro lado nos pegamos un
22:29salto hacia el tres prima de la reen
22:33mensajer qué dijimos que pasa allá la
22:37divisón de una cola
22:38polia o la poli
22:42enacer ya se supone que hay un consenso
22:47eh en genes eucarióticos que hay una
22:51secuencia a a u aa a que es necesaria
22:55para el corte ya y eh Empalme digamos de
22:59la de la cola
23:01pidada entonces la r polimerasa que se
23:04muestra aquí en este
23:08esquema como que s una sigmo así bueno
23:12parte
23:13elonga y lo que dijimos la clase pasada
23:16dónde termina Cuál es el terminador de
23:18la transcripción Pues no hay un
23:22terminador ya sino que está íntimamente
23:25asociada a la terminación con el
23:28fenómeno o proceso de polianilina que es
23:32el corte artificial por encimas
23:36específica que cortan el rna y ahí
23:39termina la transcripción quiere decir
23:41que normalmente la rna polimerasa pasa
23:43de
23:45largo cerca del punto de corte y este
23:49punto de corte es esta secuencia ve que
23:52es reconocida después existen enzimas
23:56que cortan en la r y otras que agregan
24:00la cola polia por eso dice a sub n son
24:04200 adeninas más o menos de
24:08longitud cómo sería el evento en
24:12términos bien simples cada día se conoce
24:15un poco más de este proceso digamos
24:18poración primero Entonces está en
24:20reconocimiento de la secuencia a u
24:24a ya un
24:27consenso eh Ahí está 11 a 30
24:33nucleótidos acá río
24:37arriba ya del sitio de adición de la
24:41cola
24:42poli y esto Entonces es cortado ahí hay
24:47dos componentes que reconocen o
24:49reconocerían esta secuencia aa u a a a
24:53que serían
24:55cpsf y cstf no muy bien estudiado pero
24:59son importantes al menos vitro en tu
25:03ensayo digamos en el
25:05laboratorio y después entonces el rna es
25:10cortado por las
25:12endonucleasas cf2 y cf1 lo corta ahí
25:16donde está plegado se
25:18corta
25:20ya y una enzima que se llama poli
25:25polimerasa en presencia deb comienza a
25:28agregar aquí una cola bola a esta cola
25:32bola una vez producida se unen las pvp o
25:38poly binding protein proteínas de Unión
25:42a la cola polia y un montón de proteínas
25:46que protege el TR Prim y se quedan
25:51ahí ya al final vamos a ver que esta
25:55Cola poida con todas estas proteínas se
25:57une al c prima al cap donde están todos
26:01los factores de inicio y forma un rna
26:03circular lo vamos a ver al final ahora
26:07si yo les preguntara Para qué sirve la
26:10poil fuera de producir el término de la
26:13transcripción de la elongación de
26:15lación lo que se ha visto lo unico que
26:18se ha visto Así más o menos Claro Es que
26:20la inhibición de la poli
26:24anila impide el transporte de los
26:28al
26:30citoplasma o sea tiene que ver algo con
26:33transporte de r
26:36mensajero
26:38curioso Entonces los tres primat
26:43terminales Ya del rna mensajero son
26:46generados por corte o clivaje y poen
26:51elación ya reconocimiento de la caja por
26:56ciertas proteínas corte por
26:59endonucleasas ya Y entonces todo lo
27:02demás que
27:05quedó porque la Rene polimera pasa de
27:08lgo en el fondo todo lo más que quedó se
27:11degrada okay Y nos queda este Rene
27:14mensajero acortado pero con una tremenda
27:17cola
27:18poliar es muy diferente a bacteria por
27:21ejemplo de
27:24acuerdo
27:26okay entonces Entonces qué tenemos
27:32acá después de esto entonces aparece
27:34laad polimerasa agrega aproximadamente
27:39200 residuos adenina al prima y esto
27:45sería lo que le da
27:47estabilidad ya influencia sobre la
27:51traducción vamos a ver cóm después y
27:54Parece ser importante en algunos
27:55procesos de desarrollo embrional
27:58en algunas especies estudiadas como
28:01copus Levis células de rana no cto en
28:06fin entonces un simple proceso que
28:10además como vimos de nuevo es cotrans
28:13cripciones
28:15Ah
28:17ya Okay entonces lo curioso como todo en
28:22biología y también en biología molecular
28:24Es que la formación de primas de los rna
28:28tonas que son tan importantes
28:31eh No son polian
28:34helados y entonces todas las teorías se
28:37nos fueron a las pailas No es cierto H
28:41Ahí llegamos cómo es posible que los
28:44herna mensajeros de las histonas no sean
28:48poliadenilado sino que tienen que ir a
28:51trabajar al núcleo tienen que ir y
28:53volver
28:54HM en fin entonces
28:59Estos son
29:01digamos procesados mediante otro sistema
29:04que incluye también cortes con enzimas o
29:08clivaje digamos y que les da la
29:11estructura también participa otros otros
29:16factores proteicos como
29:18slbp steam lo binding protein de 35 k y
29:23un pequeño rna nuclear sn rna
29:28ya es un pequeño nuclear que unido a
29:32proteína forma una arbon núcleo
29:36partícula que se llama u7
29:40u7 tenemos Mira tenemos u1 U2 u3 hasta
29:45el u10
29:47conocido los u son complejos de RN
29:51pequeños
29:53snna con
29:55proteínas o sea son una núcleo
29:58partículas ribo de rna núcleo partículas
30:03por su componente proteico ya entonces
30:07acá ocurre que este este esta proteína
30:10slpp interactúa con el rna de
30:15laona y utiliza el resto de la
30:18maquinaria de corte o clivaje ya y
30:22también de otras proteínas como simple
30:24kin se descubrió hace poco eh Y el
30:28complejo u7
30:29snp Que les hablaba recién el que une
30:33proteínas como lsm 10 lsm11 etcétera que
30:38son muy abundantes en el plasma humano
30:41por ejemplo en nuestro plasma porque son
30:44muy importantes es tan importante que
30:47participen tantos procesos se le llam
30:49Seven Magic los siete mágicos 4 s ya Y
30:55entonces hay apareamiento entre la porci
30:59y El rna
31:01mensajero ya de la histona se fijan ese
31:05apareamiento entonces esa es la manera
31:08de reconocer al errad Mensajero de la
31:12histona no es la anterior secuencia a u
31:16a a curioso en fin acá
31:21y introducir otro concepto que tiene que
31:24ver mucho con la diversidad genética
31:28la poliadenilación
31:31alternativa estos sitios se llaman
31:33sitios Paz
31:40Paz resulta que la secuencia de
31:44reconocimiento a u a es tan
31:49pequeña que es muy probable que ustedes
31:52por probabilidad encuentran en cualquier
31:55parte de un rna o de un gen
31:59que parte con un exón intrón etcétera
32:03[Música]
32:05H Entonces ustedes pueden tener o
32:09encontrar sitios de poli anila
32:12alternativo prácticamente en todas
32:14partes con más o menos eficiencia eso es
32:18cierto ya pero cada uno de ellos
32:22significaría que si funcionaran
32:25tendríamos distinto tipo de rna Mad
32:29duros unos más
32:31cortos otros más largos qué s yo
32:34Entonces esto a partir de un simple rna
32:37precursor nos daría distintas
32:40posibilidades de isoformas de
32:44rna algunas como esta sería la más
32:47completa y otras
32:50no entonces hay aquí comienza el
32:55fenómeno lean bien después los que les
32:58puse acá que es del 2017 el fenómeno de
33:02la polien relación alternativo cada vía
33:05se desc se descubren más eh genes con
33:09estos estos sitios ya por probabilidad y
33:14aquí Entonces qué se va a generar con
33:16estos pas alternativos se van a generar
33:19proteínas con distintas funciones por
33:21ejemplo dependiendo de la actividad de
33:24poción isoformas proteicas pequeñas más
33:28grande
33:29etcétera o en algunos casos hay inición
33:33de la expresión
33:34génica
33:37Simplemente ya entonces este
33:40eh esta secuencia digamos de poli enila
33:44todas estas cajas que hemos visto las
33:47puedo resumir en este esquema se ve
33:51complejo pero yo sé que ya lo saben todo
33:552017 ya Aquí tienen ustedes la cola
33:59carboxilo terminal el ctd hiper filado
34:04No es cierto de la polimerasa que
34:06después termina por acá Aquí está el TR
34:10prima del
34:12premna ya aquí están las cajas de
34:15reconocimiento entre la Au
34:18aa y todos los que vimos antes simple
34:22kin
34:24cpsf cf1
34:28las endonucleasas que cortan y las
34:32polimerasas que agregan no cierto la la
34:37serie de adeninas como la
34:39p f Entonces esto se está ahora como
34:43decía anteriormente la la diapositiva un
34:47pas
34:49funcional consiste solamente en una
34:52secuencia rica en
34:54a ya rica en a seguida por una cola de
35:01u Entonces es bastante análogo a lo que
35:05es un promotor o tan complejo como lo
35:07que vimos ayer como lo que es un
35:11promotor como una serie de
35:14factores que participan en La regulación
35:17de la transcripción también porque
35:20estamos regulando la terminación de la
35:22transcripción y a su vez agregando una
35:24cola
35:26bolid si ustedes van a una base de datos
35:29con un poco de conocimiento de
35:31informática y ponen acá No es cierto el
35:34nombre del Gen en la ID del
35:36Gen ustedes pueden tener inmediatamente
35:39ahora una lista de sitios de banila y
35:45eh Bueno antes yo le hacía informática a
35:48ustedes pero ya no tenemos tiempo
35:50ustedes pueden a partir de Gen tenen
35:53numerosas numerosos sitios de polien
35:56ilación alternativa
35:58ya lo que les dice ustedes que a partir
36:00de cada rna precursor se pueden producir
36:04distintas isoformas de rna maduro y
36:08también a partir de cada uno de ellos
36:10proteínas
36:12distintas la
36:14diversidad y
36:16pasamos a otro proceso rna
36:21SP hay varios tipos
36:25de digamos
36:28dependen un poco del tipo de intrones
36:30que se
36:31trate tenemos intrones clase 1 dos 3 y
36:34los entrones del prad nuclear que es lo
36:38que más nos
36:39importa menciono esto porque los
36:41intrones clase un descubrieron hace
36:44tiempo los científicos que le
36:46descubrieron fuera un premio Nobel y es
36:50una propiedad que tiene r que permite
36:54salir el sacar el
36:58y sin necesidad de enzimas o proteínas
37:02ningún complejo participa eso se llama
37:05el rna como enzima el rna autonómico o
37:09Spin autonómico ya en organismos
37:13eucariot superiores aparece el lón clase
37:16dos que tiene muchas propiedades
37:19similares también es
37:21autonómico ya pero el entr comparte
37:26secuencias
37:28exon intron con el nuestro los intrones
37:33del preem rna nuclear sin embargo los
37:36entrones del premna nuclear requieren un
37:40complejo una maquinaria enorme que se
37:42llama spliceosoma o cuerpo del spl el
37:46spliceosoma que está compuesto por
37:50numerosos complejos u de nuevo ribo
37:54núcleo partícula y algo que cada cía
37:57tiene más relevancia las proteínas
38:00Sr ricas se llaman así porcina
38:05arginina Ya ahora los intrones clase 3
38:08no vamos a ver al final son de los
38:10terrenas nucleares los terrenas también
38:14se sintetizan como
38:17precursores inmaduros y también tienen
38:20que ser procesados mediante un tipo de
38:23spli que es algo distinto porque
38:25participan enzimas muy específ Entonces
38:29de qué se trata el splicing simplemente
38:31de la corda y Empalme de los
38:34intrones ahora no crean que esto es tan
38:37tan exclusivo de eucariontes también en
38:40procariontes tenemos algunos ejemplos de
38:44self Especialmente del tipo uno de
38:47intrones tipo un y en algunos
38:50terran pero en general lo único que
38:53tienen el complejo presos somal somos
38:56nosotros Entonces de qué se trata bueno
38:59que los clase dos y del prem R nuclear
39:02comparten pequeñas secuenci de consenso
39:05Pero estas sí que son secuencias de
39:09consenso casi todas las señales para el
39:11sping que quede claro están dentro de
39:14los
39:15intrones no en los los intrones mandan
39:20si quieren salir problema
39:23de entonces aquí se distingen dos
39:26secuencias más importante el c prima del
39:29sping y el TR prima del SP no importa el
39:33tamaño que tenga el intrón sabemos que
39:35hay intrones que son tremendamente
39:37grandes mucho más que
39:38loson c prima SP inside TR
39:43prima al menos eso es lo que se conoce
39:48que todos los intrones miren 100% 100%
39:53conservado 100%
39:55conservado increíble la natur que ocurra
39:58esto en biología 100% conservado Esta es
40:01la famosa regla del gtag
40:05gtag la regla más fija del mundo el gtag
40:10nunca se le olvid esto gtag es en el dna
40:15No es cierto cómo sería en el
40:18rna gu
40:21ag okay Nos
40:25pasamos entonces dentro de El intrón
40:29está este cco Prim el tres Prim y existe
40:34un una porción rica en pirimidinas y
40:38algo super importante una secuencia de
40:40ramificación que está acá en que esta
40:44adenina es muy bien conservada también
40:48Pero a medida que avanza la evidencia
40:51experimental se empiezan a aparecer
40:53secuencias dentro de los exones que
40:56antes no se conocía
40:58ya como este es que lo puse Aquí
41:02es es un enriquecedor de
41:05display que está dentro del exón en la
41:08zona
41:10codificante que recluta factores
41:12proteicos para permitir que este intrón
41:15se vaya lo más fácilmente posible bueno
41:19este tipo de secuen se llaman splicing
41:21spoilers o sea algo que nos está echando
41:23a perder el sping que conocíamos antes
41:27ya entonces el cinco prima y el tres
41:31prima participan en el reconocimiento de
41:34este
41:35intr ya y lo sacan Esa es la idea ahora
41:41en ese tiempo estoy hablando hace 20
41:43años atrás se creía que un gen
41:46cualquiera que da origen a este hern
41:49precursor que tiene no cieros siete
41:52intrones en este caso por un experimento
41:56de norden bling
41:58eh se quiso probar que la maquinaria de
42:03splicing iba
42:06reconociendo Digamos como si fuera un un
42:10escaneo ya
42:12escaneando eh el rna precursor y sacando
42:16los intrones en el orden en que estaban
42:191 2s TR cu así se fij pero mediante este
42:24experimento en norden Blood de
42:26hibridación ya con en laad maduro Aquí
42:31está el transcripto primario de más alto
42:33tamaño obviamente pero miren todo lo que
42:35se reduce de tamaño y con distintas
42:39sondas o manera de comprobar la
42:41secuencia eh Por norden blot se dieron
42:44cuenta que no aquí los primeros intrones
42:47que salían eran el cinco y el seis y
42:50después salía el cu y el cco O sea qué
42:53locura no hay un fenómeno de escaneo de
42:57del 5 prima 3
42:58prima o sea existen intrones que salen
43:03fácilmente y otros no dan existen
43:07intrones que son fuertes en salir y
43:09otros no dan esa es la única explicación
43:13ya porque el intrón tiene casi toda la
43:16información para este
43:19procesamiento Si vemos el splicing en
43:22etapas o estado aquí tenemos el gu el GT
43:27o g y la g y aquí está la caja eh de
43:32ramificación que tiene un secuencia
43:35animal con esta adenina muy importante
43:38entonces lo que pasa es que hay un corte
43:40primero en el c prima No cierto de
43:44nitron y aquí queda el exón libre y se
43:48produce un lazo con un enlace 5 prima
43:52dos prima entre el 5 prima electrón aquí
43:56se fijan Y el dos prima de esta adenina
43:59en el rna este es el larat que se llama
44:03así en inglés laria un lazo que todavía
44:06queda un trecho aquí hasta la g y Unido
44:11al exón
44:14posterior entonces Posteriormente se
44:16produce una reacción de
44:18transesterificación el primer exón ataca
44:21al segundo
44:23exón ya eso se llama transesterificación
44:27porque rompe este enlace fofo y después
44:30forma otro ya y el área que se muestra
44:35acá como un lazo se fijan de vaquero Sí
44:39este á es des ramificado porque
44:42corresponde al entorno y es
44:46degradado Ya ahora esto esto que parece
44:50maravilloso por su secuencia de consenso
44:53y todo hay que considerar desde el punto
44:56de vista el tamaño de los genes y el
44:58número de intrones que tiene por eso les
45:00recuerdo esto el tamaño de los genes los
45:04genes en general pueden ser divididos en
45:06grupos los pequeños hasta 4000 pares de
45:11base los medios hasta
45:1445 los grandes digamos
45:18150 los
45:20gigantes
45:22250 y el mamut que es el gen de la
45:25distrofina
45:27ya aquí hay asociada una cantidad de
45:30enfermedades
45:32increíble y vamos a ver Por qué este Gen
45:35tiene
45:372500 kobas Se dan cuenta lo que es eso
45:41está en el cromosoma X es enorme
45:45enorme entonces acá tienen ustedes estos
45:49mismos genes betag globina albumina
45:51Tienen alguna ejemplo ahí y el dmd de
45:55distrofina tamaño del Gen
45:582,5000 bueno
46:01kilas K el tamaño del rna mensajero
46:05maduro
46:06imagínense una cosa muy pequeña y el
46:10número de entrones aquí creo que son 72
46:13Ah actualmente se descubrieron dos
46:17más entonces hay mucho más ines
46:20que entonces podemos echarle la culpa de
46:24todos loses
46:27que son traducidos obviamente son
46:29llamados exones por eso lo llamamos exon
46:32pero los intrones están en distinto
46:35tamaño de 65 pequeñito por ejemplo en
46:37levadura y en hongos son muy pequeños
46:41pero en eucariot superiores son de hasta
46:4410000 o más base ya el promedio de es
46:503000 bases
46:53entonces 145
46:59ya entonces muchos genes los intrones
47:02tienen mucho más espacio dentro del
47:05Gen Aquí está el famoso
47:08mamut de la distrofina esta proteína No
47:12es cierto de las células
47:16musculares todo lo que es músculo
47:18esquelético No es cierto esta proteína
47:21es un filamento una proteína grande un
47:25filamento verdadero que se coge así como
47:27si fuera un acordeón y que mantiene
47:29nuestra contractibilidad
47:33muscular este
47:35Gen lo vamos a ver en detalle este Gen
47:39tiene tres promotores no
47:41uno se nos complicó la idea promotores
47:45alternativos y en el fondo utiliza un
47:48promotor distinto en distintos
47:51tejidos Wow No es cierto Aquí están los
47:55exones los ines es más delgadito y acá
47:58se muestran algunas alteraciones algunas
48:01Como por ejemplo distrofia muscular de
48:04nichen y la distrofia muscular de beque
48:07que es menos menos digamos Las dos son
48:11fatales pero esta todavía tiene alguna
48:15solución eh proteínas truncadas o o no
48:21proteínas Yo tengo un review de este Gen
48:25que tiene una habla pero infinita de de
48:30lesiones insercion de que el splicing de
48:33repente se se salta exones o incluye
48:37intrones etcétera Ya esa es la proteína
48:41distrofina la región filamento tipo
48:45acordeón Así que tiene el aminoterminal
48:48que interactúa con actina la actina
48:52ya entonces este Gen Como se muestra acá
48:56genera diferentes isoformas desde el
48:59mismo Rena mensajero precursor Aquí
49:02están los promotores alternativos de p
49:04427 en cerebro y otro eh dp 427 los tres
49:11promotores entonces dan origen a las
49:13mismas isoformas ya difieren un poco en
49:16el amino terminal sitio de Unión con
49:19actina y de este Gen Entonces se pueden
49:21producir diferentes isof formas de
49:23distinto tamaño ya y de hecho entonces
49:26tiene promotores alternativos internos
49:29como este este este este L A producir
49:33distintas isoforma si Ed lo buscan este
49:36Gen en la base de datos se van a aburrir
49:38descubrir cosas aquí está eh su
49:41localización genómica como soma x de eh
49:45Homo Sapiens ahí está la referencia el
49:48ID y aquí están las isoformas
49:51descubiertas hasta ahora quizás Cuántas
49:53más hay que da origen a estas proteínas
49:56de
49:58427 kt estas cu pero Sonoras distintas
50:04con exones con el primer exón que cambia
50:08de una isoforma a la otra Y esta es la
50:11zona que teóricamente interactúa con
50:14lactina se fij ahora ninguna de estas
50:20isoformas estimado estimada ninguna
50:23isoforma es 100% expresada qui decir que
50:27siempre hay un balance dependiendo del
50:29tejido en el porcentaje relativo de
50:33expresión de una y es forma respecto a
50:34la otra pero nunca son 100% esta o 100%
50:38esta otra puede ser 80% esta y 20% esta
50:42otra ya vamos a tratar de entender Por
50:45qué Y después existen otras esof formas
50:48a partir del mismo Gen se fijan Qué
50:51función cumpen eso no está muy claro
50:53pero tienen implicancia en mucho de
50:56desórdenes del músculo
50:58esquelético vayan a un atlas de
51:01patología y van a ver Wow la cantidad de
51:04desórdenes que produce el splen
51:07alternativo entre otras cosas en fin
51:11términos químicos en términos químicos
51:14porque somos químicos Cómo es el spl
51:18nuclear la caja de ramificación está acá
51:21ahí está la adenina famosa con su dos
51:23prima Oh que solamente posede el la
51:25renado
51:27ataque nucleofílico ruptura de este
51:30enlace
51:30fosfodiester justo al lado de la la
51:33secuencia
51:35gu Entonces se libera el exon uno el
51:39cual inmediatamente catalizado por
51:41proteínas del exposoma ataca al enlace
51:45fosfodiester ya entre la la G y el exón
51:50do Entonces el exón un aquí se une al
51:53exón 2 y genera el área este lazo que
51:57después simplemente se elimina se
52:00degrada Quién es el primer participante
52:03de el reconocimiento de un intrón es un
52:07complejo el primero que vamos a ver u
52:10uno que fue el primero descubierto super
52:13bien estudiado que es el la rna nuclear
52:16heterogéneo
52:17u1 que se muestra acá abajo toda esta
52:21porción de secuencia es
52:22rna y dice dominios domin dominio cada
52:27uno estos dominios une proteínas
52:31sm que son proteínas del suelo muy
52:34abundantes contra las cuales por ejemplo
52:36hay distintas enfermedades enfermedades
52:39del sistema autoinmune como lupus
52:42eritematoso ya Porque obvio que si
52:45ustedes atacan
52:46eh en forma autoinmune digamos a las
52:50proteínas que estabilizan a uno entonces
52:53no hay reconocimiento del C prima gu se
52:57acuerdan el 5 prima gu ya no se reconoce
53:02entonces este complejo lo que hace es
53:04reconocer esta secuencia
53:07gu reconoce el gu mediante un
53:10apareamiento se fijan se aparea con el
53:13rna y esto ha sido super probado si
53:16ustedes cambian por ejemplo la secuencia
53:19de de un en esta región Entonces no hay
53:22reconocimiento del intrón Así que es muy
53:25importante la secuencia de rna de este
53:30complejo Entonces químicamente es fácil
53:33entender esto ya sabemos cómo se forma
53:36digamos el el enlace A qué hora teníamos
53:40regreo
53:41chicos
53:43Aló creo que nos pasamos del
53:50recreo ya entonces 5:26 y era a las 515
53:56ya hagamos un recreo de 10 minutos y
54:01continuamos bueno profe gracias Ya vayan
54:05a tomarse un cafecito dejo de
54:08grabar Entonces desde el punto de vista
54:12químico No es cierto ya conocimos la
54:14secuencia importante e fósforo ahí no
54:18cierto el enlace ffor gu ag G altamente
54:23100% conservada y dentro existe en el
54:27intrón esta caja de ramificación donde
54:31se forma
54:32enlace acá est elárea o
54:36lazo el cual es gran parte cierto el
54:41intrón que después se degrada y los
54:45sexes son ligados Pero quién reconoce
54:48toda esta estructura digamos eh En el
54:52sentido químico son complejos u
54:56y proteínas
54:58Sr entonces podemos decir que ya ya
55:01sabemos que hace un no cierto un se une
55:04aquí a el
55:07gu No es
55:09cierto estabilizado por un factor
55:14proteico que es una proteína Sr también
55:17un factor spacing por eso se llama sf
55:20splicing factor 2 que estabiliza a un y
55:25después aparece una serie de otros
55:28complejos sub que no me interesa que se
55:30memoricen H pero por ejemplo existe U2
55:33muy importante que se une a la caja de
55:37ramificación donde se forma el
55:39lazo ya en el intrón
55:43eh después un complejo con u4 u5 u6 un
55:48complejo trimétrica
55:57hay una transesterificación un ataque
56:00sobre el segundo exón son dos y después
56:04estos exones hay hay requerimiento
56:07digamos de ATP en dos etapas Pero no
56:08importa mayormente estos dos exones se
56:11unen acá y el lazo se degrada ya esto se
56:17ha ido modificando de acuerdo a las
56:20investigaciones que hay pero eh Las
56:23investigaciones apuntan a que hay
56:26múltiples Rutas para el reconocimiento
56:28del C Prim prima una es a través del
56:32intrón que es lo que uno podría decir un
56:35sping constitutivo Siempre sale in y no
56:39no siempre Sale entonces puede ha un
56:42reconocimiento a través del o a través
56:44del exón ya Y eso es spacing
56:52alternativo vamos a tratar de entender
56:54por pero pongan este dna exon un aquí ex
57:01pueden ser más exones no
57:03importa tenemos nuestro prna aquí
57:08inmaduro con los intrones digamos Ah
57:12Todavía no lo sacamos no se salen
57:14todavía y viene el SP alternativo Y a
57:17partir de este simple Gen y este simple
57:20rna
57:22inmaduro se producen tres isoformas se
57:25llama así isoformas el Ren mensajero 1
57:292s y TR en este caso se fijan ustedes
57:33entonces acá Bueno eh lo que corresponde
57:37al exón uno se unió con el exón dos se
57:41unió con el son 3 se unió con el cuatro
57:44y con el cco Esto es lo que uno podría
57:46esperar normalmente H es lo que se llama
57:50in constitutivo pero no siempre ocurre
57:52así ya sino que por ejemplo acá Qué pasó
57:56Se saltó el exón 3 el exón
58:023 se fija o sea pasó de unir el exon 2
58:07con el
58:10cuaton 3 y los correspondient intrones
58:13también se lo
58:14saltó y en est otro caso bueno acá qué
58:18se saltó Ah el 4 o sea Perdón alón 4 ya
58:26Entonces esto te da isoformas distintas
58:28de un mismo
58:30Gen y esto codificar entonces para una
58:34proteína a b o c con diferentes
58:37propiedades con diferentes dominios con
58:40diferentes actividades
58:42etcétera Esto entonces es la
58:45biodiversidad que tenemos dentro nuestro
58:47ya la biodiversidad o la diversidad
58:51genética como quieran llamarlo el spen
58:53alternativo a partir de un gen aquí
58:55tenemos y podrían ser más si ustedes
58:58empiezan a combinar aquí este con este
59:01se saltan esto este con este otro en fin
59:04y si a esto le sumamos la
59:07poliadenilación alternativa Uf cierto de
59:11un G podos hacer mucho entonces las
59:14interacciones a través del in son
59:16importantes en lo que se llama el
59:19sping constitutivo Digamos si uno quiere
59:21llamarlo así un está Unido al 5 prima SS
59:26el Place inside y acá está el otro exón
59:30no cierto aquí en esta parte participan
59:34otros factores que son U2 AF U2 AF 35 65
59:39que son ribon partículas también y una
59:42cosa
59:43importante lo que hace de
59:45puente entre el c prima de intrón y el
59:49tres prima de nón son las proteínas de
59:52CR ricas en serina y
59:54arginina estas proteínas están distintos
59:58tejidos en distinta abundancia porque
1:00:02normalmente estas proteínas también
1:00:04sufren spl alternativo esta proteín
1:00:07tienen un dominio de Unión a
1:00:10rna ya y a proteínas El dominio
1:00:15RS se une con las proteínas de este
1:00:18complejo u1 y El dominio rrm que es de
1:00:24rna recognition
1:00:26se une a la porción rna del rna
1:00:30mensajero
1:00:31inmaduro entonces hacen como un puente
1:00:34fijan interactúan con todas las otras
1:00:37proteínas y existen muchas proteínas Sr
1:00:40en distintos
1:00:42tejidos así que bueno el complejo
1:00:45comprometido Es simplemente lo que
1:00:48acabamos de ver uno inicia todo
1:00:50uniéndose al 5 prima Place
1:00:53inside ya mediante varamiento rna rna
1:00:58después participa U2 AF en la unión al
1:01:01eh tracto
1:01:05polimerízan a llegar los otros complejos
1:01:08se fijan Entonces se forma este complejo
1:01:11comprometido sí o no a través del intrón
1:01:16y esto saca un intrón TR mayores
1:01:19problemas spacing
1:01:21constitutivo Ya entonces eso versus el
1:01:24spacing alternativo
1:01:27para esta proteína Sr se han descrito en
1:01:31distintos tejidos un montón de estas
1:01:33proteínas ya con los mismos dominios de
1:01:37Unión a proteína y de Unión a
1:01:39rna son fundamentales en el
1:01:42reconocimiento a través del intrón y ahí
1:01:45el intrón sale si estas proteínas CR no
1:01:48reconocen un intrón ya desde el 5 prima
1:01:51al 3 prima Entonces ese in probablemente
1:01:54no va a salir
1:01:57Ok o va a salir en menor medida acu que
1:02:02aquí no es todo
1:02:05blanco además
1:02:07AC tambén es un proceso
1:02:11ccion acoplado a la elación de la
1:02:14transcripción entonces existe
1:02:18unin si es un reconocimiento a través a
1:02:24través ya como el ejemplo que vimos y
1:02:28luego viene el otro ensamblaje el
1:02:30reclutamiento de u5 u4 u6 ya
1:02:35requerimiento de ATP etcétera y
1:02:37formación de los complejos que
1:02:40posibilita la formación del áreas en
1:02:42electrón este es la última el último
1:02:46modelo que hay acerca tampoco me
1:02:48interesa que se lo aprendan de
1:02:50memoria estamos desde los complejos
1:02:53comprometidos ya por eso se llama con
1:02:58comprometidos con el SP si esto se da
1:03:01entonces sale tenemos el complejo e
1:03:05hasta el C2 que es el último paso de
1:03:10transesterificación en que los exones
1:03:12son ligados entonces son discreto estado
1:03:16muy rápido ya de
1:03:19reconocimiento y esto ya lo habíamos
1:03:22visto es un pequeño tema de aut
1:03:26catalíticos de grupo dos que están en
1:03:30organismos digamos eucarióticos pero
1:03:34inferiores normalmente
1:03:37ya del grupo dos solamente lo menciono
1:03:41es lo que concuerda con lo que hemos
1:03:43visto del rna nuclear las secuenci de
1:03:49consenso entonces hay un tema evolutivo
1:03:53importante ya
1:03:55se han manifestado Entonces por ejemplo
1:03:59acá intrones nucleares intrones de grupo
1:04:04dos la misma cosa casi todos tienen esta
1:04:06secuencia de consenso el rna tiene algo
1:04:09no cierto que son adoptar esta
1:04:12estructuras secundarias gracias a su dos
1:04:15prima Oh ya ese dos prima Oh que está
1:04:18ahí está acá se fijan en todas partes
1:04:21está los Prim Así que el rna es muy
1:04:25particular Y eso él tiene las
1:04:27propiedades para ser intrón Ya ahora el
1:04:32puede ocurrir durante o después quizás
1:04:34de la transcripción a medida que que el
1:04:37carboxilo terminal de la rna polimerasa
1:04:41digamos recluta todos estos factores que
1:04:44ya hemos visto el rna se ha visto el
1:04:47sping perdón se ha visto que está
1:04:49conectado también a la exportación una
1:04:52vez que el SP es correcto y perfecto
1:04:55Entonces se produce la exportación de la
1:04:58renad mensajero maduro al citoplas se ha
1:05:01visto un complejo Que hay ejc que un
1:05:04complejo de proteínas que se unen
1:05:07digamos a
1:05:08eh la unión de los exones cuando cuando
1:05:13la unión de ellos es perfecta ya Y
1:05:19también participaría este complejo en el
1:05:22transporte y posterior de grabación Si
1:05:25no si no ocurre perfecto digamos
1:05:29entonces una vez que ocurre el spli y
1:05:31este intrón que se muestra aquí sale
1:05:33según este complejo se llama
1:05:37ejc está muy bien caracterizado en
1:05:40levadura en humanos nos falta mucho
1:05:43todavía ya en hongo y levadura se ha
1:05:46visto bastante bien este complejo
1:05:48entonces una vez que ocurre el paí el
1:05:50complejo
1:05:51seg Entonces es obvio que si hay por
1:05:55ejemplo
1:05:56traducción activa el ribosoma va hacia
1:05:59allá no Y si hay un cón prematuro de
1:06:02parada que va hacer el
1:06:04ribosoma con una mutación sin sentido
1:06:08hasta ahí no llega
1:06:10cto si no está este cón prematuro el
1:06:14ribosoma sigue y desplaza al
1:06:17ejc eso significa que el primer round
1:06:21funcionó si hay codones de termin
1:06:25prematuro como errores por ejemplo la
1:06:28unión de los sexes simplemente rna es
1:06:32degradado eso es lo que se llama el
1:06:34decap Quién es en general la maquinaria
1:06:38que fiscaliza el el el
1:06:42Perfecto
1:06:44splicing es una maquinaria que se llama
1:06:47nonsense
1:06:49Med
1:06:51dec ya
1:06:53nmd nonsense
1:06:57dec esto significa que esta maquinaria
1:07:00reconoce cualquier tipo de comones de
1:07:04parada
1:07:05prematuro Okay entonces está sumamente
1:07:10acoplado todo el
1:07:13nmd remueve todos los mensajeros con ptc
1:07:17o codones esto se llama eh codones
1:07:21prematuros de terminación o de parada
1:07:27Entonces está acá el prem r Aquí está el
1:07:30caping no cierto la pilación todo lo que
1:07:33ustedes quieran hay una serie de
1:07:35factores que se unen a la unión digamos
1:07:39los sitios de Unión después del
1:07:42spl sitios de Unión si hay Si no hay
1:07:46digamos
1:07:47ptc entonces los ejc son removidos por
1:07:51los
1:07:51ribosomas y este rna es inmune a sistema
1:07:56nmd si hay cotones prematuros o algún
1:07:59error de este tipo el ribosoma no es
1:08:02capaz de disociar estos complejos y se
1:08:04producen proteínas truncadas que después
1:08:07normalmente exterran es degradado ya es
1:08:11un complejo de todo esto es un complejo
1:08:14de
1:08:15vigilancia ya sumamente fino se dan
1:08:19cuenta lo extraordinario que un ser
1:08:22humano Entonces el spli alternativo
1:08:26es importante estimados y estimadas que
1:08:30el alternativo no es como se pensaba
1:08:33hace 20 años atrás que era un splin
1:08:37aberrante no el sping alternativo es más
1:08:40que un acepción ya es una regla existe y
1:08:46va a
1:08:47perdurar ya eso ocurre en eucariotes
1:08:51multicelulares por supuesto entonces
1:08:54exon enones pueden ser excluidos o
1:08:59incluidos y esto contribuye muy
1:09:03importante a la diversidad funcional de
1:09:07los productos de un gen hasta cuatro
1:09:09productos distintos por cada
1:09:12gente y aquí una digamos esquema de los
1:09:17diferentes tipos
1:09:19de de alternativo se fijan
1:09:24intrones cinco prima alternativos tres
1:09:27prima alternativos el cco prima es Place
1:09:29inside GT No es cierto el gu en el rna
1:09:33eg es tan pequeño que es posible
1:09:37probabilísticamente encontrarlo casi en
1:09:39cualquier parte y de hecho ocurre o sea
1:09:42pueden haber cinco primas alternativos
1:09:45también tres primas alternativos porque
1:09:47es obvio
1:09:50eh la maquinaria es engañada en esas
1:09:53palabras Eh todo se ha visto hay exón
1:09:57inclusión eh salto del exón o skipping
1:10:00por acá arriba hay un skipping se
1:10:02fíjense salta Eso significa skiping se
1:10:06salta este exón y acá no pu es más
1:10:08constitutivo y así combinatoria exones m
1:10:13an exclusivo Y a eso le sumamos entonces
1:10:17a esta diversidad funcional promotores
1:10:22alternativos y poad
1:10:25alternativo Uf se fijan la diversidad
1:10:29que hay por cada gente el sping puede
1:10:32ser regulado por entonces otras secuenci
1:10:36que se están descubriendo en los últimos
1:10:38yo diría 5 años 10 años tal vez máximo
1:10:42que están sobre los exones les dije yo y
1:10:45que se llaman Bueno también están sobre
1:10:47los intrones porque el intron tiene casi
1:10:50toda la información entonces se llaman
1:10:52sping enhancer o sea potenciadores o
1:10:57enriquecedores del SP y silenciadores
1:11:00del SP ya y se descubren cada día más
1:11:04estas pequeñas secuencias cuando diga
1:11:06secuencia bueno el dna tiene secuencia
1:11:09el rna también pero tienen que ser
1:11:11reconocidas por algún factor proteico
1:11:13Cuáles son normalmente los complejos u y
1:11:17las proteínas Sr ya y ahí entonces
1:11:21aplicando esta nueva digamos eh
1:11:25investigación estos hallazgos
1:11:28experimentales tenemos diferentes formas
1:11:30de
1:11:31sping se fijan en a lo que ya hemos
1:11:35visto y si ahora hacemos una regla
1:11:39general del sping y cómo es regulado
1:11:42estos son los
1:11:43elementos que participan en el SP aquí
1:11:47por ejemplo hay un spacing desde este
1:11:49exón hasta otro exón y otro Sería más
1:11:53constitutivo sería de este a intermedio
1:11:58desde este intermedio a terminal pero se
1:12:02han
1:12:03descubierto silenciadores del sping intr
1:12:07sping en intr sping silen
1:12:12silenciadores dentro del in y dentro del
1:12:23exic cada más secuencia cada una de
1:12:27ellas Entonces estaría eh posibilitando
1:12:30el esad sin
1:12:33alternativo los enriquecedores por
1:12:35ejemplo qué es lo que harían unen
1:12:38proteínas Sr que a su vez participan en
1:12:41el reconocimiento del intrón y lo sacan
1:12:44un silenciador inhibe la salida de este
1:12:48intrón ya y así los mismos silenciadores
1:12:53y enriquecedores del intrón también
1:12:57participan en esta regulación Entonces
1:13:00como ustedes comprenderán Esto no puede
1:13:02ser todo o nada esto depende también de
1:13:04la abundancia la abundancia relativa que
1:13:07haya en un tejido de las proteínas de
1:13:09crr por ejemplo ya esto siempre es
1:13:14relativo En porcentaje Aquí está el exón
1:13:18c que tiene exon enhancer silenciadores
1:13:22y los intrones que pueden modelar
1:13:25Entonces modular los sitios
1:13:29de pero a esto hay que sumarle ahora las
1:13:32variantes genicas cada uno de nosotros
1:13:34somos seres polimórficos o sea tenemos
1:13:37muchas variantes para un mismo Gen eh
1:13:41Hay genes que tienen 300 cambios por
1:13:44ejemplo de una sola base en distintas
1:13:46zonas del Gen Y eso también repercute ya
1:13:50puede un cambio de un de una base en un
1:13:53gen es lo mismo un cambio de una base en
1:13:56el rn mensajero lo mismo cierto y eso
1:14:00puede repercutir de la siguiente manera
1:14:02puede anular la secuencia de un es o de
1:14:06un e s y lo mismo con la secuencia de
1:14:10los
1:14:11inon esas se llaman variantes genómicas
1:14:15a buen entendedor pocas palabras como
1:14:18una variante genómica un simple cambio
1:14:22de una base en seres Pol como nosotros
1:14:26puede alterar el sping de una persona a
1:14:29otra aquí un ejemplo para caso clínico
1:14:33por ejemplo el gen de m neuron
1:14:40smn1 este la pérdida función de este Gen
1:14:44causa No cierto
1:14:46atrofia muscular
1:14:49espinal desorden
1:14:52neurodegenerativo ent tanto los ind como
1:14:55lo afectado tiene un gen parálogos menos
1:14:57mal tenemos un gen parálogos tenemos una
1:15:00duplicación no es perfecta pero hay una
1:15:03duplicación que se llama
1:15:06es2 ya que tiene un único cambio de c
1:15:10citocina timina acá
1:15:13citosina timina que en el
1:15:16rna ya entonces este único cambio qué es
1:15:20lo que podría ser es lo que piensan los
1:15:23investigadores que acá este
1:15:25es une un factor de sping cierto y esto
1:15:30posibilita de que como enriquecedor
1:15:33entonces este se da perfectamente como
1:15:35muestra esta línea aquí y este entrón
1:15:38sale perfecto cierto pero en cambio en
1:15:42el otro qué pasa en esta gente Bueno hay
1:15:46una mutación que cambia No es cierto de
1:15:50citosina ademina o a
1:15:53uracilo y ahí desaparece el e y por lo
1:15:57tanto el pintón es más débil y no y
1:16:01queda ahí y esto produce una proteína
1:16:05afuncional otros modelos creación de un
1:16:09silenciador también puede ser que una
1:16:11simple cambio de base cree un
1:16:13silenciador o acá haga aparecer un
1:16:18eh digamos silenciador dentro del mismo
1:16:22exón se fijan aquí sale que intrón aquí
1:16:25no
1:16:26sale ya entonces la terapia génica ahora
1:16:31está en pleno desarrollo para poder y
1:16:33les voy a subir un paper de esto para
1:16:36poder recurrir a
1:16:38oligonucleótido sintético sistema
1:16:40crisper cas y todo eso para revertir
1:16:43estos fenómenos falta mucho todavía
1:16:46bueno en resumen exon skiping tres prima
1:16:50alternativo c prima alternativo
1:16:52retención de intrones exones m
1:16:55exclusivos promotores alternativos eso
1:16:57es lo que
1:16:58somos alternativ Uf tiene alto para
1:17:02pensar ejemplo china
1:17:04humana ID t pm3 cromosoma 5 humano y
1:17:11aquí tienen el transcrito
1:17:12primario se fijan con tod laon intron Y
1:17:18qué da lugar músculo estado este tipo
1:17:23de est punteada significa que se va o no
1:17:28se va ya músculo liso otro tipo de
1:17:34SP F fíjense arriba los exones que son
1:17:40incorporados y los que son los exones
1:17:43que son saltados digamos se los salta
1:17:46exon skiping cuando se salta un exón el
1:17:50cerebro que ocurre otro tipo
1:17:53de y así fibroblastos etcétera una
1:17:58isoforma 2 3 4 5 6 7 o8 nu es formas
1:18:04distintas que lo más probable es que
1:18:06cuando sean traducidas a proteínas nos
1:18:11dan proteínas con funcionalidades
1:18:13completamente distintas que no No
1:18:15necesariamente Son
1:18:17aberrantes son necesarias en distintos
1:18:21tejidos se fijan ahí está el mismo Gen
1:18:25el comoos soma 15 est lo van a encontrar
1:18:27en el banco de datos en el GB o sea el
1:18:31Gen es el
1:18:32mismo pero se usa de manera diferente en
1:18:36músculo cerebro o
1:18:38fibroblastos fij en fin los terran ya
1:18:42les dije que es un
1:18:44splicing diferente porque la estructura
1:18:48del precursor del terr tiene que sufrir
1:18:53aquí un desplazamiento toda esta región
1:18:55que está interrumpiendo este sería como
1:18:57el intrón no tiene secuencias de
1:19:00consenso similares a lo que hemos visto
1:19:03simplemente aquí hay encima que cortan
1:19:06esta región y el el precursor se reaso
1:19:12para generar posteriormente el anticodón
1:19:16maduro ya y aquí participan encimas de
1:19:19reconocimiento y endonucleasas que
1:19:22cortan el precursor ya los terminales y
1:19:26generan eh una serie de intermediarios
1:19:29que me importa que se
1:19:31acuerden ya que disminuye el tamaño del
1:19:36terrena mediante Cortes y reuniones en
1:19:40reacciones
1:19:41separada esto ocurre igual desde
1:19:44levadura hasta el ser
1:19:46humano nucleasa corta se repliega esto
1:19:50hay un plegamiento aquí hay
1:19:52intermediarios que se muestran acá fosfo
1:19:55esterasa cíclica hay fosforilaciones del
1:19:58C prima y se produce el ataque c prima 3
1:20:02prima y el terran maturo Con eso es
1:20:06suficiente para que entiendan que
1:20:07también los terran tienen intrones pero
1:20:11los mecanismos son absolutamente
1:20:14distintos Okay después pasamos levemente
1:20:17una pincelada sobre rna editin Qué es el
1:20:21Edi editin es cuando la secuencia se
1:20:25altera por inserción o de lesión de
1:20:30nucleótido este fenómeno se llama cest o
1:20:32sea corte dis sellado es lo mismo que
1:20:35copiar algo copiar algo de aquí y
1:20:38pegarlo allá por qué ocurre esto porque
1:20:41en el fondo este es como un speling se
1:20:45que como está hablando el genoma
1:20:47significa que los genes que sufren el
1:20:51rtin es porque su genoma O Nuestro
1:20:54genoma está mal ya hay dos principales
1:20:58el cambio de C A u y de a a i y es
1:21:03inosina inosina vamos a ver cómo se
1:21:06produce inosina está acá se fijan es muy
1:21:09parecido a la adenina ya entonces la
1:21:12inosina se crea en forma post incripcion
1:21:16por eh deam nación oxidativa de la
1:21:19adenina no es tan
1:21:21Eh no es tan trivial
1:21:25si ustedes van a ciertas páginas de los
1:21:28libros que le di van a ver que hay
1:21:30distribución de diting en distintos
1:21:32organismos de mamíferos hasta
1:21:36flagelados los principales nuestro
1:21:39organismo son de C de aí y hay ejemplos
1:21:43que son dramáticos como la
1:21:45apolipoproteína B la serotonina canales
1:21:49de canales iónicos nuestro como el canal
1:21:53de glutamato ejemplo muy
1:21:55importante Si no existiera Edi
1:21:59probablemente caeríamos en graves
1:22:02enfermedades ya el Edi incluso dentro de
1:22:07las enfermedades asociadas a la
1:22:09deficiencia en editin está también la
1:22:12depresión ya la depresión en fin
1:22:16entonces acá tenemos el Gen en humanos
1:22:19apit B que tiene 29 exones y aquí hay un
1:22:24cambio el codón
1:22:26253 codifica para
1:22:29glutamina pero por de amenazas ocurre un
1:22:33cambio Au u uracilo c auu y esto genera
1:22:38un codon de término se fijan y esto
1:22:41ocurre en hígado y esto en intestino las
1:22:46dos proteínas son
1:22:48importantes pero una entonces tiene
1:22:514563 aminoácidos y la otra
1:22:55253 nadie podría decir que esto es ag
1:22:57arrante es necesario entonces a todo lo
1:23:01que hemos visto antes despl alternativo
1:23:04poción tenemos que sumarle ahora el Edi
1:23:07que es relativamente más escaso pero
1:23:11ocurre en tripanosomas se han visto Como
1:23:15se muestra acá casos
1:23:19dramáticos que si ustedes ven el genoma
1:23:22codificado para esta
1:23:26o sea el genoma codifica para est usted
1:23:29toman la secuencia de la r maduro y la
1:23:33traducen codifica para otra proteína
1:23:36nada que ver O sea que el genoma deosa
1:23:39está equivocado y el nuestro
1:23:42también también hay inserciones y
1:23:45remoción de uracilos hay distintos
1:23:47mecanismos que están todavía en estudio
1:23:50todo lo que está en rojo por ejemplo son
1:23:53inserciones eh de uridin o uracilos como
1:23:57quieran llamarlo hay mecanismos
1:23:59relativamente estudiados con erras guías
1:24:03que parecen que tienen como
1:24:05eh digamos el templado o el molde para
1:24:09hacer la
1:24:10edición que están en todavía en estudio
1:24:14estos rnas guías los rnas guías Entonces
1:24:17serían los que tienen información para
1:24:19saber dónde se produce la edición del la
1:24:22r mensajero y participarían un par de
1:24:25enzimas la endonucleasa y la tutasa y
1:24:28aquí está el her guía apareado con el
1:24:31precursor que ya ha sufrido Plin y todo
1:24:35está casi maduro pero necesita esta
1:24:38edición
1:24:40ya en fin y la otra más abundante en
1:24:44nosotros es el de a a i que utiliza este
1:24:51utiliza unas 10 amenazas hay dos o tres
1:24:54de amenaza en seres humanos y que ellas
1:24:58eh tienen preferencia por rna de doble
1:25:01hebra cuando le renace a parea ahí
1:25:03entonces se produce la edición de a a
1:25:07i se fijan entonces ahí el la edición de
1:25:12a i es catalizada por las rna dou strum
1:25:16de doble hebra a dars se llaman a dars
1:25:19está encima y esto está ya estudiado
1:25:22hasta el 2010
1:25:24más o menos y no ha cambiado el
1:25:27mecanismo es decir el rna adopta esta
1:25:30estructura secundaria y es su trato de
1:25:32la enzima adar que produce los cambios
1:25:35de a a i el I la inosina no cierto es
1:25:40Case un análogo de la guanina entonces
1:25:42lo que antes todo un genoma humano que
1:25:45se secuenció
1:25:46Eh bueno Tiene que tener errores ya y no
1:25:50solo el genoma Humano muchos genomas la
1:25:53secuencia de muchos genomas tienen
1:25:55errores Porque muchos de ellos Podrían
1:25:58haber eh
1:26:00producido errores de secuencia por esta
1:26:05exterran entonces hay que revisar de
1:26:07nuevo cada cierto tiempo la secuencias
1:26:10que están en las bases de datos buscando
1:26:13por ejemplo zonas del rna donde se
1:26:16puedan
1:26:17producir rn de doble hebra porque muy
1:26:21probable que ahí haya
1:26:25ya y la secuencia que nosotros tenemos
1:26:28la base de datos no sea realmente la
1:26:31real ya eh se cree que hay un potencial
1:26:35por ejemplo de
1:26:37429000 potenciales sitios en diferentes
1:26:41genes 14000 genes que sufren en Li
1:26:45todavía no está
1:26:46claro en fin Entonces ya tenemos nuestro
1:26:50renea por fin maduro perfecto no cierto
1:26:54y terminamos Entonces en este complejo
1:26:57ya están todos los factores que hemos
1:26:59visto y todo ocurre en una una
1:27:03traducción translation initiation
1:27:07Complex Pioneer o sea primaria si pasa
1:27:11todos los mecanismos que ya hemos visto
1:27:13Entonces est rna se circulariza por
1:27:17interacciones entre los complejos que se
1:27:20unen al cap al cap y a la la poli y aquí
1:27:26entonces se produce ya una traducción
1:27:29steady State en estado estacionario esta
1:27:32traducción reinicia las veces que sea
1:27:35necesario ya ya pasó todos los momentos
1:27:39críticos y estos se los dejo porque es
1:27:41más o menos lo último que vimos el
1:27:44control legalidad de un erran mensajero
1:27:47Cómo es el control de
1:27:49calidad en base a si tiene o no tiene
1:27:52codones de termin
1:27:54prematuros en ese caso se decapita todo
1:27:58el decap ya degradación completa o si no
1:28:03tiene nada entonces se circulariza y
1:28:08está listo para ser traducido las veces
1:28:10que sea
1:28:11necesario entonces control de calidad y
1:28:15nmd son los mecanismos importante
1:28:19entonces hemos visto ya para terminar no
1:28:22cierto este
1:28:25estos fenómenos C transcripcionales de
1:28:29procesamiento del prna y también de
1:28:33otr acá está nuestra rna polimerasa con
1:28:37su
1:28:40carboxilo y todos los factores de
1:28:42procesamiento que habamos visto que son
1:28:44muchos y esto todo esto Ahora se sabe
1:28:49que
1:28:50está ligado al transporte a la
1:28:52maquinaria de y exportación del
1:28:55rna ya a la maquinaria de vigilancia
1:28:59surveillance
1:29:01vigilancia Y esto es este complejo queos
1:29:05visto desde la polimerasa hasta los
1:29:07factores de nmd es lo que se llama el
1:29:10exosoma lo prepara para pasar a través
1:29:14del poro nuclear ya y llegar al ribosoma
1:29:19que lo está esperando all una
1:29:22cara listo para entonces existe ahora
1:29:26una diamos hipótesis de la expresión
1:29:30génica unificada y todo está
1:29:34unificado transcripción
1:29:37traducción
1:29:39vigilancia cierto control de calidad y
1:29:42exportación al
1:29:45c Okay Qué
1:29:49es
1:29:50perfecto
1:29:52tenemos men
1:29:54minut para
1:30:00preguntas hay preguntas chicos
1:30:04que por mi parte no tengo ninguna
1:30:07pregunta pero igual mucha información
1:30:08que hay que analizar y
1:30:11[Música]
1:30:12reflexionar yo sub un par de
1:30:17libros
1:30:19bu esbro
1:30:24A lo mejor eh lo van a
1:30:26odiar y el otro es más eh más integral
1:30:31yo diría el el brooker ya de todas
1:30:35maneras hay muchas de estas diapo que yo
1:30:37tengo que no están en ningún libro se
1:30:41fijan ustedes están en base a paper
1:30:43review etcétera entonces eh cualquier
1:30:47interrogante pregunta es bien aceptada
1:30:50no hay mayor problema y también están
1:30:52los ayudantes alumnos para este si
1:30:55hubiera posibilidad de hacer un
1:30:58seminario integrativo o algo así me lo
1:31:00avisan aunque sea las 8 de la noche lo
1:31:02hacemos antes de la de la
1:31:06prueba Okay qué más hay en el chat creo
1:31:10que no hay no hay nada por
1:31:13ahora la audiencia ha sido
1:31:17pa Ah entonces la gente que no ha venido
1:31:21a clase bueno Me va a costar
1:31:30muchísimo creo que si no pregunta es
1:31:33todo por
1:31:34ahora y nos despedimos que estén
1:31:39bien Adiós gracias
1:31:45profe est bien chao

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